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1、普外科学专业优秀论文普外科学专业优秀论文 CD40CD40 分子在人宫颈癌组织中表达的临床意分子在人宫颈癌组织中表达的临床意义及义及 CD40CD40 信号对宫颈癌细胞株信号对宫颈癌细胞株 SiHaSiHa 体外的生物学效应体外的生物学效应关键词：关键词：CD40CD40 分子分子 宫颈癌宫颈癌 免疫组织化学免疫组织化学 单克隆抗体单克隆抗体 化疗敏感性化疗敏感性 生物学效生物学效 应应摘要：子宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位， 仅次于乳腺癌。近几年国内外报道宫颈癌的发病率和病死率有年轻化的倾向， 35 岁以下的妇女宫颈癌发病率明显上升。因此对宫颈癌病因、发病机制的研
2、究， 以及寻求更敏感的宫颈癌早期诊断、更有效的治疗方法成为非常必要。 CD40 是分子量 48KD 的细胞表面分子，表达于许多类型细胞中，包括 B 细胞、树突状 细胞、单核细胞、内皮细胞以及一系列肿瘤细胞。CD40 属于肿瘤坏死因子受体 （TNFR）超家族成员。CD40 分子的配体 CD40L 主要表达于活化的 CD4+T 辅助 （Th）细胞。CD40L/CD40 相互作用是特异性免疫应答及其过程中主要的协同刺 激信号。大量研究表明，CD40 分子可以介导 B 细胞的增殖、分化、抗体分泌及 其类型转换、树突状细胞的激发及分化成熟，内皮细胞粘附分子的改变，炎症 因子的释放以及白细胞在炎症部位的聚
3、集等。这表明 CD40 是免疫反应中的重要 分子。 本研究主要探讨 CD40 及其相关分子在宫颈癌组织上的表达及其临床 生物学意义；讨论宫颈癌细胞株 SiHah 表达 CD40 及其生物学影响；CD40 对用 于宫颈癌治疗的化疗药物敏感性的影响。期望寻找宫颈癌肿瘤个性化免疫治疗 的新方案。 一、CD40 及其相关分子在宫颈癌中的表达及生物学意义目的： 研究宫颈癌组织中 CD40 分子的表达、并探讨其与宫颈癌侵袭、淋巴结转移等生 物学行为的相关性，分析 HPV16/18E6、p16INK4a、VEGF、CD34 分子在宫颈癌组 织中的表达及其与 CD40 表达的相关性。方法：采用免疫组织化学方法
4、，对 239 例宫颈组织标本切片（包括正常子宫颈组织 38 例，慢性宫颈炎 43 例，宫颈上 皮内瘤变 CIN级 36 例，CIN级 39 例，CIN级 27 例，宫颈鳞状上皮癌 56 例）检测 CD40 分子的表达；同时检测了 HPV16/18E6、p16INK4a、VEGF、CD34 在宫颈组织中的表达。结果：CD40 分子在正常宫颈组织、慢性宫颈炎组织和 CIN上不表达或弱表达，而 CIN和宫颈癌组织上表达明显增加，阳性率 分别达 55.55%和 67.86%，差异有显著性（plt;0.01） 。CD40 分子在宫颈 癌中的表达与宫颈癌的 FIGO 临床分期（r=0.05，pgt;0.0
5、5） 、病理分级 （r=0.12，pgt;0.05）无相关性，而与肿瘤肌层浸润深度 （r=0.44，plt;0.01） 、有无淋巴转移（r=0.30，plt;0.05）有明显 的相关性。宫颈癌组织中 HPV16/18E6、p16INK4a、VEGF 分子表达均较正常组织 高（78.60、80.36%、87.50%） 。CD34MVD 在宫颈癌组织上表达为 27.0210.68，明显较其它各组增高（plt;0.001） 。HPV16/18E6 阳性 表达的宫颈 CIN组织中，P16INK4a 表达阳性者占 90.47%，HPV16/18E6 阳性表达的宫颈癌组织中，P16INK4a 表达阳性达
6、97.72%，因此 P16INK4a 在宫 颈 CIN及宫颈癌中的表达和 HPV16/18E6 的阳性表达有明显的相关性 （r=0.362，plt;0.05；r=0.837，plt;0.01） 。CD40 分子的表达和 P16INK4a 的表达呈正相关（r=0.52，plt;0.01） ；和 HPV16/18E6、VEGF 以及 CD34MVD 的表达亦有一定的正相关性 （r=0.57，plt;0.01；r=0.32，plt;0.05；r=0.37，plt;0.05） 。结论：CD40 可作为宫颈癌诊断、预后和淋巴结转移评估的客观指标。CD40 分子表达与抑癌基因 p16INK4a、HPV16
7、/18E6 以及 VEGF 和 CD34MVD 的表达有 一定的正相关性，由此提示 CD40 分子在宫颈癌的发生、发展过程中可能起着非 常重要的作用。 二、激发型 CD40 单抗对宫颈癌细胞株体外增殖和化学药物 敏感性的作用目的：研究 CD40 分子激发对宫颈癌细胞 SiHa 化疗敏感性的影响 及其机制。 方法：采用流式细胞术检测宫颈癌细胞 SiHa 上 CD40 分子的表达， MTT 法检测 CD40 单抗（5C11）联合化疗药物对 SiHa 细胞的作用，PI 染色检测 SiHa 细胞周期的变化，AnnexinPI 法检测细胞凋亡、RealtimePCR 方法 分析单抗 5C11 作用 Si
8、Ha 细胞后凋亡基因表达水平变化。结果：宫颈癌 SiHa 细 胞表面 CD40 表达率为 96.0%，SiHa 细胞经 5C11 作用后出现 G2/M 期阻滞，5C11 和化疗药物盐酸吉西他滨（Gemcitabin）各自抑制细胞生长作用不明显，但两 者联合能显著抑制 SiHa 的生长和促进凋亡。SiHa 细胞在和 5C11 作用 24 小时 后，抗调亡基因 BCLXL 的表达明显下调，促调亡基因 BAX 的上调作用不明显。 结论：CD40 分子通过介导 G2/M 期阻滞和调节凋亡基因表达水平增加 SiHa 细胞 对肿瘤化疗药物盐酸吉西他滨敏感性。正文内容正文内容子宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，发
9、病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅 次于乳腺癌。近几年国内外报道宫颈癌的发病率和病死率有年轻化的倾向，35 岁以下的妇女宫颈癌发病率明显上升。因此对宫颈癌病因、发病机制的研究， 以及寻求更敏感的宫颈癌早期诊断、更有效的治疗方法成为非常必要。 CD40 是分子量 48KD 的细胞表面分子，表达于许多类型细胞中，包括 B 细胞、树突状 细胞、单核细胞、内皮细胞以及一系列肿瘤细胞。CD40 属于肿瘤坏死因子受体 （TNFR）超家族成员。CD40 分子的配体 CD40L 主要表达于活化的 CD4+T 辅助 （Th）细胞。CD40L/CD40 相互作用是特异性免疫应答及其过程中主要的协同刺 激信号。大量研
10、究表明，CD40 分子可以介导 B 细胞的增殖、分化、抗体分泌及 其类型转换、树突状细胞的激发及分化成熟，内皮细胞粘附分子的改变，炎症 因子的释放以及白细胞在炎症部位的聚集等。这表明 CD40 是免疫反应中的重要 分子。 本研究主要探讨 CD40 及其相关分子在宫颈癌组织上的表达及其临床 生物学意义；讨论宫颈癌细胞株 SiHah 表达 CD40 及其生物学影响；CD40 对用 于宫颈癌治疗的化疗药物敏感性的影响。期望寻找宫颈癌肿瘤个性化免疫治疗 的新方案。 一、CD40 及其相关分子在宫颈癌中的表达及生物学意义目的： 研究宫颈癌组织中 CD40 分子的表达、并探讨其与宫颈癌侵袭、淋巴结转移等生
11、 物学行为的相关性，分析 HPV16/18E6、p16INK4a、VEGF、CD34 分子在宫颈癌组 织中的表达及其与 CD40 表达的相关性。方法：采用免疫组织化学方法，对 239 例宫颈组织标本切片（包括正常子宫颈组织 38 例，慢性宫颈炎 43 例，宫颈上 皮内瘤变 CIN级 36 例，CIN级 39 例，CIN级 27 例，宫颈鳞状上皮癌 56 例）检测 CD40 分子的表达；同时检测了 HPV16/18E6、p16INK4a、VEGF、CD34 在宫颈组织中的表达。结果：CD40 分子在正常宫颈组织、慢性宫颈炎组织和 CIN上不表达或弱表达，而 CIN和宫颈癌组织上表达明显增加，阳性
12、率 分别达 55.55%和 67.86%，差异有显著性（plt;0.01） 。CD40 分子在宫颈 癌中的表达与宫颈癌的 FIGO 临床分期（r=0.05，pgt;0.05） 、病理分级 （r=0.12，pgt;0.05）无相关性，而与肿瘤肌层浸润深度 （r=0.44，plt;0.01） 、有无淋巴转移（r=0.30，plt;0.05）有明显 的相关性。宫颈癌组织中 HPV16/18E6、p16INK4a、VEGF 分子表达均较正常组织 高（78.60、80.36%、87.50%） 。CD34MVD 在宫颈癌组织上表达为 27.0210.68，明显较其它各组增高（plt;0.001） 。HPV
13、16/18E6 阳性 表达的宫颈 CIN组织中，P16INK4a 表达阳性者占 90.47%，HPV16/18E6 阳性表达的宫颈癌组织中，P16INK4a 表达阳性达 97.72%，因此 P16INK4a 在宫 颈 CIN及宫颈癌中的表达和 HPV16/18E6 的阳性表达有明显的相关性 （r=0.362，plt;0.05；r=0.837，plt;0.01） 。CD40 分子的表达和 P16INK4a 的表达呈正相关（r=0.52，plt;0.01） ；和 HPV16/18E6、VEGF 以及 CD34MVD 的表达亦有一定的正相关性 （r=0.57，plt;0.01；r=0.32，plt;
14、0.05；r=0.37，plt;0.05 ） 。结论：CD40 可作为宫颈癌诊断、预后和淋巴结转移评估的客观指标。CD40 分子表达与抑癌基因 p16INK4a、HPV16/18E6 以及 VEGF 和 CD34MVD 的表达有 一定的正相关性，由此提示 CD40 分子在宫颈癌的发生、发展过程中可能起着非 常重要的作用。 二、激发型 CD40 单抗对宫颈癌细胞株体外增殖和化学药物 敏感性的作用目的：研究 CD40 分子激发对宫颈癌细胞 SiHa 化疗敏感性的影响及其机制。 方法：采用流式细胞术检测宫颈癌细胞 SiHa 上 CD40 分子的表达， MTT 法检测 CD40 单抗（5C11）联合化
15、疗药物对 SiHa 细胞的作用，PI 染色检测 SiHa 细胞周期的变化，AnnexinPI 法检测细胞凋亡、RealtimePCR 方法 分析单抗 5C11 作用 SiHa 细胞后凋亡基因表达水平变化。结果：宫颈癌 SiHa 细 胞表面 CD40 表达率为 96.0%，SiHa 细胞经 5C11 作用后出现 G2/M 期阻滞，5C11 和化疗药物盐酸吉西他滨（Gemcitabin）各自抑制细胞生长作用不明显，但两 者联合能显著抑制 SiHa 的生长和促进凋亡。SiHa 细胞在和 5C11 作用 24 小时 后，抗调亡基因 BCLXL 的表达明显下调，促调亡基因 BAX 的上调作用不明显。 结
16、论：CD40 分子通过介导 G2/M 期阻滞和调节凋亡基因表达水平增加 SiHa 细胞 对肿瘤化疗药物盐酸吉西他滨敏感性。 子宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅次于 乳腺癌。近几年国内外报道宫颈癌的发病率和病死率有年轻化的倾向，35 岁以 下的妇女宫颈癌发病率明显上升。因此对宫颈癌病因、发病机制的研究，以及 寻求更敏感的宫颈癌早期诊断、更有效的治疗方法成为非常必要。 CD40 是 分子量 48KD 的细胞表面分子，表达于许多类型细胞中，包括 B 细胞、树突状细 胞、单核细胞、内皮细胞以及一系列肿瘤细胞。CD40 属于肿瘤坏死因子受体 （TNFR）超家族成员。CD40 分子的配体 CD40L 主要表达于活化的 CD4+T 辅助 （Th）细胞。CD40L/CD40 相互作用是特异性免疫应答及其过程中主要的协同刺 激信号。大量研究表明，CD40 分子可以介导 B 细胞的增殖、分化、抗体分泌及 其类型转换、树突状
