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1、食品科学专业毕业论文食品科学专业毕业论文 精品论文精品论文 林蛙油小分子肽的制备及其林蛙油小分子肽的制备及其分子量分布研究分子量分布研究关键词：林蛙油关键词：林蛙油 小分子肽小分子肽 分子量分布分子量分布 制备工艺制备工艺摘要：本研究以林蛙油为底物，选用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、 胃蛋白酶和复合蛋白酶分别进行酶解实验，并通过测定每种酶的酶活力，酶解 后底物的水解度(DH)以及酶解液中多肽含量(TCA-SN)和游离氨基氮的含量来判 定各种酶的酶解效果。结果表明木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶的酶活力高于其他蛋 白酶，分别为 510U/mg 和 350U/mg；水解度较高，分别为 12.3和 11
2、.8；酸 溶性多肽的得率相对较高，分别为 43.7和 50.3；并且水解产物中游离氨基 氮的含量较低，分别为 0.42mg/mL 和 0.56mg/mL；综合考虑，本研究选用木瓜 蛋白酶和碱性蛋白酶酶解林蛙油制备活性肽。 采用双酶结合可控酶解技术对 林蛙油进行水解。首先采用木瓜蛋白酶对底物进行水解，利用单因素试验考察 了底物浓度、加酶量、水解温度、pH 值和酶解时间对底物的水解度及产物中酸 溶性多肽含量的影响，并筛选出对其影响显著的因素进行 Box-Behnken 中心组 合设计和响应面分析，对酶解反应的主要影响因素进行多项式回归模型建立和 最优化，确定了木瓜蛋白酶酶解底物的最佳工艺条件为：温
3、度 60，pH 值 6.5，底物浓度 1，酶用量(E/S)为 1.5，酶水解时间 3.0h。在此酶酶解的 基础上，进一步采用碱性蛋白酶进行水解，同样在单因素实验的基础上，运用 Box-Behnken 中心组合设计和响应面分析，确定了碱性蛋白酶酶解的最佳工艺 条件为：加酶量(E/S)为 0.875，温度 50，pH 值为 8.0，水解时间 3.0h。 底物水解度和酸溶性多肽的含量分别达到 18.4和 78.6，比单酶酶解分别提 高了 5.6和 30.2。 酶解物经 Sephadex G-15 凝胶柱分离，木瓜蛋白酶酶 解物中多肽分子量在 300-1355Da 之间的占总洗脱峰面积的 41.3；大
4、于 1355Da 的占 38；小于 300Da 的占 20.7。碱性蛋白酶酶解物中多肽分子量 在 300-1355Da 之间的占总洗脱峰面积的 38.2；大于 1355Da 的占 42.6；小 于 300Da 的占 19.2。双酶结合酶解物中多肽分子量在 300-1355Da 之间的占 总洗脱峰面积的 52.6；大于 1355Da 的占 31.5；小于 300Da 的占 15.9。 将分布在 300-1355Da 之间的物质，利用高效液相色谱分析，在峰图上出现三个 高低不同的色谱峰，保留时间依次为 21.837min、23.300min 和 24.499min，其 中保留时间在 23.300m
5、in 时对应的物质含量最大。经基质辅助激光解吸电离飞 行时间质谱仪分析，水解液中含有四种不同分子量的肽类物质，其分子量分别 为：712.4Da、826.6Da、1101.2Da 和 1326.1Da。正文内容正文内容本研究以林蛙油为底物，选用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胃 蛋白酶和复合蛋白酶分别进行酶解实验，并通过测定每种酶的酶活力，酶解后 底物的水解度(DH)以及酶解液中多肽含量(TCA-SN)和游离氨基氮的含量来判定 各种酶的酶解效果。结果表明木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶的酶活力高于其他蛋白 酶，分别为 510U/mg 和 350U/mg；水解度较高，分别为 12.3和 11.8；酸溶
6、性多肽的得率相对较高，分别为 43.7和 50.3；并且水解产物中游离氨基氮 的含量较低，分别为 0.42mg/mL 和 0.56mg/mL；综合考虑，本研究选用木瓜蛋 白酶和碱性蛋白酶酶解林蛙油制备活性肽。 采用双酶结合可控酶解技术对林 蛙油进行水解。首先采用木瓜蛋白酶对底物进行水解，利用单因素试验考察了 底物浓度、加酶量、水解温度、pH 值和酶解时间对底物的水解度及产物中酸溶 性多肽含量的影响，并筛选出对其影响显著的因素进行 Box-Behnken 中心组合 设计和响应面分析，对酶解反应的主要影响因素进行多项式回归模型建立和最 优化，确定了木瓜蛋白酶酶解底物的最佳工艺条件为：温度 60，p
7、H 值 6.5， 底物浓度 1，酶用量(E/S)为 1.5，酶水解时间 3.0h。在此酶酶解的基础上， 进一步采用碱性蛋白酶进行水解，同样在单因素实验的基础上，运用 Box- Behnken 中心组合设计和响应面分析，确定了碱性蛋白酶酶解的最佳工艺条件 为：加酶量(E/S)为 0.875，温度 50，pH 值为 8.0，水解时间 3.0h。底物 水解度和酸溶性多肽的含量分别达到 18.4和 78.6，比单酶酶解分别提高了 5.6和 30.2。 酶解物经 Sephadex G-15 凝胶柱分离，木瓜蛋白酶酶解物 中多肽分子量在 300-1355Da 之间的占总洗脱峰面积的 41.3；大于 135
8、5Da 的 占 38；小于 300Da 的占 20.7。碱性蛋白酶酶解物中多肽分子量在 300- 1355Da 之间的占总洗脱峰面积的 38.2；大于 1355Da 的占 42.6；小于 300Da 的占 19.2。双酶结合酶解物中多肽分子量在 300-1355Da 之间的占总洗 脱峰面积的 52.6；大于 1355Da 的占 31.5；小于 300Da 的占 15.9。 将分布在 300-1355Da 之间的物质，利用高效液相色谱分析，在峰图上出现三个 高低不同的色谱峰，保留时间依次为 21.837min、23.300min 和 24.499min，其 中保留时间在 23.300min 时对
9、应的物质含量最大。经基质辅助激光解吸电离飞 行时间质谱仪分析，水解液中含有四种不同分子量的肽类物质，其分子量分别 为：712.4Da、826.6Da、1101.2Da 和 1326.1Da。 本研究以林蛙油为底物，选用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胃蛋白 酶和复合蛋白酶分别进行酶解实验，并通过测定每种酶的酶活力，酶解后底物 的水解度(DH)以及酶解液中多肽含量(TCA-SN)和游离氨基氮的含量来判定各种 酶的酶解效果。结果表明木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶的酶活力高于其他蛋白酶， 分别为 510U/mg 和 350U/mg；水解度较高，分别为 12.3和 11.8；酸溶性多 肽的得率相对较高，分
10、别为 43.7和 50.3；并且水解产物中游离氨基氮的含 量较低，分别为 0.42mg/mL 和 0.56mg/mL；综合考虑，本研究选用木瓜蛋白酶 和碱性蛋白酶酶解林蛙油制备活性肽。 采用双酶结合可控酶解技术对林蛙油 进行水解。首先采用木瓜蛋白酶对底物进行水解，利用单因素试验考察了底物 浓度、加酶量、水解温度、pH 值和酶解时间对底物的水解度及产物中酸溶性多 肽含量的影响，并筛选出对其影响显著的因素进行 Box-Behnken 中心组合设计 和响应面分析，对酶解反应的主要影响因素进行多项式回归模型建立和最优化， 确定了木瓜蛋白酶酶解底物的最佳工艺条件为：温度 60，pH 值 6.5，底物浓度
11、 1，酶用量(E/S)为 1.5，酶水解时间 3.0h。在此酶酶解的基础上，进一 步采用碱性蛋白酶进行水解，同样在单因素实验的基础上，运用 Box-Behnken 中心组合设计和响应面分析，确定了碱性蛋白酶酶解的最佳工艺条件为：加酶 量(E/S)为 0.875，温度 50，pH 值为 8.0，水解时间 3.0h。底物水解度和 酸溶性多肽的含量分别达到 18.4和 78.6，比单酶酶解分别提高了 5.6和 30.2。 酶解物经 Sephadex G-15 凝胶柱分离，木瓜蛋白酶酶解物中多肽分 子量在 300-1355Da 之间的占总洗脱峰面积的 41.3；大于 1355Da 的占 38； 小于
12、300Da 的占 20.7。碱性蛋白酶酶解物中多肽分子量在 300-1355Da 之间 的占总洗脱峰面积的 38.2；大于 1355Da 的占 42.6；小于 300Da 的占 19.2。双酶结合酶解物中多肽分子量在 300-1355Da 之间的占总洗脱峰面积的 52.6；大于 1355Da 的占 31.5；小于 300Da 的占 15.9。 将分布在 300-1355Da 之间的物质，利用高效液相色谱分析，在峰图上出现三个高低不同 的色谱峰，保留时间依次为 21.837min、23.300min 和 24.499min，其中保留时 间在 23.300min 时对应的物质含量最大。经基质辅助激
13、光解吸电离飞行时间质 谱仪分析，水解液中含有四种不同分子量的肽类物质，其分子量分别为： 712.4Da、826.6Da、1101.2Da 和 1326.1Da。 本研究以林蛙油为底物，选用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胃蛋白 酶和复合蛋白酶分别进行酶解实验，并通过测定每种酶的酶活力，酶解后底物 的水解度(DH)以及酶解液中多肽含量(TCA-SN)和游离氨基氮的含量来判定各种 酶的酶解效果。结果表明木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶的酶活力高于其他蛋白酶， 分别为 510U/mg 和 350U/mg；水解度较高，分别为 12.3和 11.8；酸溶性多 肽的得率相对较高，分别为 43.7和 50.3；并
14、且水解产物中游离氨基氮的含 量较低，分别为 0.42mg/mL 和 0.56mg/mL；综合考虑，本研究选用木瓜蛋白酶 和碱性蛋白酶酶解林蛙油制备活性肽。 采用双酶结合可控酶解技术对林蛙油 进行水解。首先采用木瓜蛋白酶对底物进行水解，利用单因素试验考察了底物 浓度、加酶量、水解温度、pH 值和酶解时间对底物的水解度及产物中酸溶性多 肽含量的影响，并筛选出对其影响显著的因素进行 Box-Behnken 中心组合设计 和响应面分析，对酶解反应的主要影响因素进行多项式回归模型建立和最优化， 确定了木瓜蛋白酶酶解底物的最佳工艺条件为：温度 60，pH 值 6.5，底物浓 度 1，酶用量(E/S)为 1
15、.5，酶水解时间 3.0h。在此酶酶解的基础上，进一 步采用碱性蛋白酶进行水解，同样在单因素实验的基础上，运用 Box-Behnken 中心组合设计和响应面分析，确定了碱性蛋白酶酶解的最佳工艺条件为：加酶 量(E/S)为 0.875，温度 50，pH 值为 8.0，水解时间 3.0h。底物水解度和 酸溶性多肽的含量分别达到 18.4和 78.6，比单酶酶解分别提高了 5.6和 30.2。 酶解物经 Sephadex G-15 凝胶柱分离，木瓜蛋白酶酶解物中多肽分 子量在 300-1355Da 之间的占总洗脱峰面积的 41.3；大于 1355Da 的占 38； 小于 300Da 的占 20.7。
16、碱性蛋白酶酶解物中多肽分子量在 300-1355Da 之间 的占总洗脱峰面积的 38.2；大于 1355Da 的占 42.6；小于 300Da 的占 19.2。双酶结合酶解物中多肽分子量在 300-1355Da 之间的占总洗脱峰面积的 52.6；大于 1355Da 的占 31.5；小于 300Da 的占 15.9。 将分布在 300-1355Da 之间的物质，利用高效液相色谱分析，在峰图上出现三个高低不同 的色谱峰，保留时间依次为 21.837min、23.300min 和 24.499min，其中保留时 间在 23.300min 时对应的物质含量最大。经基质辅助激光解吸电离飞行时间质 谱仪分析，水解液中含有四种不同分子量的肽类物质，其分子量分别为：712.4Da、826.6Da、1101.2Da 和 1326.1Da。 本研究以林
