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1、药品质量标准研究及分析方 法验证等有关问题探讨四川省食品药品检验所 伍 丕 娥2005年11月30日主要内容一、药品质量标准及标准提高行动计划二、 药物研究技术指导原则三、质量标准分析方法验证 四、微生物限度检查的方法验证五、药品质量标准研究中的常见问题一、药品质量标准及标准 提高行动计划1、我国药品质量标准的沿革及概况公元659年（唐，新修本草）公元1151年（宋，太平惠民和剂局方）公元1930年（中华药典、化学药）公元1950年至今共出版8版中国药典：53、63（ 分为一、二部）、77、85、90、95、2000、 2005（分为一、二、三部）公元1950年至今：局（部）颁标准数十册公元1
2、950年至2002年：省级地方标准2、国家药品标准制定的基本原则科学、实用、规范原则质量可控性原则标准先进性原则3、标准提高行动计划背景： 2002年12月1日，我国已完成全部 上市药品的国家药品标准的制定工作，取消 了地方标准，实现了药品管理法所规定 的药品必须符合国家药品标准这一目标。然 而，改革开放二十多年来，随着医药产业和 药品检测技术水平的发展，以及加入WTO 所面临的新形势，我国早期制定的国家药品 标准已严重滞后于药品生产现状和药品检测 技术水平的发展，一些药品标准已不足以控 制药品的质量，难以保证人民用药安全有效 ，亦给一些假冒伪劣药品扰乱市场、危害百姓生 命健康以可乘之机。因此
3、2004年2月，根 据国务院“食品药品放心工程”的总 体要求，国家食品药品监督管理局颁 布了国食药监注200435号文，启动了 提高国家药品标准行动计划。计划用3 5年时间，实现国家药品标准的检测 技术达到国际先进水平。 标准提高行动计划的总体目 标(1)在5年内(2004年2008年)分期、分批地完成中 药120册的4000余个品种，化学药品(9册及历版 药典遗留品种)500个品种；(2)早期新药转正标准（99、2000年前转正）约300 种品种的标准提高工作；(3)常用药用辅料约50种的标准制定工作；(4)完成中国药典(2005年版)附录检测方法的科 研和提高工作；实现国家药品标准的质量可
4、控性 及与国际先进标准的接轨。 二、药物研究技术指导原则为促进我国药品的研究开发，指导药物研究 单位用科学规范的方法开展药品研究工作，国 家局自2003年启动了药物研究技术指导原则的起草和修订工作。指导原则的修订是以中华 人民共和国药品管理法和药品注册管理办 法为依据，以科学性、前瞻性、可操作性为 指导思想，充分借鉴了ICH等技术指导原则。今年3月18日国家食品药品监督管理局（国食 药监注2005106号文） 发布了16个有关化学药 物研究的技术指导原则，其中涉及药学研究的有8 个，涉及药品质量标准研究与分析方法验证有2个：化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则化学药物质量控制分析方法验
5、证技术指导原则今年7月1日国家食品药品监督管理 局（国食药监注2005331号文） 发布 了12个有关中药、天然药物研究的技 术指导原则，其中涉及药学研究的有4个，目前暂无涉及质量标准规范研究 和分析方法验证技术的指导原则三、质量标准分析方法验 证方法学研究包含方法的选择及验证（一）质量标准分析方法验证的技术指导文 件有： 1、化学药物质量控制分析方法验证技术指 导原则（编号 HGPH5-1)2、中国药典2005年版二部附录 药品质量标准分析方法验证指导原则 3、中国药典2005年版一部附录 中药质量标准分析方法验证指导原则 4、 1999年11月12日国家药品监督 管理局（国药管注19993
6、63号文）发 布了中药新药研究的技术要求5、化学药物质量标准建立的规范化 过程技术指导原则要求质量标准中建立的 分析方法必须经过验证6、药品注册的国际技术要求（ ICH)Q2a和Q2b（1、2、3、5、6中要求验证的项目和 内容基本一致）（二）关于ICH的简介 ： 人用药品注册技术要求国际协调会（ International Conference on Hamonisation Technical Requirements for Rejistration of Pharmaceuticals for Human Use) ICH是1990年由美国、日本、欧盟三 方的政府药品管理部门和制药行业
7、共同发起 ，旨在协调各国药品注册的技术要求，制定 了一系列有关药品质量（Q)、疗效(E)、安 全性(s)的技术指导原则,迄今已举行了六次 会议，共制定了60多个文件。 ICH目前共有17个成员国，我国不是， 但是WHO要求各非成员国积极推广应用 ICH。 我国目前药品注册的技术要求自 成体系，国家局要求将ICH作为主要借 鉴和参考依据。 ICH中的Q2a和Q2b是分析方法验 证的专门章节。（三）现将中药新药质量标准研究的技 术要求（1999年11月执行）与现行的分析方法验证的内容作一比较（见 下表）99年中药标准研究“技术要求”与现行的分析方法验证项目比较表标准研究技术要求（99年11月 ）
8、现行的方法验证 要求 回收率准确度精密度 重复性精密度重复性（同一个人在较 短的间隔时间 内） 中间精密度（不同人、 不同设备 、不同时间 ） 重现性（不同实验 室、 不同人）空白干扰试验 （专属性）专属性 检测 限 定量限线性和线性范围线性 耐用性 范围 稳定性1、 现行的分析方法“验证指导原则”，各验证内容更为科学，方法更为细化，可操作性更强，但仍有难于理 解和掌握之处：（1）关于“范围”中药怎样考察，有待探讨（2）中药样品的前处理与检测结果的准确度、精密度直 接相关，“耐用性”能否完全评价样品前处理的合理性？应怎样与各项验证有机结合，有待探讨2、应根据不同检测项目的具体情况，有针对性的进
9、行方法验证（见下表）检验项目和验证内容项目 内容鉴别限量检查含量测定及 溶出度测定定量限度准确度重复性中间精密度 重现性 专属性 检测 限定量限线性范围耐用性 准确度（真实度）：准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近 的程度，一般用回收率（%）表示，准确度应在规定的范围测试。用于定量测定的 分析方法均需做准确度验证。1、准确度的考察方法中药含量分析一般用已知纯度的对照品做加样回收测定（化学药品作直接回收实验），即 于已知被测成分含量的供试品（化学药品为空 白样品）中精密加入一定量的已知纯度的被测 成分对照品，依法测定。用实测值与供试品中 含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。 在加
10、样回收实验中须注意对照品的加入量与供试品中被测成分含有量之和必须在标 准曲线线性范围之内；加入的对照品的量要 适当，过小则引起较大的相对误差，过大则 干扰成分相对减少，真实性差。加入对照品的操作过程必须有可操作性。式中 A为供试品所含被测成分量（化 学药品A值为零）；B为加入对照品量；C为实测值。回收率 %=C-A100%B2、数据要求在规定范围内，取同一浓度的供试品 ，用6个（原至少5个）测定结果进行评价 ；或设计3个不同浓度，每个浓度各分别 制备3份（原两份）供试品溶液进行测定 ，用9个测定结果进行评价，一般中间浓 度加入量与所取供试品含量之比控制在1 ：1左右（化学药品为100%浓度）。
11、应报 告供试品取样量、供试品中含有量（化学 药品无此项）、对照品加入量、测定结果 和回收率（%）计算值，以及回收率（% ）的相对标准偏差（RSD%）。 精密度：指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结 果之间的接近程度。一般用偏差、标准偏 差或相对标准偏差表示。精密度包括：重 复性、中间精密度、重现性。用于定量测 定的分析方法均应考察方法的精密度。1、重复性（间歇测量精密度）在相同的操作条件下 ，较短的时间间隔精密度。（1） 用100%浓度水平至少测定6次（5次）进行评价，（2） 在规定的范围内，设计3个不同浓度水平，每个 浓度制备3份供试液，每份测定3次，共9个结果进行评
12、价。2、中间精密度 为考察随即变动因素对精密度的影响，应进行中间精密度试验。变动因素为不同日期、不同分 析人员、不同设备等。(ICH认为中间精密度没有必要逐个考察每个因素， 鼓励使用较为简化的矩阵试验设计)3、当分析方法将被法定标准采用时，应 进行重现性试验。例如，建立药典分析方 法时通过不同实验室的复核检验得出重现 性结果。4、数据要求重复性、中间精密度、重现性均应报告 标准偏差、相对标准偏差和可信限。目前，分析方法研究中一般只作了“重 复性”，药检所的技术复核相当于是“重现 性”考察，经“重现性”验证的分析方法，可 不考察“中间精密度”。 专属性：专属性系指在其他成分可能存在下，采用的方法
13、能正确测定出被测成分 的特性。鉴别实验、限量检查、含量测定等 方法均应考察其专属性。 1、鉴别实验应能与可能共存的物质（如辅料）或结构相似化合物区分。不含被测成分的供 试品（空白样品）以及结构相似或组分中 的有关化合物，均不得干扰测定。显微鉴 别、色谱及光谱鉴别等应附相应的代表性 图象或图谱。 2、含量测定和限量检查以不含被测成分的供试品（除去含待测成分药材或不含待测成分的模拟处方 ）实验说明方法的专属性。色谱法、光谱 法等应附代表性图谱，并标明相关成分在 图中的位置，色谱法中的分离度应符合要 求。必要时可采用二极管阵列检测和质谱 检测，进行峰纯度检查。 检测限：指供试品中被测物能被检出的最低
14、量。该指标的意义在于考察方法是否具备灵敏的检测能力，特 别是微量有害杂质的检查应证明其方法具有足够低的检 测限，以保证检出需控制的杂质。如化学原料药中的有 机溶剂残留量、中药中马兜铃酸的检查等，均应对检测 限进行考察。 确定检测限有两种方法：（1）、直观法 用一系列已知浓度的供试品进行分析，试验出能被可靠检出的最低浓度或量。仪器或非仪器方 法均可使用。（2）、信噪比法 仅适用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度供试品测出的 信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能 被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪 比为3：1或2：1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。（3）、数据要求 应附测试图
15、谱，说明测试过程和检测限结果。定量限：定量限系指供试品中被测成分能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定 准确度和精密度。用于限量检查的定量测定的 分析方法（如以5-羟甲基糠醛为对照品测定葡糖 糖注射液中5-羟甲基糠醛的量、以马兜铃酸A为对照测定含量等）应确定定量限。常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为 10：1时相应浓度或注入仪器的量进行确定。 线性：线性系指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物浓度直接呈正比关 系的程度。应在规定的范围内测定线性关系。可用一储备液经精密稀释，或分别精密称样 ，制备一系列供试品的方法进行测定，至 少制备5个浓度的供试品。以测得的响应信号作为被测物浓度的
16、函数作图，观察是 否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归 。必要时，响应信号可经数学转换，再进 行线性回归计算（如采用蒸发光散射检测 器需取响应值的对数）。数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。范围：范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度 或量的区间。范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。一般来 说，线性范围窄、精密度要求高，范围就相 应较窄。对于有毒的、具特殊功效或药理作 用的成分，其范围应大于被限定含量的区间 。溶出度或释放度中的溶出量测定，范围应 为限度的20%。 范围不是线性关系考察的浓度范围，而是测定方法应能达到的准确测定的范围 。范围是规定值，对于化学药品，是根据 测定项目和精密度要求规定的，如制剂规 定含量为
