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1、儿科儿科( (呼吸呼吸) )专业毕业论文专业毕业论文 精品论文精品论文 黄芩苷抗黄芩苷抗 RSVRSV 作用及对作用及对NF-BNF-B 信号通路和信号通路和 IL-8IL-8、FKNFKN 表达的影响表达的影响关键词：黄芩苷关键词：黄芩苷 NF-BNF-B 信号通路信号通路 白细胞介素白细胞介素 呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒摘要：目的： 1.通过观察呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)感染人肺癌腺上皮细胞(A549 细胞)6h、12h、24h、48h 时的细胞病 变效应(CPE)及核因子-B(NF-B)信号通路中 NF-B 复合物抑制因子(IB)-
2、 、NF-B p65 亚基及趋化因子白细胞介素(IL)-8、fractalkine(FKN)基因的 表达，探讨 RSV 感染对 A549 细胞的作用及 NF-B 信号通路的激活和趋化因子 表达的影响；2.通过观察中药单体黄芩苷(baicalin)治疗后 RSV 感染 A549 细胞 CPE 的变化和细胞存活率及 IB-、NF-B p65 和 IL-8、FKN 表达的影响， 探讨黄芩苷的治疗作用及抗炎机制，为抗 RSV 感染药物的研发提供理论依据和 新的途径。 方法： 1.将 A549 细胞分成 5 个实验组：(1)病毒组(C 组)： 接种 RSV 半数组织培养感染量(TCID50)(TCID5
3、0=10-7.7/50ul)，35、5CO2 箱内吸附 2h，弃接种的病毒液，换成细胞维持液。(2)治疗组：设黄芩苷治疗 组(D 组)和地塞米松(dexamethasone，DXM)治疗组(E 组)，接种 RSV 病毒 100TCID50，35、5CO2 箱内吸附 2h，弃接种的病毒液，DXM 治疗组换成用 细胞维持液稀释的 DXM(终浓度为 0.156mg/ml)，黄芩苷治疗组换成用细胞维持 液稀释的黄芩苷(终浓度为 0.156mg/ml)。(3)对照组：设细胞对照组(A 组)和药 物对照组(B 组)，细胞对照组接种对照液，35、5CO2 箱内吸附 2h，换成细 胞维持液；药物对照组接种对照
4、液，35、5CO2 箱内吸附 2h，换成用细胞维 持液稀释的黄芩苷(终浓度为 0.156 mg/ml)。各组依据实验要求，继续在上述 条件下培养，于 RSV 感染后/药物治疗后的不同时间点(6h、12h、24h、48h)， 收集细胞。 2.应用微量细胞培养技术观察 RSV 感染人喉癌(Hep-2)细胞、 A549 细胞的 CPE；观察不同浓度黄芩苷和 DXM 对 A549 细胞的 CPE 及 RSV 感染后 CPE 的抑制作用；四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法进行药物对细胞的毒性测定(即 药物的无毒限量测定)和药物的抗 RSV 作用(计算细胞存活率)测定，从而得出实 验用药的最佳作用浓度。 3.
5、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测 IB、IL-8 及 FKN mRNA 表达情况；免疫细胞化学(ICC)法检测 IB、NF- B p65 蛋白水平。 结论： 1.黄芩苷具有体外抗 SV 作用。 2.A549 细 胞 RSV 感染后 NF-B 信号通路激活，趋化因子 IL-8 表达增多。 3.黄芩苷在 RSV 感染时可通过升高 I3、降低 NF-B p65 及 IL-8 的表达而发挥抗炎作 用，抑制 NF-B 信号通路激活可能是其抗 RSV 感染的机制之一。正文内容正文内容目的： 1.通过观察呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)感染人肺癌腺
6、上皮细胞(A549 细胞)6h、12h、24h、48h 时的细胞病 变效应(CPE)及核因子-B(NF-B)信号通路中 NF-B 复合物抑制因子(IB)- 、NF-B p65 亚基及趋化因子白细胞介素(IL)-8、fractalkine(FKN)基因的 表达，探讨 RSV 感染对 A549 细胞的作用及 NF-B 信号通路的激活和趋化因子 表达的影响；2.通过观察中药单体黄芩苷(baicalin)治疗后 RSV 感染 A549 细胞 CPE 的变化和细胞存活率及 IB-、NF-B p65 和 IL-8、FKN 表达的影响， 探讨黄芩苷的治疗作用及抗炎机制，为抗 RSV 感染药物的研发提供理论依
7、据和 新的途径。 方法： 1.将 A549 细胞分成 5 个实验组：(1)病毒组(C 组)： 接种 RSV 半数组织培养感染量(TCID50)(TCID50=10-7.7/50ul)，35、5CO2 箱内吸附 2h，弃接种的病毒液，换成细胞维持液。(2)治疗组：设黄芩苷治疗 组(D 组)和地塞米松(dexamethasone，DXM)治疗组(E 组)，接种 RSV 病毒 100TCID50，35、5CO2 箱内吸附 2h，弃接种的病毒液，DXM 治疗组换成用 细胞维持液稀释的 DXM(终浓度为 0.156mg/ml)，黄芩苷治疗组换成用细胞维持 液稀释的黄芩苷(终浓度为 0.156mg/ml)
8、。(3)对照组：设细胞对照组(A 组)和药 物对照组(B 组)，细胞对照组接种对照液，35、5CO2 箱内吸附 2h，换成细 胞维持液；药物对照组接种对照液，35、5CO2 箱内吸附 2h，换成用细胞维 持液稀释的黄芩苷(终浓度为 0.156 mg/ml)。各组依据实验要求，继续在上述 条件下培养，于 RSV 感染后/药物治疗后的不同时间点(6h、12h、24h、48h)， 收集细胞。 2.应用微量细胞培养技术观察 RSV 感染人喉癌(Hep-2)细胞、 A549 细胞的 CPE；观察不同浓度黄芩苷和 DXM 对 A549 细胞的 CPE 及 RSV 感染后 CPE 的抑制作用；四甲基偶氮唑蓝
9、(MTT)比色法进行药物对细胞的毒性测定(即 药物的无毒限量测定)和药物的抗 RSV 作用(计算细胞存活率)测定，从而得出实 验用药的最佳作用浓度。 3.逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测 IB、IL-8 及 FKN mRNA 表达情况；免疫细胞化学(ICC)法检测 IB、NF- B p65 蛋白水平。 结论： 1.黄芩苷具有体外抗 SV 作用。 2.A549 细 胞 RSV 感染后 NF-B 信号通路激活，趋化因子 IL-8 表达增多。 3.黄芩苷在 RSV 感染时可通过升高 I3、降低 NF-B p65 及 IL-8 的表达而发挥抗炎作 用，抑制 NF-B 信号通路激活可能是其抗
10、 RSV 感染的机制之一。 目的： 1.通过观察呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)感 染人肺癌腺上皮细胞(A549 细胞)6h、12h、24h、48h 时的细胞病变效应(CPE)及 核因子-B(NF-B)信号通路中 NF-B 复合物抑制因子(IB)-、NF-B p65 亚基及趋化因子白细胞介素(IL)-8、fractalkine(FKN)基因的表达，探讨 RSV 感染对 A549 细胞的作用及 NF-B 信号通路的激活和趋化因子表达的影响； 2.通过观察中药单体黄芩苷(baicalin)治疗后 RSV 感染 A549 细胞 CPE 的变化和 细胞存
11、活率及 IB-、NF-B p65 和 IL-8、FKN 表达的影响，探讨黄芩苷的 治疗作用及抗炎机制，为抗 RSV 感染药物的研发提供理论依据和新的途径。 方法： 1.将 A549 细胞分成 5 个实验组：(1)病毒组(C 组)：接种 RSV 半数组 织培养感染量(TCID50)(TCID50=10-7.7/50ul)，35、5CO2 箱内吸附 2h，弃 接种的病毒液，换成细胞维持液。(2)治疗组：设黄芩苷治疗组(D 组)和地塞米 松(dexamethasone，DXM)治疗组(E 组)，接种 RSV 病毒 100TCID50，35、 5CO2 箱内吸附 2h，弃接种的病毒液，DXM 治疗组换
12、成用细胞维持液稀释的DXM(终浓度为 0.156mg/ml)，黄芩苷治疗组换成用细胞维持液稀释的黄芩苷(终 浓度为 0.156mg/ml)。(3)对照组：设细胞对照组(A 组)和药物对照组(B 组)， 细胞对照组接种对照液，35、5CO2 箱内吸附 2h，换成细胞维持液；药物对 照组接种对照液，35、5CO2 箱内吸附 2h，换成用细胞维持液稀释的黄芩苷 (终浓度为 0.156 mg/ml)。各组依据实验要求，继续在上述条件下培养，于 RSV 感染后/药物治疗后的不同时间点(6h、12h、24h、48h)，收集细胞。 2.应用 微量细胞培养技术观察 RSV 感染人喉癌(Hep-2)细胞、A54
13、9 细胞的 CPE；观察不 同浓度黄芩苷和 DXM 对 A549 细胞的 CPE 及 RSV 感染后 CPE 的抑制作用；四甲基 偶氮唑蓝(MTT)比色法进行药物对细胞的毒性测定(即药物的无毒限量测定)和药 物的抗 RSV 作用(计算细胞存活率)测定，从而得出实验用药的最佳作用浓度。 3.逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测 IB、IL-8 及 FKN mRNA 表达情况； 免疫细胞化学(ICC)法检测 IB、NF-B p65 蛋白水平。 结论： 1.黄 芩苷具有体外抗 SV 作用。 2.A549 细胞 RSV 感染后 NF-B 信号通路激活， 趋化因子 IL-8 表达增多。 3.黄芩
14、苷在 RSV 感染时可通过升高 I3、降低 NF-B p65 及 IL-8 的表达而发挥抗炎作用，抑制 NF-B 信号通路激活可能是 其抗 RSV 感染的机制之一。 目的： 1.通过观察呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)感 染人肺癌腺上皮细胞(A549 细胞)6h、12h、24h、48h 时的细胞病变效应(CPE)及 核因子-B(NF-B)信号通路中 NF-B 复合物抑制因子(IB)-、NF-B p65 亚基及趋化因子白细胞介素(IL)-8、fractalkine(FKN)基因的表达，探讨 RSV 感染对 A549 细胞的作用及 NF-B 信号通路
15、的激活和趋化因子表达的影响； 2.通过观察中药单体黄芩苷(baicalin)治疗后 RSV 感染 A549 细胞 CPE 的变化和 细胞存活率及 IB-、NF-B p65 和 IL-8、FKN 表达的影响，探讨黄芩苷的 治疗作用及抗炎机制，为抗 RSV 感染药物的研发提供理论依据和新的途径。 方法： 1.将 A549 细胞分成 5 个实验组：(1)病毒组(C 组)：接种 RSV 半数组 织培养感染量(TCID50)(TCID50=10-7.7/50ul)，35、5CO2 箱内吸附 2h，弃 接种的病毒液，换成细胞维持液。(2)治疗组：设黄芩苷治疗组(D 组)和地塞米 松(dexamethaso
16、ne，DXM)治疗组(E 组)，接种 RSV 病毒 100TCID50，35、 5CO2 箱内吸附 2h，弃接种的病毒液，DXM 治疗组换成用细胞维持液稀释的 DXM(终浓度为 0.156mg/ml)，黄芩苷治疗组换成用细胞维持液稀释的黄芩苷(终 浓度为 0.156mg/ml)。(3)对照组：设细胞对照组(A 组)和药物对照组(B 组)， 细胞对照组接种对照液，35、5CO2 箱内吸附 2h，换成细胞维持液；药物对 照组接种对照液，35、5CO2 箱内吸附 2h，换成用细胞维持液稀释的黄芩苷 (终浓度为 0.156 mg/ml)。各组依据实验要求，继续在上述条件下培养，于 RSV 感染后/药物治疗后的不同时间点(6
