乌司他丁对兔急性肺损伤保护作用及其机制研究

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1、急诊医学专业毕业论文急诊医学专业毕业论文 精品论文精品论文 乌司他丁对兔急性肺损伤保乌司他丁对兔急性肺损伤保护作用及其机制研究护作用及其机制研究关键词：乌司他丁关键词：乌司他丁 肺损伤保护肺损伤保护 急性肺损伤急性肺损伤 核因子核因子-B-B 失血性休克失血性休克 大肠杆菌大肠杆菌 内毒素内毒素 肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子-摘要：目的： 本实验采用兔失血性休克复合内毒素 ALI 模型，观察失血性休 克复合内毒素 ALI 兔 NF-B 的变化规律，探讨 ALI 的发生发展与 NF-B 的活 化关系，研究应用乌司他丁抑制 NF-B 的活化治疗 ALI 的机制，以期为乌司他 丁临床治疗 ALI 提供理

2、论依据。 方法： 1、实验分组 实验动物采用新 西兰大耳白兔 90 只，随机分为 3 组：对照组(A 组)、失血性休克复合内毒素组 (B 组)、失血性休克复合内毒素乌司他丁治疗组(C 组)。A、B、C 组动物均进 行麻醉、固定、动静脉插管，操作成功后，B、C 组动物在 15 分钟内经股动脉 放血至平均动脉压(MAP)405mmHg(记录放血量)，通过放血或回输的方式维持 MAP 在该水平 60 分钟后开始，在 2h 内用微泵由股静脉回输放出的自身血液及 放血量 2 倍的乳酸钠林格氏液复苏；B 组动物复苏结束后用微泵将大肠杆菌内 毒素(LPS)50ug/kg(稀释成 5ml)于 30 分钟内自静

3、脉内泵入；C 组动物于泵入与 B 组相同剂量 LPS 前静推乌司他丁 50000U/kg(20000U/ml)；A 组只给予麻醉、 置管，不予放血及复苏，在 B、C 组给予 LPS 的相应时间点，输入与其相同剂量 的生理盐水。各组分别于制模成功后 1h、4h、8h、24h、48h 检测动脉血氧分压、 血清 TNF- 含量、肺组织内 NF-B 含量、肺干湿重比(D/W)，并行肺组织学检 查。 2、主要实验方法 (1)用失血性休克复合内毒素打击法制作大耳白兔 ALI 模型； (2)用 GEM P300 血气分析仪进行血气分析检查； (3)用双抗体 夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清肿瘤坏

4、死因子 (TNF-)浓度； (4)采用免疫组织化学的方法观察肺组织内 NF-B 的变化情况，并用 Smart Scape 图像分析仪对结果进行半定量分析； (5)观察各组肺大体外观，取左 肺计算肺 D/W，右肺下叶观察肺组织病理学改变； 3、统计方法 用 SPSS13.0 统计软件进行统计分析，数据采用 XSD 表示，采用重复测量数据的两因素多 水平方差分析，两变量间的关系采用直线相关分析。P0.05 为统计学无差异， P0.05 或 P0.01 为统计学差异显著。 结果： 1、各组动物的 PaO2 改 变存在组间差别(P0.01)，各组 PaO2 在不同时间点变化的趋势不同(P0.01)。

5、其中 B 组动物各时相点 PaO2 均呈进行性下降，而 C 组 PaO2 在 4h 时达到最低值 后逐渐上升，8h、24h、48h 时均较 B 组明显升高(P0.05)。 2、各组动物 的 TNF- 改变存在组间差别(P0.01)，各组 TNF- 在不同时间点变化的趋势 不同(P0.01)。其中 B、C 组动物 1h 后 TNF- 均显著高于 A 组，并均于 4h 达 到最高峰，随后逐渐下降，但 C 组降幅较 B 组明显(P0.05)。 3、免疫组织 化学结果发现：B、C 组动物肺组织内 NF-B p65 蛋白呈棕黄色阳性反应，其 中 B 组 NF-B p65 呈强阳性免疫反应；C 组 NF-

6、B p65 呈弱阳性免疫反应。 Smart Scape 图像分析后发现：各组动物的 NF-B p65 活化程度存在组间差别 (P0.01)，各组 NF-B p65 在不同时间点变化的趋势不同(P0.01)。其中 B、C 组动物 1h 后 NF-B p65 均显著高于 A 组，并均于 4h 达到最高峰，随后 逐渐下降，但 C 组降幅较 B 组明显(P0.05)。 4、各组动物的肺组织 D/W 值 改变存在组间差别(P0.01)，各组 D/W 在不同时间点变化的趋势不同(P0.01)。其中 B 组动物 D/W 进行性下降，而 C 组 D/W 在 8h 时达到最低值后逐渐上升 (P0.05)。 5、

7、B 组动物 1h、4h、8h、24h、48h NF-B 活性与 TNF- 含 量相关性分析显示，NF-B 活性与 TNF- 含量之间的变化存在显著相关性 (r=0.8240，r=0.8760，r=0.8130，r=0.8260，r=0.8410。P0.05)。 6、肺 组织病理切片示 B 组动物可见肺泡壁增厚、炎性细胞浸润、局灶出血、血栓形 成、部分肺泡萎陷、肺泡腔内可见水肿液，而 C 组动物肺组织可见少量炎性细 胞浸润，出血少见，肺间质充血、水肿等病理改变较 B 组显著减轻。两者均随 时间延长而加重。 结论： 1、ALI 早期肺组织 NF-B 的活性表达、血清 TNF- 的含量均明显升高，且

8、与动物的病情轻重相关，提示 NF-B 和 TNF- 参与了 ALI 早期的肺组织损伤并发挥重要作用。 2、相关分析提示，ALI 早 期 NF-B 激活与 TNF- 释放之间的变化存在显著相关性，提示 NF-B 信号转 导通路的活化，促进早期炎症因子大量释放，导致 ALI 的发生。 3、本实验 研究结果表明，乌司他丁通过抑制 NF-B 表达，减少 TNF- 释放，抑制炎症 反应，改善 ALI 动物的氧合，进而减轻 ALI，因而具有一定的肺保护作用。正文内容正文内容目的： 本实验采用兔失血性休克复合内毒素 ALI 模型，观察失血性休克 复合内毒素 ALI 兔 NF-B 的变化规律，探讨 ALI 的

9、发生发展与 NF-B 的活化 关系，研究应用乌司他丁抑制 NF-B 的活化治疗 ALI 的机制，以期为乌司他丁 临床治疗 ALI 提供理论依据。 方法： 1、实验分组 实验动物采用新西 兰大耳白兔 90 只，随机分为 3 组：对照组(A 组)、失血性休克复合内毒素组(B 组)、失血性休克复合内毒素乌司他丁治疗组(C 组)。A、B、C 组动物均进行 麻醉、固定、动静脉插管，操作成功后，B、C 组动物在 15 分钟内经股动脉放 血至平均动脉压(MAP)405mmHg(记录放血量)，通过放血或回输的方式维持 MAP 在该水平 60 分钟后开始，在 2h 内用微泵由股静脉回输放出的自身血液及 放血量

10、2 倍的乳酸钠林格氏液复苏；B 组动物复苏结束后用微泵将大肠杆菌内 毒素(LPS)50ug/kg(稀释成 5ml)于 30 分钟内自静脉内泵入；C 组动物于泵入与 B 组相同剂量 LPS 前静推乌司他丁 50000U/kg(20000U/ml)；A 组只给予麻醉、 置管，不予放血及复苏，在 B、C 组给予 LPS 的相应时间点，输入与其相同剂量 的生理盐水。各组分别于制模成功后 1h、4h、8h、24h、48h 检测动脉血氧分压、 血清 TNF- 含量、肺组织内 NF-B 含量、肺干湿重比(D/W)，并行肺组织学检 查。 2、主要实验方法 (1)用失血性休克复合内毒素打击法制作大耳白兔 ALI

11、 模型； (2)用 GEM P300 血气分析仪进行血气分析检查； (3)用双抗体 夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清肿瘤坏死因子 (TNF-)浓度； (4)采用免疫组织化学的方法观察肺组织内 NF-B 的变化情况，并用 Smart Scape 图像分析仪对结果进行半定量分析； (5)观察各组肺大体外观，取左 肺计算肺 D/W，右肺下叶观察肺组织病理学改变； 3、统计方法 用 SPSS13.0 统计软件进行统计分析，数据采用 XSD 表示，采用重复测量数据的两因素多 水平方差分析，两变量间的关系采用直线相关分析。P0.05 为统计学无差异， P0.05 或 P0.01 为统计学差异显

12、著。 结果： 1、各组动物的 PaO2 改 变存在组间差别(P0.01)，各组 PaO2 在不同时间点变化的趋势不同(P0.01)。 其中 B 组动物各时相点 PaO2 均呈进行性下降，而 C 组 PaO2 在 4h 时达到最低值 后逐渐上升，8h、24h、48h 时均较 B 组明显升高(P0.05)。 2、各组动物 的 TNF- 改变存在组间差别(P0.01)，各组 TNF- 在不同时间点变化的趋势 不同(P0.01)。其中 B、C 组动物 1h 后 TNF- 均显著高于 A 组，并均于 4h 达 到最高峰，随后逐渐下降，但 C 组降幅较 B 组明显(P0.05)。 3、免疫组织 化学结果发

13、现：B、C 组动物肺组织内 NF-B p65 蛋白呈棕黄色阳性反应，其 中 B 组 NF-B p65 呈强阳性免疫反应；C 组 NF-B p65 呈弱阳性免疫反应。 Smart Scape 图像分析后发现：各组动物的 NF-B p65 活化程度存在组间差别 (P0.01)，各组 NF-B p65 在不同时间点变化的趋势不同(P0.01)。其中 B、C 组动物 1h 后 NF-B p65 均显著高于 A 组，并均于 4h 达到最高峰，随后 逐渐下降，但 C 组降幅较 B 组明显(P0.05)。 4、各组动物的肺组织 D/W 值 改变存在组间差别(P0.01)，各组 D/W 在不同时间点变化的趋势

14、不同(P0.01)。 其中 B 组动物 D/W 进行性下降，而 C 组 D/W 在 8h 时达到最低值后逐渐上升 (P0.05)。 5、B 组动物 1h、4h、8h、24h、48h NF-B 活性与 TNF- 含 量相关性分析显示，NF-B 活性与 TNF- 含量之间的变化存在显著相关性 (r=0.8240，r=0.8760，r=0.8130，r=0.8260，r=0.8410。P0.05)。 6、肺 组织病理切片示 B 组动物可见肺泡壁增厚、炎性细胞浸润、局灶出血、血栓形成、部分肺泡萎陷、肺泡腔内可见水肿液，而 C 组动物肺组织可见少量炎性细 胞浸润，出血少见，肺间质充血、水肿等病理改变较

15、B 组显著减轻。两者均随 时间延长而加重。 结论： 1、ALI 早期肺组织 NF-B 的活性表达、血清 TNF- 的含量均明显升高，且与动物的病情轻重相关，提示 NF-B 和 TNF- 参与了 ALI 早期的肺组织损伤并发挥重要作用。 2、相关分析提示，ALI 早 期 NF-B 激活与 TNF- 释放之间的变化存在显著相关性，提示 NF-B 信号转 导通路的活化，促进早期炎症因子大量释放，导致 ALI 的发生。 3、本实验 研究结果表明，乌司他丁通过抑制 NF-B 表达，减少 TNF- 释放，抑制炎症 反应，改善 ALI 动物的氧合，进而减轻 ALI，因而具有一定的肺保护作用。 目的： 本实验采用兔失血性休克复合内毒素 ALI 模型，观察失血性休克复合 内毒素 ALI 兔 NF-B 的变化规律，探讨 ALI 的发生发展与 NF-B 的活化关系， 研究应用乌司他丁抑制 NF-B 的活化治疗 ALI 的机制，以期为乌司他丁临床治 疗 ALI 提供理论依据。 方法： 1、实验分组 实验动物采用新西兰大耳 白兔 90 只，随机分为 3 组：对照组(A 组)、失血性休克复合内毒素组(B 组)、 失血性休克复合内毒素乌司他丁治疗组(C 组)。A、B、C 组动物均进行麻醉、 固定、动静脉插管，操作成功后，B、C 组动物在 15 分钟内经股