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1、生物化学及分子生物学专业优秀论文生物化学及分子生物学专业优秀论文 一支箭凝集素一支箭凝集素（OphioglossumOphioglossum PedunculosumPedunculosum DesvDesv AgglutininAgglutinin）的分离纯化及性）的分离纯化及性质研究质研究关键词：一支箭凝集素关键词：一支箭凝集素 分离纯化分离纯化 凝血活性凝血活性 糖专一性糖专一性 变性剂变性剂 荧光光谱荧光光谱 抑菌抑菌 活性活性摘要：一支箭根部经匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱(DEAE- Sepharosc)和 Sephacryl S-100 分子筛层析得到经过 SDS-PA
2、GE 检测为单一条带 的一支箭凝集素(Ophioglossum pedunculosum Desv Agglutinin，OPA)纯品。 其表观分子量为 19.1kDa，亚基分子量为 19.1kDa，表明 OPA.是分子量约为 19.1kDa 的单体蛋白。凝血活性结果表明，OPA 能凝集天然兔血细胞，其凝集兔 血细胞效价为 1.95g/ml。 OPA 还能凝集人 O 型血细胞，但对人 A、B 型血均 不凝集。糖抑制实验表明，甲状腺球蛋白及甘露聚糖能够强烈抑制其活性。 研究了不同温度、pH 和变性剂对 OPA 凝血活性和荧光光谱的变化，凝血活性在 40以下保持相对的稳定性，高于 50，凝血活性逐
3、步丧失，当温度达 90时， OPA 活性大部分丧失，100仍有 20的活性；pH 为 4-9 时 OPA 活性相当稳定， 最适 pH 为 8；当 pH 为 11 时，大部分凝血活性丢失，而 pH 为 2 时仍保留 50 的活性。表明 OPA 对高温，对酸性环境表现出较强的耐受性。 295nm 激发时， 天然 OPA 的最大荧光发射峰在 328nm 处，比游离 Trp 的最大荧光发射峰 348nm 蓝移了 20nm，说明 Trp 周围的极性较弱，位于相对疏水区，并未完全暴露于周 围溶剂中。280nm 激发时，其最大荧光发射峰在 340rim 处，荧光强度增加，说 明 OPA 的内源荧光发生了从
4、Tyr 到 Trp 的能量转移。 研究了氯化铯，碘化钾， 丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对 OPA 的荧光粹灭作用，丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对 OPA 中 Trp 淬灭程度达 100，KI 淬灭约 62.5的 Trp 荧光，而氯化铯基本不能淬 灭 OPA 的荧光，表明几乎所有的色氨酸位于凝集素近分子表面相对疏水的浅沟 或强阳离子区域。 用荧光光谱法研究了变性剂脲，盐酸胍和 SDS 在不同浓度 下对 OPA 构象，发现当浓度逐渐增加时，荧光强度急剧增强。脲、盐酸胍、SDS 对凝集素凝血活性的影响表明，脲对 OPA 的活性没有太大的影响。而随着变性 剂盐酸胍、SDS 浓度的升高，凝血活性逐渐丧失。 NBS 修饰
5、 Trp 过程中，荧 光强度明显降低，最大发射波长开始没有明显变化，随着 Trp 不断被修饰，发 射峰明显蓝移。计算表明大约有 1 个色氨酸残基位于 OPA 分子表面，对凝血活 性有一定的影响。用 2，3-butanedione 修饰精氨酸结果表明，对其修饰后导致 凝血活性丧失 70，精氨酸修饰在#39;维持凝血活性中心或分子构象中 起着一定的作用。用 DEPC 修饰组氨酸以及用 NBSF 修饰酪氨酸，修饰后 OPA 凝 血活性均没有变化，表明这些残基不位于糖结合活性位点或凝血活性中心。 通过抑菌试验，表明一支箭凝集素对玉米絮孢，小麦赤霉等真菌的生长都有抑 制作用，最低的抑制浓度分别为 20g
6、/ml 和 17.5g/ml，但是不影响棉花枯 萎等真菌的生长。正文内容正文内容一支箭根部经匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱(DEAE- Sepharosc)和 Sephacryl S-100 分子筛层析得到经过 SDS-PAGE 检测为单一条带 的一支箭凝集素(Ophioglossum pedunculosum Desv Agglutinin，OPA)纯品。 其表观分子量为 19.1kDa，亚基分子量为 19.1kDa，表明 OPA.是分子量约为 19.1kDa 的单体蛋白。凝血活性结果表明，OPA 能凝集天然兔血细胞，其凝集兔 血细胞效价为 1.95g/ml。 OPA 还能凝集人
7、O 型血细胞，但对人 A、B 型血均 不凝集。糖抑制实验表明，甲状腺球蛋白及甘露聚糖能够强烈抑制其活性。 研究了不同温度、pH 和变性剂对 OPA 凝血活性和荧光光谱的变化，凝血活性在 40以下保持相对的稳定性，高于 50，凝血活性逐步丧失，当温度达 90时， OPA 活性大部分丧失，100仍有 20的活性；pH 为 4-9 时 OPA 活性相当稳定， 最适 pH 为 8；当 pH 为 11 时，大部分凝血活性丢失，而 pH 为 2 时仍保留 50 的活性。表明 OPA 对高温，对酸性环境表现出较强的耐受性。 295nm 激发时， 天然 OPA 的最大荧光发射峰在 328nm 处，比游离 Tr
8、p 的最大荧光发射峰 348nm 蓝移了 20nm，说明 Trp 周围的极性较弱，位于相对疏水区，并未完全暴露于周 围溶剂中。280nm 激发时，其最大荧光发射峰在 340rim 处，荧光强度增加，说 明 OPA 的内源荧光发生了从 Tyr 到 Trp 的能量转移。 研究了氯化铯，碘化钾， 丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对 OPA 的荧光粹灭作用，丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对 OPA 中 Trp 淬灭程度达 100，KI 淬灭约 62.5的 Trp 荧光，而氯化铯基本不能淬 灭 OPA 的荧光，表明几乎所有的色氨酸位于凝集素近分子表面相对疏水的浅沟 或强阳离子区域。 用荧光光谱法研究了变性剂脲，盐酸胍和 SD
9、S 在不同浓度 下对 OPA 构象，发现当浓度逐渐增加时，荧光强度急剧增强。脲、盐酸胍、SDS 对凝集素凝血活性的影响表明，脲对 OPA 的活性没有太大的影响。而随着变性 剂盐酸胍、SDS 浓度的升高，凝血活性逐渐丧失。 NBS 修饰 Trp 过程中，荧 光强度明显降低，最大发射波长开始没有明显变化，随着 Trp 不断被修饰，发 射峰明显蓝移。计算表明大约有 1 个色氨酸残基位于 OPA 分子表面，对凝血活 性有一定的影响。用 2，3-butanedione 修饰精氨酸结果表明，对其修饰后导致 凝血活性丧失 70，精氨酸修饰在#39;维持凝血活性中心或分子构象中 起着一定的作用。用 DEPC
10、修饰组氨酸以及用 NBSF 修饰酪氨酸，修饰后 OPA 凝 血活性均没有变化，表明这些残基不位于糖结合活性位点或凝血活性中心。 通过抑菌试验，表明一支箭凝集素对玉米絮孢，小麦赤霉等真菌的生长都有抑 制作用，最低的抑制浓度分别为 20g/ml 和 17.5g/ml，但是不影响棉花枯 萎等真菌的生长。 一支箭根部经匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱(DEAE-Sepharosc) 和 Sephacryl S-100 分子筛层析得到经过 SDS-PAGE 检测为单一条带的一支箭凝 集素(Ophioglossum pedunculosum Desv Agglutinin，OPA)纯品。其表观分子
11、 量为 19.1kDa，亚基分子量为 19.1kDa，表明 OPA.是分子量约为 19.1kDa 的单 体蛋白。凝血活性结果表明，OPA 能凝集天然兔血细胞，其凝集兔血细胞效价 为 1.95g/ml。 OPA 还能凝集人 O 型血细胞，但对人 A、B 型血均不凝集。糖 抑制实验表明，甲状腺球蛋白及甘露聚糖能够强烈抑制其活性。 研究了不同 温度、pH 和变性剂对 OPA 凝血活性和荧光光谱的变化，凝血活性在 40以下保 持相对的稳定性，高于 50，凝血活性逐步丧失，当温度达 90时，OPA 活性 大部分丧失，100仍有 20的活性；pH 为 4-9 时 OPA 活性相当稳定，最适 pH为 8；当
12、 pH 为 11 时，大部分凝血活性丢失，而 pH 为 2 时仍保留 50的活性。 表明 OPA 对高温，对酸性环境表现出较强的耐受性。 295nm 激发时，天然 OPA 的最大荧光发射峰在 328nm 处，比游离 Trp 的最大荧光发射峰 348nm 蓝移 了 20nm，说明 Trp 周围的极性较弱，位于相对疏水区，并未完全暴露于周围溶 剂中。280nm 激发时，其最大荧光发射峰在 340rim 处，荧光强度增加，说明 OPA 的内源荧光发生了从 Tyr 到 Trp 的能量转移。 研究了氯化铯，碘化钾， 丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对 OPA 的荧光粹灭作用，丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对 OPA 中 Tr
13、p 淬灭程度达 100，KI 淬灭约 62.5的 Trp 荧光，而氯化铯基本不能淬 灭 OPA 的荧光，表明几乎所有的色氨酸位于凝集素近分子表面相对疏水的浅沟 或强阳离子区域。 用荧光光谱法研究了变性剂脲，盐酸胍和 SDS 在不同浓度 下对 OPA 构象，发现当浓度逐渐增加时，荧光强度急剧增强。脲、盐酸胍、SDS 对凝集素凝血活性的影响表明，脲对 OPA 的活性没有太大的影响。而随着变性 剂盐酸胍、SDS 浓度的升高，凝血活性逐渐丧失。 NBS 修饰 Trp 过程中，荧 光强度明显降低，最大发射波长开始没有明显变化，随着 Trp 不断被修饰，发 射峰明显蓝移。计算表明大约有 1 个色氨酸残基位
14、于 OPA 分子表面，对凝血活 性有一定的影响。用 2，3-butanedione 修饰精氨酸结果表明，对其修饰后导致 凝血活性丧失 70，精氨酸修饰在#39;维持凝血活性中心或分子构象中 起着一定的作用。用 DEPC 修饰组氨酸以及用 NBSF 修饰酪氨酸，修饰后 OPA 凝 血活性均没有变化，表明这些残基不位于糖结合活性位点或凝血活性中心。 通过抑菌试验，表明一支箭凝集素对玉米絮孢，小麦赤霉等真菌的生长都有抑 制作用，最低的抑制浓度分别为 20g/ml 和 17.5g/ml，但是不影响棉花枯 萎等真菌的生长。 一支箭根部经匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱(DEAE-Sepharos
15、c) 和 Sephacryl S-100 分子筛层析得到经过 SDS-PAGE 检测为单一条带的一支箭凝 集素(Ophioglossum pedunculosum Desv Agglutinin，OPA)纯品。其表观分子 量为 19.1kDa，亚基分子量为 19.1kDa，表明 OPA.是分子量约为 19.1kDa 的单 体蛋白。凝血活性结果表明，OPA 能凝集天然兔血细胞，其凝集兔血细胞效价 为 1.95g/ml。 OPA 还能凝集人 O 型血细胞，但对人 A、B 型血均不凝集。糖 抑制实验表明，甲状腺球蛋白及甘露聚糖能够强烈抑制其活性。 研究了不同 温度、pH 和变性剂对 OPA 凝血活性
16、和荧光光谱的变化，凝血活性在 40以下保 持相对的稳定性，高于 50，凝血活性逐步丧失，当温度达 90时，OPA 活性 大部分丧失，100仍有 20的活性；pH 为 4-9 时 OPA 活性相当稳定，最适 pH 为 8；当 pH 为 11 时，大部分凝血活性丢失，而 pH 为 2 时仍保留 50的活性。 表明 OPA 对高温，对酸性环境表现出较强的耐受性。 295nm 激发时，天然 OPA 的最大荧光发射峰在 328nm 处，比游离 Trp 的最大荧光发射峰 348nm 蓝移 了 20nm，说明 Trp 周围的极性较弱，位于相对疏水区，并未完全暴露于周围溶 剂中。280nm 激发时，其最大荧光发射峰在 340rim 处，荧光强度增加，说明 OPA 的内源荧光发生了从 Tyr 到 Trp 的能量转移。 研究了氯化铯，碘化钾， 丙烯酰胺和琥珀酰亚胺对 OPA 的荧光粹灭作用，丙烯酰胺和琥
