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1、生物化学与分子生物学专业毕业论文生物化学与分子生物学专业毕业论文 精品论文精品论文 文蛤多肽的研文蛤多肽的研究与应用究与应用关键词：文蛤多肽关键词：文蛤多肽 抗癌作用抗癌作用 抗氧化作用抗氧化作用 美白作用美白作用摘要：癌症是目前死亡率最高的疾病，是名副其实的“头号杀手” 。从天然生物 中筛选出能与癌症发生、发展、形成等过程中各调节靶点特异结合的活性成分， 已成为寻找抗癌药物的新热点。目前各国学者采用现代科学方法与技术从海洋 生物中分离和鉴定出了多种具有抗肿瘤活性的天然物质，为研制开发抗肿瘤新 药奠定了基础，显示出诱人的研究开发前景，从海洋生物及其代谢产物中筛选 和提取具有特异化学结构的天然活
2、性物质成为抗肿瘤药物开发的重要来源。文 蛤(Meretrixmeretrix Linnaeus)作为一种深受人们喜爱的海洋软体动物，不仅 具有丰富的营养价值，更是有着极高的药用价值。古往今来，文蛤的药用价值 一直深受人们的重视，它具有清热利湿、化痰、散结的功效，对肿瘤细胞有明 显的抑制作用，还具有降血糖，降血脂，抗衰老等多种生理功能。其有效成分 及生理作用受到越来越广泛的关注。 本研究采用破碎、硫酸铵沉淀、乙醇抽 提、Sephadex G-25 分子筛层析等方法从文蛤中提取得到四个峰的物质，利用 MTT 法分别检测各峰体外对癌细胞的抑制效应，发现第二峰的物质能抑制癌细 胞的生长，将此活性物质命
3、名为 Mer2；发现第一个峰的物质能抑制酪氨酸酶的 活性，减少黑素的形成，命名 Mer1。 将 Mer2 处理肝癌 HePG2 细胞、胆管癌 QBC939、宫颈癌 Hela 细胞、肺腺癌细胞 SPC-A-1、L，TEP-a-2，观察研究 Mer2 对癌细胞的生物学效应并进一步探索其抑制癌细胞生长的作用机理。结果表明， Mer2 对五种细胞均有不同程度的抑制作用，但对正常的人肝 chang-liver 细胞 抑制作用很小。当浓度大于 10g/mL 时，作用时间为 72 h 时，对肝癌 HePG2 细胞和胆管癌 QBC939 的抑制率便超过了 50，其中对肝癌 HePG2 细胞的抑制 作用更强一些
4、。通过光学显微镜和流式细胞技术等方法，研究了文蛤多肽对体 外培养的肝癌 HePG2 细胞和胆管癌 QBC939 的细胞形态、细胞周期的影响。结果 表明：Mer2 处理后的细胞外形变化明显，贴壁细胞数量减少，出现了单个细胞 的悬浮生长，细胞的集落化程度降低，细胞群体数量显著降低，出现了凋亡小 体。细胞周期的检测结果说明，经 Mer2 处理的肝癌 HePG2 细胞周期发生明显变 化，出现明显的凋亡峰，但细胞周期未出现明显阻滞现象。表明文蛤多肽对癌 细胞的生长抑制作用与细胞凋亡有关。 进一步研究文蛤抗癌多肽抑制癌细胞 的分子机制，我们利用蛋白组学双向电泳技术初步探讨了在经 Mer2 作用前后肝 癌
5、HePG2 细胞蛋白表达的变化，以期为后续的研究提供理论基础。通过图谱分 析找到 89 个差异蛋白，其中 66 个表达下调，23 个表达上调。对其中部分差异 较明显的点进行了鉴定，最终鉴定出 9 种差异蛋白。其中 7 个蛋白表达下调， 2 个蛋白表达上调。肝癌细胞：HePG2 表达的差异蛋白种类涵盖了从细胞结构到 细胞生理调控的各个方面。对差异点进行鉴定后发现，差异蛋白有锌指蛋白 (Zinc finger protein624)，膜联蛋白(Annexin A2)，细胞骨架蛋白 (keratin1，type II，cytoskeletal)，分子伴侣蛋白(TCP-1-beta)，线粒体核 糖体蛋
6、白(mitochondrial ribosomal protein L27)，DNA 修复蛋白，肿瘤抑抑 制蛋白以及其他的蛋白等，并对部分差异点的功能进行了初步探讨。 采用动 力学研究方法，体外研究了 Mer1 对蘑菇酪氨酸酶(Tyrosinase)活力的影响。结果表明 Mer1 对酪氨酸酶有较强的抑制作用，抑制过程呈浓度的关系，抑制作用 是一种可逆过程，为反竞争性抑制，使酶活力丧失 50的抑制剂浓度(IC50)为 95g/mL，抑制常数(KIS)为 60.98g/mL。我们还研究了 Mer1 对小鼠黑素瘤 B16 生长的影响，发现 Mer1 不会抑制黑色素瘤细胞的生长，能降低细胞内酪氨 酸酶
7、的活性和黑色素的含量，具有清除自由基的能力，具有一定的抗氧化活性 是一种安全无毒副作用的美白添加剂，具有潜在的防止褐斑、美白肌肤的作用。正文内容正文内容癌症是目前死亡率最高的疾病，是名副其实的“头号杀手” 。从天然生物中 筛选出能与癌症发生、发展、形成等过程中各调节靶点特异结合的活性成分， 已成为寻找抗癌药物的新热点。目前各国学者采用现代科学方法与技术从海洋 生物中分离和鉴定出了多种具有抗肿瘤活性的天然物质，为研制开发抗肿瘤新 药奠定了基础，显示出诱人的研究开发前景，从海洋生物及其代谢产物中筛选 和提取具有特异化学结构的天然活性物质成为抗肿瘤药物开发的重要来源。文 蛤(Meretrixmere
8、trix Linnaeus)作为一种深受人们喜爱的海洋软体动物，不仅 具有丰富的营养价值，更是有着极高的药用价值。古往今来，文蛤的药用价值 一直深受人们的重视，它具有清热利湿、化痰、散结的功效，对肿瘤细胞有明 显的抑制作用，还具有降血糖，降血脂，抗衰老等多种生理功能。其有效成分 及生理作用受到越来越广泛的关注。 本研究采用破碎、硫酸铵沉淀、乙醇抽 提、Sephadex G-25 分子筛层析等方法从文蛤中提取得到四个峰的物质，利用 MTT 法分别检测各峰体外对癌细胞的抑制效应，发现第二峰的物质能抑制癌细 胞的生长，将此活性物质命名为 Mer2；发现第一个峰的物质能抑制酪氨酸酶的 活性，减少黑素的
9、形成，命名 Mer1。 将 Mer2 处理肝癌 HePG2 细胞、胆管癌 QBC939、宫颈癌 Hela 细胞、肺腺癌细胞 SPC-A-1、L，TEP-a-2，观察研究 Mer2 对癌细胞的生物学效应并进一步探索其抑制癌细胞生长的作用机理。结果表明， Mer2 对五种细胞均有不同程度的抑制作用，但对正常的人肝 chang-liver 细胞 抑制作用很小。当浓度大于 10g/mL 时，作用时间为 72 h 时，对肝癌 HePG2 细胞和胆管癌 QBC939 的抑制率便超过了 50，其中对肝癌 HePG2 细胞的抑制 作用更强一些。通过光学显微镜和流式细胞技术等方法，研究了文蛤多肽对体 外培养的肝
10、癌 HePG2 细胞和胆管癌 QBC939 的细胞形态、细胞周期的影响。结果 表明：Mer2 处理后的细胞外形变化明显，贴壁细胞数量减少，出现了单个细胞 的悬浮生长，细胞的集落化程度降低，细胞群体数量显著降低，出现了凋亡小 体。细胞周期的检测结果说明，经 Mer2 处理的肝癌 HePG2 细胞周期发生明显变 化，出现明显的凋亡峰，但细胞周期未出现明显阻滞现象。表明文蛤多肽对癌 细胞的生长抑制作用与细胞凋亡有关。 进一步研究文蛤抗癌多肽抑制癌细胞 的分子机制，我们利用蛋白组学双向电泳技术初步探讨了在经 Mer2 作用前后肝 癌 HePG2 细胞蛋白表达的变化，以期为后续的研究提供理论基础。通过图
11、谱分 析找到 89 个差异蛋白，其中 66 个表达下调，23 个表达上调。对其中部分差异 较明显的点进行了鉴定，最终鉴定出 9 种差异蛋白。其中 7 个蛋白表达下调， 2 个蛋白表达上调。肝癌细胞：HePG2 表达的差异蛋白种类涵盖了从细胞结构到 细胞生理调控的各个方面。对差异点进行鉴定后发现，差异蛋白有锌指蛋白 (Zinc finger protein624)，膜联蛋白(Annexin A2)，细胞骨架蛋白 (keratin1，type II，cytoskeletal)，分子伴侣蛋白(TCP-1-beta)，线粒体核 糖体蛋白(mitochondrial ribosomal protein
12、L27)，DNA 修复蛋白，肿瘤抑抑 制蛋白以及其他的蛋白等，并对部分差异点的功能进行了初步探讨。 采用动 力学研究方法，体外研究了 Mer1 对蘑菇酪氨酸酶(Tyrosinase)活力的影响。结 果表明 Mer1 对酪氨酸酶有较强的抑制作用，抑制过程呈浓度的关系，抑制作用 是一种可逆过程，为反竞争性抑制，使酶活力丧失 50的抑制剂浓度(IC50)为 95g/mL，抑制常数(KIS)为 60.98g/mL。我们还研究了 Mer1 对小鼠黑素瘤 B16 生长的影响，发现 Mer1 不会抑制黑色素瘤细胞的生长，能降低细胞内酪氨酸酶的活性和黑色素的含量，具有清除自由基的能力，具有一定的抗氧化活性 是
13、一种安全无毒副作用的美白添加剂，具有潜在的防止褐斑、美白肌肤的作用。癌症是目前死亡率最高的疾病，是名副其实的“头号杀手” 。从天然生物中筛选 出能与癌症发生、发展、形成等过程中各调节靶点特异结合的活性成分，已成 为寻找抗癌药物的新热点。目前各国学者采用现代科学方法与技术从海洋生物 中分离和鉴定出了多种具有抗肿瘤活性的天然物质，为研制开发抗肿瘤新药奠 定了基础，显示出诱人的研究开发前景，从海洋生物及其代谢产物中筛选和提 取具有特异化学结构的天然活性物质成为抗肿瘤药物开发的重要来源。文蛤 (Meretrixmeretrix Linnaeus)作为一种深受人们喜爱的海洋软体动物，不仅具 有丰富的营养
14、价值，更是有着极高的药用价值。古往今来，文蛤的药用价值一 直深受人们的重视，它具有清热利湿、化痰、散结的功效，对肿瘤细胞有明显 的抑制作用，还具有降血糖，降血脂，抗衰老等多种生理功能。其有效成分及 生理作用受到越来越广泛的关注。 本研究采用破碎、硫酸铵沉淀、乙醇抽提、 Sephadex G-25 分子筛层析等方法从文蛤中提取得到四个峰的物质，利用 MTT 法分别检测各峰体外对癌细胞的抑制效应，发现第二峰的物质能抑制癌细胞的 生长，将此活性物质命名为 Mer2；发现第一个峰的物质能抑制酪氨酸酶的活性， 减少黑素的形成，命名 Mer1。 将 Mer2 处理肝癌 HePG2 细胞、胆管癌 QBC93
15、9、宫颈癌 Hela 细胞、肺腺癌细胞 SPC-A-1、L，TEP-a-2，观察研究 Mer2 对癌细胞的生物学效应并进一步探索其抑制癌细胞生长的作用机理。结果表明， Mer2 对五种细胞均有不同程度的抑制作用，但对正常的人肝 chang-liver 细胞 抑制作用很小。当浓度大于 10g/mL 时，作用时间为 72 h 时，对肝癌 HePG2 细胞和胆管癌 QBC939 的抑制率便超过了 50，其中对肝癌 HePG2 细胞的抑制 作用更强一些。通过光学显微镜和流式细胞技术等方法，研究了文蛤多肽对体 外培养的肝癌 HePG2 细胞和胆管癌 QBC939 的细胞形态、细胞周期的影响。结果 表明：
16、Mer2 处理后的细胞外形变化明显，贴壁细胞数量减少，出现了单个细胞 的悬浮生长，细胞的集落化程度降低，细胞群体数量显著降低，出现了凋亡小 体。细胞周期的检测结果说明，经 Mer2 处理的肝癌 HePG2 细胞周期发生明显变 化，出现明显的凋亡峰，但细胞周期未出现明显阻滞现象。表明文蛤多肽对癌 细胞的生长抑制作用与细胞凋亡有关。 进一步研究文蛤抗癌多肽抑制癌细胞 的分子机制，我们利用蛋白组学双向电泳技术初步探讨了在经 Mer2 作用前后肝 癌 HePG2 细胞蛋白表达的变化，以期为后续的研究提供理论基础。通过图谱分 析找到 89 个差异蛋白，其中 66 个表达下调，23 个表达上调。对其中部分差异 较明显的点进行了鉴定，最终鉴定出 9 种差异蛋白。其中 7 个蛋白表达下调， 2 个蛋白表达上调。肝癌细胞：HePG2 表达的差异蛋白种类涵盖了从细胞结构到 细胞生理调控的各个方面。对差异点进行鉴定后发现，差异蛋白有锌指蛋白 (Zinc finger protein624)，膜联蛋白(Annex
