《氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分q热疫苗的研制及其免疫保护性和安全性初步评价》由会员分享，可在线阅读，更多相关《氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分q热疫苗的研制及其免疫保护性和安全性初步评价（29页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、微生物学专业优秀论文微生物学专业优秀论文 氯仿氯仿- -甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分 Q Q 热热疫苗的研制及其免疫保护性和安全性初步评价疫苗的研制及其免疫保护性和安全性初步评价关键词：贝氏柯克斯体关键词：贝氏柯克斯体 疫苗疫苗 体液免疫体液免疫 细胞免疫细胞免疫 脂肪酸脂肪酸 免疫接种免疫接种 免疫保护免疫保护摘要：贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii，又称 Q 热立克次体)为 Q 热病原体。 该病原体为专性细胞内寄生菌，可通过气溶胶传播，对人和动物的感染性极强， 是一种重要的生物战剂/生物恐怖剂。人、畜对贝氏柯克斯体普遍易感，畜牧相 关从业人员是高危
2、人群。不管是预防贝氏柯克斯体自然感染还是防生物武器/生 物恐怖均需要有效的 Q 热疫苗对易感人群进行免疫接种。 本研究将国内分离 的贝氏柯克斯体新桥株在鸡胚大量繁殖，然后从感染鸡胚中分离、纯化贝氏柯 克斯体，用甲醛灭活纯化贝氏柯克斯体，制备全细胞疫苗(WCV)，同时采用氯仿 -甲醇提取 WCV，制备氯仿-甲醇提取残存组分疫苗(CMR)。采用高压气相色谱测 定了两种疫苗的脂肪酸，发现 CMR 较 WCV 减少了 11 种脂肪酸，其中 4 种为不饱 和脂肪酸，4 种为支链脂肪酸，70为 C 原子数18 的较长链的脂肪酸。另外， 两种疫苗的支链脂肪酸与直链脂肪酸、不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比值也明
3、显不同。通过蛋白单相及双向电泳分析两种疫苗蛋白，它们的蛋白电泳图谱和 主要高丰度蛋白点的蛋白丰度均无明显差异。 采用 CMR 和 WCV 免疫 BALB/c 小鼠，间接免疫荧光法分析免疫小鼠血清特异性抗体水平，结果显示 CMR 与 WCV 一样均能诱导高水平特异性抗体产生。CMR 加 Al(OH)3 佐剂免疫小鼠，该免 疫小鼠特异性抗体水平显著高于 CMR 单独免疫。用 MTT 法体外分析免疫小鼠脾 脏淋巴细胞增殖，结果显示 CMR 诱导小鼠脾脏淋巴细胞增殖水平显著高于 WCV，而 WCV 对小鼠淋巴细胞增殖有一定程度的抑制。免疫小鼠体内、外细胞因 子的测定结果显示，CMR 疫苗能诱导 TNF
4、-、IFN- 及 IL-10 等多种细胞因子 的分泌。 用贝氏柯克斯体相强毒株(包括疫苗制备株和美国分离 Nine Mile 株和欧洲分离的 Henzerling)攻击免疫小鼠，用荧光定量 PCR 分析小鼠脾 脏贝氏柯克斯体的量。结果显示 CMR 与 WCV 一样能有效保护小鼠抵抗贝氏柯克 斯体的攻击。CMR 加 Al(OH)3 佐剂免疫小鼠的脾脏贝氏柯克斯体的量显著少于 CMR 单独免疫。 用大剂量 WCV 免疫小鼠，在接种部位出现皮下结节，小鼠的 脾脏明显肿大，组织病理学检查脾脏有不同程度的网状内皮细胞增生。检查免 疫小鼠肝脏功能指标，ALT 和 AST 均明显升高。而相同大剂量 CMR
5、免疫小鼠则 无上述病理学变化和肝功能损伤。 WCV 疫苗是目前唯一得到美国 FDA 批准 应用的 Q 热疫苗，虽然其具有良好的免疫保护效果，但其明显的副作用使得其 应用受到严格限制。本研究证明采用国内分离株制备的 CMR 疫苗与 WCV 疫苗的 免疫保护效果相当，但是 CMR 疫苗的副作用明显小于 WCV，CMR 疫苗的低毒性是 由于氯仿甲醇提取 WCV 后，清除引起机体损伤的某些脂类或显著降低某些脂 类含量密切有关。CMR 疫苗的良好免疫保护效果与其高效诱导机体的体液和细 胞免疫应答相关。 Q 热疫苗免疫小鼠能部分对抗登革病毒的感染，显示其具 有非特异免疫保护作用。正文内容正文内容贝氏柯克斯
6、体(Coxiella burnetii，又称 Q 热立克次体)为 Q 热病原体。该 病原体为专性细胞内寄生菌，可通过气溶胶传播，对人和动物的感染性极强， 是一种重要的生物战剂/生物恐怖剂。人、畜对贝氏柯克斯体普遍易感，畜牧相 关从业人员是高危人群。不管是预防贝氏柯克斯体自然感染还是防生物武器/生 物恐怖均需要有效的 Q 热疫苗对易感人群进行免疫接种。 本研究将国内分离 的贝氏柯克斯体新桥株在鸡胚大量繁殖，然后从感染鸡胚中分离、纯化贝氏柯 克斯体，用甲醛灭活纯化贝氏柯克斯体，制备全细胞疫苗(WCV)，同时采用氯仿 -甲醇提取 WCV，制备氯仿-甲醇提取残存组分疫苗(CMR)。采用高压气相色谱测
7、定了两种疫苗的脂肪酸，发现 CMR 较 WCV 减少了 11 种脂肪酸，其中 4 种为不饱 和脂肪酸，4 种为支链脂肪酸，70为 C 原子数18 的较长链的脂肪酸。另外， 两种疫苗的支链脂肪酸与直链脂肪酸、不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比值也明 显不同。通过蛋白单相及双向电泳分析两种疫苗蛋白，它们的蛋白电泳图谱和 主要高丰度蛋白点的蛋白丰度均无明显差异。 采用 CMR 和 WCV 免疫 BALB/c 小鼠，间接免疫荧光法分析免疫小鼠血清特异性抗体水平，结果显示 CMR 与 WCV 一样均能诱导高水平特异性抗体产生。CMR 加 Al(OH)3 佐剂免疫小鼠，该免 疫小鼠特异性抗体水平显著高于 CMR
8、 单独免疫。用 MTT 法体外分析免疫小鼠脾 脏淋巴细胞增殖，结果显示 CMR 诱导小鼠脾脏淋巴细胞增殖水平显著高于 WCV，而 WCV 对小鼠淋巴细胞增殖有一定程度的抑制。免疫小鼠体内、外细胞因 子的测定结果显示，CMR 疫苗能诱导 TNF-、IFN- 及 IL-10 等多种细胞因子 的分泌。 用贝氏柯克斯体相强毒株(包括疫苗制备株和美国分离 Nine Mile 株和欧洲分离的 Henzerling)攻击免疫小鼠，用荧光定量 PCR 分析小鼠脾 脏贝氏柯克斯体的量。结果显示 CMR 与 WCV 一样能有效保护小鼠抵抗贝氏柯克 斯体的攻击。CMR 加 Al(OH)3 佐剂免疫小鼠的脾脏贝氏柯克
9、斯体的量显著少于 CMR 单独免疫。 用大剂量 WCV 免疫小鼠，在接种部位出现皮下结节，小鼠的 脾脏明显肿大，组织病理学检查脾脏有不同程度的网状内皮细胞增生。检查免 疫小鼠肝脏功能指标，ALT 和 AST 均明显升高。而相同大剂量 CMR 免疫小鼠则 无上述病理学变化和肝功能损伤。 WCV 疫苗是目前唯一得到美国 FDA 批准 应用的 Q 热疫苗，虽然其具有良好的免疫保护效果，但其明显的副作用使得其 应用受到严格限制。本研究证明采用国内分离株制备的 CMR 疫苗与 WCV 疫苗的 免疫保护效果相当，但是 CMR 疫苗的副作用明显小于 WCV，CMR 疫苗的低毒性是 由于氯仿甲醇提取 WCV
10、后，清除引起机体损伤的某些脂类或显著降低某些脂 类含量密切有关。CMR 疫苗的良好免疫保护效果与其高效诱导机体的体液和细 胞免疫应答相关。 Q 热疫苗免疫小鼠能部分对抗登革病毒的感染，显示其具 有非特异免疫保护作用。 贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii，又称 Q 热立克次体)为 Q 热病原体。该病原 体为专性细胞内寄生菌，可通过气溶胶传播，对人和动物的感染性极强，是一 种重要的生物战剂/生物恐怖剂。人、畜对贝氏柯克斯体普遍易感，畜牧相关从 业人员是高危人群。不管是预防贝氏柯克斯体自然感染还是防生物武器/生物恐 怖均需要有效的 Q 热疫苗对易感人群进行免疫接种。 本研究将国内分离的
11、贝 氏柯克斯体新桥株在鸡胚大量繁殖，然后从感染鸡胚中分离、纯化贝氏柯克斯 体，用甲醛灭活纯化贝氏柯克斯体，制备全细胞疫苗(WCV)，同时采用氯仿-甲 醇提取 WCV，制备氯仿-甲醇提取残存组分疫苗(CMR)。采用高压气相色谱测定了两种疫苗的脂肪酸，发现 CMR 较 WCV 减少了 11 种脂肪酸，其中 4 种为不饱和 脂肪酸，4 种为支链脂肪酸，70为 C 原子数18 的较长链的脂肪酸。另外， 两种疫苗的支链脂肪酸与直链脂肪酸、不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比值也明 显不同。通过蛋白单相及双向电泳分析两种疫苗蛋白，它们的蛋白电泳图谱和 主要高丰度蛋白点的蛋白丰度均无明显差异。 采用 CMR 和 W
12、CV 免疫 BALB/c 小鼠，间接免疫荧光法分析免疫小鼠血清特异性抗体水平，结果显示 CMR 与 WCV 一样均能诱导高水平特异性抗体产生。CMR 加 Al(OH)3 佐剂免疫小鼠，该免 疫小鼠特异性抗体水平显著高于 CMR 单独免疫。用 MTT 法体外分析免疫小鼠脾 脏淋巴细胞增殖，结果显示 CMR 诱导小鼠脾脏淋巴细胞增殖水平显著高于 WCV，而 WCV 对小鼠淋巴细胞增殖有一定程度的抑制。免疫小鼠体内、外细胞因 子的测定结果显示，CMR 疫苗能诱导 TNF-、IFN- 及 IL-10 等多种细胞因子 的分泌。 用贝氏柯克斯体相强毒株(包括疫苗制备株和美国分离 Nine Mile 株和欧
13、洲分离的 Henzerling)攻击免疫小鼠，用荧光定量 PCR 分析小鼠脾 脏贝氏柯克斯体的量。结果显示 CMR 与 WCV 一样能有效保护小鼠抵抗贝氏柯克 斯体的攻击。CMR 加 Al(OH)3 佐剂免疫小鼠的脾脏贝氏柯克斯体的量显著少于 CMR 单独免疫。 用大剂量 WCV 免疫小鼠，在接种部位出现皮下结节，小鼠的 脾脏明显肿大，组织病理学检查脾脏有不同程度的网状内皮细胞增生。检查免 疫小鼠肝脏功能指标，ALT 和 AST 均明显升高。而相同大剂量 CMR 免疫小鼠则 无上述病理学变化和肝功能损伤。 WCV 疫苗是目前唯一得到美国 FDA 批准 应用的 Q 热疫苗，虽然其具有良好的免疫保
14、护效果，但其明显的副作用使得其 应用受到严格限制。本研究证明采用国内分离株制备的 CMR 疫苗与 WCV 疫苗的 免疫保护效果相当，但是 CMR 疫苗的副作用明显小于 WCV，CMR 疫苗的低毒性是 由于氯仿甲醇提取 WCV 后，清除引起机体损伤的某些脂类或显著降低某些脂 类含量密切有关。CMR 疫苗的良好免疫保护效果与其高效诱导机体的体液和细 胞免疫应答相关。 Q 热疫苗免疫小鼠能部分对抗登革病毒的感染，显示其具 有非特异免疫保护作用。 贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii，又称 Q 热立克次体)为 Q 热病原体。该病原 体为专性细胞内寄生菌，可通过气溶胶传播，对人和动物的感染性
15、极强，是一 种重要的生物战剂/生物恐怖剂。人、畜对贝氏柯克斯体普遍易感，畜牧相关从 业人员是高危人群。不管是预防贝氏柯克斯体自然感染还是防生物武器/生物恐 怖均需要有效的 Q 热疫苗对易感人群进行免疫接种。 本研究将国内分离的贝 氏柯克斯体新桥株在鸡胚大量繁殖，然后从感染鸡胚中分离、纯化贝氏柯克斯 体，用甲醛灭活纯化贝氏柯克斯体，制备全细胞疫苗(WCV)，同时采用氯仿-甲 醇提取 WCV，制备氯仿-甲醇提取残存组分疫苗(CMR)。采用高压气相色谱测定 了两种疫苗的脂肪酸，发现 CMR 较 WCV 减少了 11 种脂肪酸，其中 4 种为不饱和 脂肪酸，4 种为支链脂肪酸，70为 C 原子数18
16、的较长链的脂肪酸。另外， 两种疫苗的支链脂肪酸与直链脂肪酸、不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比值也明 显不同。通过蛋白单相及双向电泳分析两种疫苗蛋白，它们的蛋白电泳图谱和 主要高丰度蛋白点的蛋白丰度均无明显差异。 采用 CMR 和 WCV 免疫 BALB/c 小鼠，间接免疫荧光法分析免疫小鼠血清特异性抗体水平，结果显示 CMR 与 WCV 一样均能诱导高水平特异性抗体产生。CMR 加 Al(OH)3 佐剂免疫小鼠，该免 疫小鼠特异性抗体水平显著高于 CMR 单独免疫。用 MTT 法体外分析免疫小鼠脾 脏淋巴细胞增殖，结果显示 CMR 诱导小鼠脾脏淋巴细胞增殖水平显著高于 WCV，而 WCV 对小鼠淋巴细胞增殖有一定程度的抑制。免疫小鼠体内、外细胞因子的测定结果显示，CMR 疫苗能诱导 TNF-、IFN- 及 IL-10 等多种细胞因子 的分泌。 用贝氏柯克斯体相强毒株(包括疫苗制备株和美国分离 Nine Mile 株和欧洲分离的 H
