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1、实验流程图流程图,宗驾没计与淅备柳驿材料为奈驹老师提供的劣症杆。选择出发菩标并纯化英-达河诊河刹,频宏沥交刘量详完有物理涛享和化学浩变剖备首挂沥|闵河皇|】|口余洁明朋切招3胶。国园队李巳是表型彷运的过程,使厂有的酬量失根林的帕迪莲育ps,吴租法,夯尺发,限量场荣基和埚关条件的谊整刑洁河cmw入沥,抗生乖法,首东过浩法,讥掠法,差别权英法-套室林的研究不益定-述在FD咿气以艾_医1一伟人吴吴沥氯殖快违:代谢快、繁殖快,标准菌，小时仅可繁殖6倍。*生命力强:无湿状态可耐低温小时增殖10一60“C、耐高烈280“C,耐强酸、耐强碱、抗菌消毒、耐高(嗉氯繁殖3、耐低氧(厌氧繁殖)。o3.体积大,体积
2、比一般病源菌分子大四倍数,不哥空间优势,抑制有菌的生长繁殖。杆菌:子态氨的能力。i杆菌生物工程芽孢杆菌各属拥有各自生物学特性,通过基孛孢杆菌可用于植物保护,杀灭害虫;才于畜牧水产饲料添加剂、用于水环境浑化;多粘类芽孢杆菌枯草菱孢杆菌、地衣菱选育等生物工程学,可以将自然界的菌种人工选育出特定功能强势的菌种,应用于工农业生产各个方面。在抗生素污染闰题越来越严重的今天,有益的芽孢杆菌的应用研究,可能是解决抗生素问题的一个有效方案。震。赔技匿日技,罐痔吴适兽彗于菌囝坚券基重1L镗馏水+2蠢g葳唰啬罡看牛图肖祝呢q琼胆,或牛肉言10g的葛葫糖。容髓蛐奋(Tryp翼e厅og/t酵母提取物(Yeasextr
3、act)5g/L氰化钠(NaCI)10g/L1琼脂1520g水1000mlt量e五民,Aw1号目招又诱变方法转多的是辐射诱变,即用a射线、B射线、y射线、X寺线、中二和其他广、紫外输射以及微波输射等物理因素诱发变异变“化学诱变除能引起森因宋变外f远典有和糊肖常粟似的生物学效应,如引起染色体晚根等,常用于处理迟发突变,并对棣特定的基因或核酸有选择性作用。化学诱变剂主要有:CD烷化剂。这类物质含有1个或多个活跃的烷基,能转移到电孔密度较高的分孔中去,置换其他分孔中的氢原子而使碱基改变。常用的有甲基磺酸乙酯(EMS)、乙烽亚脓(EI)、亚硝基乙基服烷CNEU)、亚确基甲基豚烷(NMU、硫酸二乙酮(D
4、ES等。)校酸硼基类似物。为一类与DNA磁基相类似的化合物。渍入DNA后,可使DNA复制发生配对上的错误。常用的有5-溶尿嘧啶(BU)、5-溶去氧尿核昨(BudR等。抗生素。如重氮丝氧酸、丝裂毒素C等,具有破坏DNA和核酸的能力,从而可造成染色体断裂生型菌株的方法有菜用青震素法:细菌细胞壁的主要成分为肽联糖,细胞壁肤聚糖链之间的交链,陆止合成完整的细壁。处在生长繁殖过程的细菜对青霉素十分敏感,因而被抑制“或杀死,但不能抑制或朽死处休止状态的细菌。将诱变处理后的菜悬液分咤加有抗生素的基本培养基上,境养后野生型细胞由于正常生长繁殖而被杀死,营养缺陷型细胞因不能生长而被保留来,达到富集目的。酵母蔡用
5、制震素法,制震素作用于真菌细胞膜上的眩醇,引起细胞膜的损伤,杀死生长繁殖过程的真菌,起到富集营养缺陷型的作用。菌法,“利用芽孢杆菌类的芽孢和营养体对热敏感性异,让诱变后的细菌形成芽孢,然后把处在芽孢阶段的细菌到基本培养波中,振荡培养一定时间,野生型芽孢萍发,而营缺陷型芽孢不能萌发。此时将培养物加热到80“C,维持一定时合,野生型细胞大部分被杀死,鲤陷型则得以保留,起到了浓缩作用。菌丝过滤法,“真菌和放线菌等丝状菌的野生型孢子在基本培养基中能萌发长成菌丝,而营养缺陷型的孢子则不能萌发。把诱变处理后的孢子移入到基本培养液中,振荡培养10h左右,使野生型孢子萌发的菜丝刚创肉眼可见,用灭菜的胺脂棒、滤纸或玻璃漪斗除去菜丝。继续堡养,每隔3.4h过滤一次,重复3.4次,最大限度地除去野生型细胞。然后稀释、涂皿分离。缺陷型的检出点植对照法法诱变后的孢子或菌体,经富集培养,涂布分离在完全培养基平板进行培养,待菌落孢子成熟后,用灭菌的牙签或接种针把每个菌落上孢子或菌体分别接到基本培养基和完企堡养基平板卜的相应位置一同时螺养,然后观察对比萧落生长情况。如果基本培养基上不生长而完全塘养基相应位置上生长的菌落,可能为营养缺陷型。挑取孢子或菌体分别移接到基本培养基和完全培养基斜面上,进一步复证。该法可靠性强,但工作量大。
