《抗性和敏感小菜蛾(plutellaxylostella)及菜蛾啮小蜂(oomyzussokolowskii)acel基因克隆与序列分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《抗性和敏感小菜蛾(plutellaxylostella)及菜蛾啮小蜂(oomyzussokolowskii)acel基因克隆与序列分析（44页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、生物化学与分子生物学专业毕业论文生物化学与分子生物学专业毕业论文 精品论文精品论文 抗性和敏感小抗性和敏感小菜蛾菜蛾(Plutella(Plutella xylostella)xylostella)及菜蛾啮小蜂及菜蛾啮小蜂(Oomyzus(Oomyzus sokolowskii)sokolowskii)acelacel 基因克隆与序列分析基因克隆与序列分析关键词：抗药性关键词：抗药性 小菜蛾小菜蛾 菜蛾啮小蜂菜蛾啮小蜂 ace1ace1 基因序列基因序列 基因克隆基因克隆 乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶摘要：本研究主要研究温度对小菜蛾乙酰胆碱酯酶基因(ace1)频率的影响及抗 性、敏感菜蛾啮小蜂 a
2、ce1 基因部分序列及其氨基酸结构改变与抗药性的关系。 根据报道的小菜蛾 ace1 突变位点，设计 bi-PASA 检测引物，分别检测高温和常 温处理对抗性、敏感小菜蛾后代 ace1。计算出检测样本中 ace1 不同基因型的 比列和 ace1 基因频率，从分子水平上证明了温度对小菜蛾抗性和敏感小菜蛾后 代 ace1 基因型和 ace1 频率的影响。 菜蛾啮小蜂(Oomyzus sokolowskii)是 小菜蛾(Plutella xylostella)幼虫至蛹期的跨期寄生蜂，是目前报道的小菜蛾 主要寄生天敌之一。本研究以菜蛾啮小蜂 ace1 作为研究对象，分别设计了简并 和特异性的引物，首次扩
3、增得到抗性、敏感性菜蛾啮小蜂的 ace1 基因片段，通 过比较抗性、敏感性菜蛾啮小蜂乙酰胆碱酯酶片段发现两个突变位点，并与已 报道的其他昆虫、电鳐等生物的乙酰胆碱酯酶序列比较分析，得出有一个突变 位点可能与菜蛾啮小蜂抗性有关。 本研究的主要结果如下： 1.通过比对 扩增出的小菜蛾 ace1 片段序列，得出该序列与已报道的抗丙硫磷小菜蛾 ace1 序列同源性较高，突变的位点也与报道的一致(G to C)。因此，可以得出本实 验中所用材料为抗性小菜蛾。 2.bi-PASA 检测实验，要求设计四条引物：两 条外侧引物(allele-nonspecific-F 和 allele-nonspecific
4、-R)，两条内侧引物 (allele-specific-F 和 allele-specific-R)。allele-specific-F 的 3端对 应突变型，allele-specific-R 的 3端则对应敏感型。外侧引物 allele- nonspecific-F 和 allele-nonspecific-R 扩增的片段长度 348bp；allele- nonspecific-F 和 allele-specific-R 扩增的片段长度 144bp；allele- specific-F 和 allele-nonspecific-R 扩增的片段长度 254bp。 3.采用 bi- PASA
5、技术检测田间小菜蛾 F1 代成虫 G227A 突变情况，常温处理 F0 代作为对照： 31.8突变纯合子、63.6的杂合子和 4.6的野生型。常温处理的比高温处 理的突变纯合子由 35.5降至 8.8，杂合子由 61.3上升至 76.9，而最明 显就是野生型比例由 3.2升高到 14.3。 4.常温处理的室内敏感小菜蛾 F1 代成虫比高温处理的杂合子由 32.3降至 30.0，野生型比例由 67.7升 高到 70.0，两种处理中都没有检测到突变纯合子。常温处理 F0 代作为对照： 33.3的杂合子和 66.7的野生型，没有检测到突变纯合子。 5.常温处理 的室内抗性小菜蛾 F1 代成虫比高温处
6、理的突变纯合子由 62.5降至 22.6， 杂合子比例由 37.5升高到 61.3，常温处理中都没有检测到野生型，而高温 处理后 F1 代中野生型占到 16.1。常温处理 F0 代作为对照：68.4的突变纯 合子，32.6的杂合子，没有检测到野生型。 6.计算温度处理抗性和敏感小 菜蛾 F1 代成虫 ace1 基因频率，常温(25.0)处理的田间小菜蛾与高温处理的 比较，抗性基因(R)的基因频率从 66.1降至 47.1，敏感基因(S)的基因频率 则从 33.9升至 52.9。对于室内筛选敏感小菜蛾(经过相同处理)抗性基因(R)的 基因频率从 16.1降至 15.0，敏感基因(S)的基因频率则
7、从 83.9升至85.0，而室内筛选抗性小菜蛾抗性基因(R)的基因频率从 81.3降至 53.2，敏感基因(S)的基因频率则从 18.7升至 46.8。对比常温处理的抗 性、敏感小菜蛾 F0 代，高温处理后抗性基因(R)的基因频率都降低。 7.得到 的抗性、敏感菜蛾啮小蜂的 ace1 序列和其他昆虫、电鳐等生物的乙酰胆碱酯酶 氨基酸序列进行比对分析，有分析结果证明了我们克隆到的是 ace1 基因序列。 并发现两个突变位点即：Phe272Leu(TTT to CTT)、Lys303Arg(AAG to AGG)。 通过与其他昆虫比较分析，可知 Phe272Leu(TTT to CTT)和菜蛾啮小
8、蜂抗药性 有关，根据 AChE 结构分析可知，Phe272Leu(TTT to CTT)位于酰基口袋口附近。正文内容正文内容本研究主要研究温度对小菜蛾乙酰胆碱酯酶基因(ace1)频率的影响及抗性、 敏感菜蛾啮小蜂 ace1 基因部分序列及其氨基酸结构改变与抗药性的关系。根据 报道的小菜蛾 ace1 突变位点，设计 bi-PASA 检测引物，分别检测高温和常温处 理对抗性、敏感小菜蛾后代 ace1。计算出检测样本中 ace1 不同基因型的比列 和 ace1 基因频率，从分子水平上证明了温度对小菜蛾抗性和敏感小菜蛾后代 ace1 基因型和 ace1 频率的影响。 菜蛾啮小蜂(Oomyzus sok
9、olowskii)是小 菜蛾(Plutella xylostella)幼虫至蛹期的跨期寄生蜂，是目前报道的小菜蛾主 要寄生天敌之一。本研究以菜蛾啮小蜂 ace1 作为研究对象，分别设计了简并和 特异性的引物，首次扩增得到抗性、敏感性菜蛾啮小蜂的 ace1 基因片段，通过 比较抗性、敏感性菜蛾啮小蜂乙酰胆碱酯酶片段发现两个突变位点，并与已报 道的其他昆虫、电鳐等生物的乙酰胆碱酯酶序列比较分析，得出有一个突变位 点可能与菜蛾啮小蜂抗性有关。 本研究的主要结果如下： 1.通过比对扩 增出的小菜蛾 ace1 片段序列，得出该序列与已报道的抗丙硫磷小菜蛾 ace1 序 列同源性较高，突变的位点也与报道的
10、一致(G to C)。因此，可以得出本实验 中所用材料为抗性小菜蛾。 2.bi-PASA 检测实验，要求设计四条引物：两条 外侧引物(allele-nonspecific-F 和 allele-nonspecific-R)，两条内侧引物 (allele-specific-F 和 allele-specific-R)。allele-specific-F 的 3端对 应突变型，allele-specific-R 的 3端则对应敏感型。外侧引物 allele- nonspecific-F 和 allele-nonspecific-R 扩增的片段长度 348bp；allele- nonspecific
11、-F 和 allele-specific-R 扩增的片段长度 144bp；allele- specific-F 和 allele-nonspecific-R 扩增的片段长度 254bp。 3.采用 bi- PASA 技术检测田间小菜蛾 F1 代成虫 G227A 突变情况，常温处理 F0 代作为对照： 31.8突变纯合子、63.6的杂合子和 4.6的野生型。常温处理的比高温处 理的突变纯合子由 35.5降至 8.8，杂合子由 61.3上升至 76.9，而最明 显就是野生型比例由 3.2升高到 14.3。 4.常温处理的室内敏感小菜蛾 F1 代成虫比高温处理的杂合子由 32.3降至 30.0，野生
12、型比例由 67.7升 高到 70.0，两种处理中都没有检测到突变纯合子。常温处理 F0 代作为对照： 33.3的杂合子和 66.7的野生型，没有检测到突变纯合子。 5.常温处理 的室内抗性小菜蛾 F1 代成虫比高温处理的突变纯合子由 62.5降至 22.6， 杂合子比例由 37.5升高到 61.3，常温处理中都没有检测到野生型，而高温 处理后 F1 代中野生型占到 16.1。常温处理 F0 代作为对照：68.4的突变纯 合子，32.6的杂合子，没有检测到野生型。 6.计算温度处理抗性和敏感小 菜蛾 F1 代成虫 ace1 基因频率，常温(25.0)处理的田间小菜蛾与高温处理的 比较，抗性基因(
13、R)的基因频率从 66.1降至 47.1，敏感基因(S)的基因频率 则从 33.9升至 52.9。对于室内筛选敏感小菜蛾(经过相同处理)抗性基因(R)的 基因频率从 16.1降至 15.0，敏感基因(S)的基因频率则从 83.9升至 85.0，而室内筛选抗性小菜蛾抗性基因(R)的基因频率从 81.3降至 53.2，敏感基因(S)的基因频率则从 18.7升至 46.8。对比常温处理的抗 性、敏感小菜蛾 F0 代，高温处理后抗性基因(R)的基因频率都降低。 7.得到 的抗性、敏感菜蛾啮小蜂的 ace1 序列和其他昆虫、电鳐等生物的乙酰胆碱酯酶 氨基酸序列进行比对分析，有分析结果证明了我们克隆到的是
14、 ace1 基因序列。 并发现两个突变位点即：Phe272Leu(TTT to CTT)、Lys303Arg(AAG to AGG)。通过与其他昆虫比较分析，可知 Phe272Leu(TTT to CTT)和菜蛾啮小蜂抗药性 有关，根据 AChE 结构分析可知，Phe272Leu(TTT to CTT)位于酰基口袋口附近。本研究主要研究温度对小菜蛾乙酰胆碱酯酶基因(ace1)频率的影响及抗性、敏 感菜蛾啮小蜂 ace1 基因部分序列及其氨基酸结构改变与抗药性的关系。根据报 道的小菜蛾 ace1 突变位点，设计 bi-PASA 检测引物，分别检测高温和常温处理 对抗性、敏感小菜蛾后代 ace1。
15、计算出检测样本中 ace1 不同基因型的比列和 ace1 基因频率，从分子水平上证明了温度对小菜蛾抗性和敏感小菜蛾后代 ace1 基因型和 ace1 频率的影响。 菜蛾啮小蜂(Oomyzus sokolowskii)是小菜蛾 (Plutella xylostella)幼虫至蛹期的跨期寄生蜂，是目前报道的小菜蛾主要寄 生天敌之一。本研究以菜蛾啮小蜂 ace1 作为研究对象，分别设计了简并和特异 性的引物，首次扩增得到抗性、敏感性菜蛾啮小蜂的 ace1 基因片段，通过比较 抗性、敏感性菜蛾啮小蜂乙酰胆碱酯酶片段发现两个突变位点，并与已报道的 其他昆虫、电鳐等生物的乙酰胆碱酯酶序列比较分析，得出有一
16、个突变位点可 能与菜蛾啮小蜂抗性有关。 本研究的主要结果如下： 1.通过比对扩增出 的小菜蛾 ace1 片段序列，得出该序列与已报道的抗丙硫磷小菜蛾 ace1 序列同 源性较高，突变的位点也与报道的一致(G to C)。因此，可以得出本实验中所 用材料为抗性小菜蛾。 2.bi-PASA 检测实验，要求设计四条引物：两条外侧 引物(allele-nonspecific-F 和 allele-nonspecific-R)，两条内侧引物 (allele-specific-F 和 allele-specific-R)。allele-specific-F 的 3端对 应突变型，allele-specific-R 的 3端则对应敏感型。外侧引物 allele- nonspecific-F 和 allele-nonspecif
