《消化系统疾病动物模型2016》由会员分享，可在线阅读，更多相关《消化系统疾病动物模型2016（94页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、*王慷慨1第 八 章 消化系统疾病动物模型The animal models of digestives system diseases讲授内容n胃炎动物模型n消化性溃疡模型n病毒性肝炎模型（乙型肝炎）n脂肪肝、肝硬化模型n胰腺炎模型*王慷慨2*王慷慨3第 一 节 急性胃炎动物模型 *王慷慨4Gastritis胃黏膜层的炎症（上皮细胞、固有层、黏膜肌）上皮细胞固有层黏膜肌急性固有层中性粒细胞浸润糜烂出血慢性浅表性：淋巴细胞、浆细胞浸润萎缩性：炎性细胞浸润，固有层腺体减少，细胞增生损伤与修复交替 进行，病程迁延胃炎模型的种类*王慷慨51、HP法2、药物、乙醇、应激法3、非甾体抗炎药法4、复合法5
2、、酸制剂法*王慷慨6HP法Helicobacter pyloriSpiral-shaped Gram-negative, oxidase and catalase-positive motile bacterium with 4-6 flagella (Thruster and anchor)Microaerophilic, i.e. it requires oxygen but at lower levels than those contained in the atmosphere (5-8%)With its flagella and its spiral shape, the bac
3、terium drills into the mucus layer of the stomach, and can either be found suspended in the gastric mucosa or attached to epithelial cellsBarry J. Marshall and J. Robin Warren got the Nobel Prize in 2005 2005诺贝尔医学奖， Warren和Marshall*王慷慨7Produces adhesins which bind to membrane- associated lipids and
4、carbohydrates and help its adhesion to epithelial cellsBreaks down urea (NH2CONH2) to NH3 and HCO-3Stomach acidity Chassaing B. Gastroenterology, 2011,140(6):17208*王慷慨8实验动物实验动物小鼠（18-22g），蒙古沙鼠（55-60g），仔犬、仔猪操作方法操作方法HP标准菌株灌胃（109-1010CFU/ml）法实验前12小时禁食禁水实验前1小时，0.1mol/L 碳酸氢钠0.5ml灌胃0.5ml /只/次 每两天一次（隔天灌胃）8周
5、时模型成功率90% 保证HP活性及浓度*王慷慨9INFLAMMATIONGASTRITISMAP3KINASESmuropeptideNaumann M, Trends in Microbiology, 2004, 12(1): 2936H. Pylori induces inflammation*王慷慨10体重300g左右雄性Wistar大鼠。酸制剂法急性胃炎动物模型实验动物实验动物大鼠禁食24h，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：（1）水杨酸制剂（如20 mmol/L阿司匹林或水杨酸溶液）按100 mg/kg体重灌胃；（2）10 mmol/L的醋酸；（3）不同浓度的盐酸（1，10，100
6、 mmol/L）；（4）同种动物胆汁；（5）2 mmol/L的牛磺胆酸；（6）15%的乙醇；（2）-（6）可单独或几种合用（2ml左右）灌胃； 急性胃炎动物模型 操作方法操作方法*王慷慨124h后处死动物，剖检可见胃内发生急性 弥漫性炎症改变。胃黏膜表面有浅表糜烂、出血，粘膜层 内见中性粒细胞浸润。急性胃炎动物模型结结 果果病病 变变*王慷慨13*王慷慨14观察指标：？组织：HE，免疫荧光，干湿重比等NOS， PGE2等 PCR：特定基因或炎症因子 Western：特定激酶或信号分子，特定基因等 *王慷慨15第 二 节急性胃溃疡动物模型 *王慷慨16溃疡病的病因n致溃疡因素:胃酸、胃蛋白酶、非
7、甾体抗炎药 不合理应用、幽门螺杆菌感染等。n防御因素：粘液-碳酸氢盐屏障、粘膜屏障、 粘膜血流量、胃上皮细胞的更新、表皮生长因 子和内生性前列腺素等。n溃疡的形成主要由于防御因素和致溃疡因素的 平衡失调所致。*王慷慨17 应激法 幽门结扎法 药物法 醋酸法 常用的方法急性胃溃疡动物模型在抗溃疡药物药效学试验中，应激法、幽门结 扎法和醋酸法制备的胃溃疡模型为必做实验，利血 平法和乙醇法可任选其一。乙醇 组胺 促胃液素 肾上腺类固醇 水杨酸盐 血清素 利血平 保泰松 *王慷慨18 应激法 幽门结扎法 药物法 醋酸法 常用的方法急性胃溃疡动物模型治疗性给药醋酸法复制的模型 预防性给药其他模型乙醇 组
8、胺 促胃液素 肾上腺类固醇 水杨酸盐 血清素 利血平 保泰松 *王慷慨19 应激法 幽门结扎法 药物法 醋酸法 常用的方法急性胃溃疡动物模型阳性对照药： H2受体拮抗药西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁等 加强胃黏膜防御功能甘珀酸，果胶铋，硫糖铝乙醇 组胺 促胃液素 肾上腺类固醇 水杨酸盐 血清素 利血平 保泰松 *王慷慨20研究抗胃溃疡药物胃黏膜形态观察胃分泌试验胃黏膜血流量测量胃粘液测定抗炎镇痛试验抑制幽门螺杆菌试验等*王慷慨21幽门结扎法胃溃疡模型 *王慷慨22幽门结扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度胃液在胃中潴留，损伤胃黏膜造成胃溃疡。成年大鼠，雄雌均可。成年大鼠，雄雌均可。幽门结扎法胃溃疡模型
9、造模机制造模机制实验动物实验动物*王慷慨231.给药3天。实验前大鼠禁食(24h)不禁水。2.自胸骨剑突下沿腹中线切开腹壁，切口约 23cm。在左侧肋缘部位用手指轻轻上推暴露 胃。3.在胃幽门与十二指肠连接处用结扎线将幽门结 扎，注意勿将邻近的其他器官、血管结扎。同 时经十二指肠给予受试药。缝合腹壁切口，用 纱布包扎切口。幽门结扎法胃溃疡模型操作方法操作方法*王慷慨244. 幽门结扎后，停止供水供食，术后18h处死大鼠， 取胃固定、剖检。5. 沿胃大弯剪开胃壁，洗净胃内容物，将胃壁展开， 胃黏膜面向上用大头钉固定在蜡板上。 6. 用肉眼或放大镜观察胃黏膜面，记录每只动物产生 的溃疡数、溃疡程度
10、、溃疡面积（或溃疡指数）及 病变的情况。幽门结扎法胃溃疡模型*王慷慨25病变程度的评价1溃疡面积 通过溃疡中心量取的最大纵径和横径S=（d1/2）（d2/2）式中S为溃疡面积，d1为通过溃疡中心量取的最大纵径，d2为通过溃疡中心量取的最大横径。幽门结扎法胃溃疡模型*王慷慨26病变程度的评价2溃疡指数 可计数前胃部溃疡面积，以其总和作为溃疡指数。 幽门结扎法胃溃疡模型*王慷慨27病变程度的评价3溃疡程度（Okabe法 ）在解剖显微镜下测量溃疡面积，将每只鼠溃疡面积的总合分为5个等级作为溃疡指数 ：溃疡面积(mm2)：1-12 13-25 26-37 38-50 50mm2或穿孔 溃疡指数: 1级
11、 2级 3级 4级 5级幽门结扎法胃溃疡模型*王慷慨28模型组溃疡指数给药组溃疡指数模型组溃疡指数给药组溃疡指数 溃疡抑制百分率溃疡抑制百分率 100%100%模型组溃疡指数模型组溃疡指数发生溃疡的动物数发生溃疡的动物数 溃疡发生百分率溃疡发生百分率 100%100%实验动物数实验动物数病变程度的评价3溃疡程度（Okabe法 ）幽门结扎法胃溃疡模型*王慷慨29形成的溃疡主要发生在对胃液抵抗力较弱的前胃部（瘤胃），多为圆形或椭圆形。但病变较表浅，属于胃黏膜急性出血性糜烂，与人类胃溃疡的典型病变差距较大。结结 果果幽门结扎法胃溃疡模型*王慷慨301.该模型是Shay等创立的模型，方法简单，溃疡发生
12、快，发生率达97%，主要用于观察药物对溃疡形成的预防作用。幽门结扎法胃溃疡模型模型评价与注意事项模型评价与注意事项2.原法规定大鼠禁食4872h。一般经验是：体重小于180g，禁食2448h，这样动物可以耐受手术；体重超过180g，禁食4872h，可提高溃疡发生率。3.对笼具的要求。*王慷慨314.术中要求。幽门结扎法胃溃疡模型 模型评价与注意事项模型评价与注意事项5.观察药物对溃疡的影响时，动物应预先给药或同时给药，若粗制剂可采用灌胃给药，应确 认胃内已排空后方能结扎幽门。粗制剂可在幽门 结扎的同时采用十二指肠内注入给药较好。6.阳性对照药:灌胃给予西咪替丁（甲氰咪胍）1.0g/kg体重雷尼
13、替丁0.135g/kg体重*王慷慨32大鼠胃的解剖及幽门结扎法所致胃溃疡图*王慷慨33大鼠慢性胃溃疡模型*王慷慨36第 三 节急性和慢性肝损伤动物模型 *王慷慨37常用的肝损伤物质n四氯化碳nD-半乳糖胺 n硫代乙酰胺 n刀豆蛋白A *王慷慨38一、四氯化碳急性肝损伤模型CCl4在肝内经NADPH和肝微粒体细胞色素P450混合功能氧化酶的作用，生成活泼的三氯甲基自由基（CCl3）和氯自由基（Cl3） 。p这些自由基能与细胞内和细胞膜上大分子发生共价结合， 引起富含不饱和脂肪酸的生物膜发生脂质过氧化，导致膜 结构和功能完整性的破坏，肝细胞损伤坏死；p三氯甲基自由基还能抑制细胞膜和微粒体膜上钙泵的
14、活性 ，使Ca2+内流增加，从而引起细胞中毒死亡；p三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键，损害线粒体使 NADH及ATP在肝内生成减少，脂肪酸氧化受抑制，影响肝 脏能量生成障碍，并使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积 。造模机制造模机制CCl4急性肝损伤模型常用实验动物CC l4致急性肝损伤所需剂量和用法动物 (CCl4)剂量 用法 形成肝损伤(ml/kg体重) 所需时间0.5% 10 颈背部皮下注射1次 约24h 小鼠 0.1% 10 腹腔注射1次 约24h0.2% 10 于1、4、7日各灌胃1次 末次后1224h25% 5 皮下注射1次 18d 大鼠 25% 5 皮下注射2次,间隔4日 18d
15、15% 1 每隔3日灌胃1次，共3次 末次后16h 家兔 50% 0.5 皮下注射1次，共3次 47d 33% 1.5 隔日灌胃1次，共2次 7d CCl4急性肝损伤模型*王慷慨411. 根据所用CCl4剂量和时间的不同，肝脏的损伤程度 不同； 2. 一般在给予CCl4后1624 h血清丙氨酸氨基转移酶 （ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性 升高，并能反映肝损伤的程度； 3. 形态学上表现为肝小叶中央区坏死和脂肪变性。结结 果果CCl4急性肝损伤模型*王慷慨421. 根据所用CCl4剂量和时间的不同，肝脏的损伤程度 不同； 2. 一般在给予CCl4后1624 h血清丙氨酸氨基转移酶 （ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性 升高，并能反映肝损伤的程度； 3. 形态学上表现为肝小叶中央区坏死和脂肪变性。结结 果果CCl4急性肝损伤模型*王慷慨44*王慷慨45CCl4急性肝损伤模型*王慷慨461CCl4肝损伤模
