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1、江 苏 食 品 与 发 酵 年 第 期实 验 室 简 易 微 生 物 厌 氧 培 养 装 置范 志 恒无 锡 星 达 生 物 工 程 有 限 公 司 无 锡 市 ,摘 要 文 章 叙 述 了 作 者 在 多 年 的 生 产 实 践 中 , 总 结 出 几 种 方 法 简 单 , 费 用 较 低 , 效 果 较 好 的 实 验 室 微生 物 厌 氧 培 养 装 置 和 方 法 。关 键 词 实 验 室 微 生 物 厌 氧 培 养 装 置前 言 微 生 物 厌 氧 环 境 的 形 成 一 般 可 以从 培 养 外 界 环 境 如 隔 绝 空 气 或 充 二 氧 化 碳 、惰 性 气 体 等 替 代
2、 空 气 , 吸 除 氧 气 和 培 养 基 配方 等 方 面 着 手 调 整 。 从 实 验 室 常 用 的 一 些 厌氧 方 法 来 看 , 其 中 有 些 方 法 比 较 繁 琐 , 有 些 所需 化 学 药 品 不 易 获 得 或 费 用 较 大 此 外 , 各 种厌 氧 方 法 其 厌 氧 效 果 或 程 度 究 竟 如 何 , 也 很少 看 到 有 资 料 介 绍 。 本 文 根 据 实 际 工 作 经 验 ,总 结 了 几 种 简 便 的 实 验 室 厌 氧 培 养 的 装 置 与方 法 , 并 以 专 性 厌 氧 的 双 歧 杆 菌 的 生 长 菌 落的 形 成 作 为 标 准
3、 , 粗 略 地 将 这 些 方 法 划 分 成相 对 厌 氧 和 绝 对 厌 氧 两 大 类 , 介 绍 给 大 家 供参 考 。相 对 厌 氧 方 法培 养 皿 放 置 在 玻 璃 干 燥 器 内 , 干 燥 器 用凡 士 林 密 封 , 蜡 烛 或 酒 精 棉 点 燃 后 放 人 干 燥器 内 , 火 焰 熄 灭 , 即 形 成 相 对 的 厌 氧 缺 氧 状态 。 因 系 统 内 为 负 压 , 密 封 要 求 较 严 。氮 气 充 人 干 燥 器 氮 气 钢 瓶 便 宜 易 得 。氮 气 通 人 干 燥 器 后 , 虽 有 凡 士 林 密 封 顶 盖 与器 身 , 最 好 再 用 胶
4、 带 纸 将 顶 盖 与 器 身 固 定 牢 ,以 免 一 旦 器 内 有 正 压 时 , 可 增 加 一 份 抵 抗 顶开 顶 盖 的 力 量 。 氮 气 比 空 气 轻 , 因 此 应 上 进 下出 , 出 口 导 管 要 插 人 一 冷 开 水 瓶 中 以 更 能 观察 到 充 氮 气 情 况 。 出 与 冷 开 水 水 面 之 间 距离 严 格 控 制 在 至 厘 米 , 太 浅 易 漏 进 空气 , 出 气 插 得 太 深 则 干 燥 器 内 压 力 太 高 , 会将 顶 盖 顶 开 而 漏 气 。 充 气 完 后 , 将 干 燥 器 与 冷开 水 瓶 冷 开 水 中 溶 氧 比 自
5、 来 水 少 得 多 , 故 不用 自 来 水 同 步 移 入 培 养 箱 内 。 数 小 时 后 至少 至 小 时 待 干 燥 器 内 所 有 物 品 与 气 体己 被 培 养 箱 加 热 平 衡 后 , 可 将 出 关 闭 。 如 关闭 后 仍 插 人 冷 开 水 瓶 中 , 则 出 气 密 闭 更 保险 。 如 果 移 人 培 养 箱 后 立 即 关 闭 出 气 口 , 器 内氮 气 被 加 热 后 膨 胀 , 能 把 顶 盖 顶 开 而 至 漏 气 。估 计 可 能 是 钢 瓶 中 氮 气 不 是 很 纯 , 我 们 经 过多 次 试 验 , 充 氮 气 半 至 一 小 时 , 均 不
6、 能 形 成 双歧 杆 菌 菌 落 , 因 此 本 法 列 人 相 对 厌 氧 类 。绝 对 厌 氧 方 法美 国 公 司 标 准 法 用 公 司生 产 的 厌 氧 罐 、 厌 氧 发 生 袋 和 厌 氧 指 示 条 。 能长 出 双 歧 杆 菌 菌 落 , 但 此 法 成 本 太 高 材 料 费用 每 次 几 十 元 , 十 只 平 板 , 尤 其 是 厌 氧 材 料 厌 氧 发 生 袋 和 指 示 条 要 从 美 国 进 日 。琼 脂 培 养 基 厚 浇 法 在 培 养 皿 中 浇 人毫 升 左 右 培 养 基 , 使 培 养 基 的 厚 度 至 少 有厘 米 以 上 , 这 样 在 培
7、养 朋 的 底 部 能 形 成 菌落 。 如 果 是 为 了 菌 落 计 数 , 可 在 空 白 无 菌 培 养中 加 人 待 计 数 稀 释 菌 液 后 , 浇 人 毫 升 左右 培 养 基 与 菌 液 摇 匀 , 待 其 凝 固 后 再 在 其 上面 补 浇 足 厘 米 厚 的 培 养 基 , 这 样 就 避 免 了细 胞 在 培 养 基 的 表 面 及 靠 近 表 面 部 分 因 遇氧 不 能 形 成 菌 落 而 影 响 精 确 计 数 。 此 外 , 为 了节 省 培 养 基 , 用 毫 升 烧 杯 , 试 管 用 牛 皮一江 苏 食 品 与 发 酵 年 第 期纸 扎 口 代 替 培
8、养 皿 , 同 样 也 能 厚 浇 厌 氧 形 成菌 落 。 对 于 先 用 少 量 培 养 基 凝 固 菌 体 细 胞 , 再在 表 面 补 浇 隔 氧 层 培 养 基 的 情 况 , 我 们 曾 用弘 的 琼 脂 来 替 代 补 浇 隔 氧 层 以 节 省 培 养基 , 但 结 果 是 , 由 于 底 层 培 养 基 的 营 养 成 分 向上 层 不 含 任 何 营 养 成 分 的 琼 脂 层 渗 透 稀 释 ,底 层 菌 落 的 形 成 非 常 困 难 , 而 且 两 层 之 间 也较 易 发 生 脱 壳 现 象 , 因 此 两 层 应 该 使 用 同 一培 养 基 。自 制 二 氧 化
9、 碳 充 入 干 燥 器 本 法 见 图基 本 类 似 于 氮 气 充 入 法 , 但 厌 氧 效 果 较 佳 。其 不 同 点 有拧拧 按 酸酸毫 升试 剂 瓶直 径 干 燥 器 冷 开 水图 自 制 二 氧 化 碳 充 入 干 澡 器 法 在 毫 升 试 剂 瓶 中 , 先 放 人 巧 克碳 酸 氢 钠 , 最 后 放 人 克 柠 檬 酸 , 再 放 人毫 升 左 右 体 积 的 冰 块 , 当 冰 化 成 水 时 逐渐 溶 解 碳 酸 氢 钠 和 柠 檬 酸 而 产 生 二 氧 化 碳 气体 , 整 个 化 冰 放 气 时 间 一 般 为 小 时 左 右 。 二 氧 化 碳 比 空 气
10、重 , 因 此 要 下 进 上 出 。 产 气 完 后 , 关 闭 进 气 口 , 干 燥 器 与 冷 开水 瓶 同 步 移 人 培 养 箱 。 为 了 进 一 步 提 高 干 燥 器 内 厌 氧 程 度 ,冰 块 应 由 自 来 水 煮 沸 后 趁 热 倒 人 冰 箱 冰 格内 。 使 用 冰 块 时 , 将 冰 块 投 人 碳 酸 氢 钠 柠 檬 酸瓶 内 后 , 迅 速 接 通 充 气 管 路 。 此 外 , 不 妨 在 出气 管 套 上 一 支 移 液 管 或 玻 璃 管 , 管 的 另一 端 扎 有 一 气 球 , 然 后 在 干 燥 器 内 丢 入 一 点燃 的 小 酒 精 棉 球 , 迅 速 密 封 顶 盖 和 器 身 , 此 时气 球 会 马 上 吸 瘪 , 酒 精 棉 不 久 就 会 熄 灭 , 再 过一 几 分 钟 , 气 球 开 始 鼓 出 , 表 示 二 氧 化 碳 已 经开 始 充 人 干 燥 器 , 器 内 已 由 负 压 转 变 为 正 压 ,此 时 可 将 移 液 管 脱 去 , 把 出 气 管 一 插 人 冷 开水 瓶 中 而 不 必 担 心 器 内 负 压 倒 吸 开 水 沾 污 器内 培 养 皿 。 年 月 日 收 稿 一 一
