血栓与止血检测2015-2

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1、血栓与止血检测内容一、止血、凝血和 纤溶机制 二、止凝血障碍的 实验室检测血管壁检测血小板检测凝血因子检测抗凝物质检测纤溶活性检测 三、检测项目的选 择和应用目的要求n掌握止血与凝血障碍常用 实验室检查项目及其临床意 义 n熟悉引起止血与凝血障碍 的原因 n了解出血性疾病的实验室 诊断步骤及常用检查方法的 原理和临床意义血管中流动的血液为什么不凝固? 破损的血管为什么能止血?止血与凝血调节抗凝与纤溶的调节出血出血血栓血栓正常生理状态低凝状态 出血倾向血栓前状态 血栓形成?正常止血机能两个方面两个方面四个因素四个因素凝血机制抗凝机制血管壁血管壁(vessel wall)血小板(血小板(plate

2、letplatelet)凝血系统(coagulation system)抗凝及纤溶系统(anticoagulationand fibrinolytic)一一. . 凝血与抗凝机制的病理生理基础凝血与抗凝机制的病理生理基础正常止血过程.神经反射 管腔收缩 血流变慢出血/停止.内皮细胞分泌vWF、Fn 促进plt粘附.释放FIII 启动外源性 凝血途径.暴露内皮下胶原释放u-PA,激活纤溶系统 促进血小板粘附启动内源性凝血途径血管壁机制血管受损后五大因素2. 血小板机制1) 维持血管壁的完整性,毛细血管通透性 2) 粘附、聚集在血管破损处,形成白色血栓 3) 释放活性物质,促进血小板聚集(ADP,

3、ATP,PF4等),增强血管收缩(TXA2,5-HT等) 4) 提供膜磷脂表面(PF3),提供凝血反应介质 5) 促使血块收缩(血栓收缩蛋白)形成稳固血栓 五大因素n12个经典因子I-XIII( FVI=Va)高分子激肽原(HMWK)和 前激肽释放酶(PK) n除IV(Ca+)外,均为蛋 白质。大多数由肝脏产生 。FIII广泛存在。nII、VII、IX、X 合成依 赖于Vitk,称Vitk依赖因 子 3 凝血因子机制五大因素分为三个阶段,两个途径(内源性、外源性)l 第一阶段:凝血酶原激活物形成l 第二阶段:凝血酶形成l 第三阶段:纤维蛋白形成内凝途径 外凝途径凝血活酶 生成期凝血酶 生成期纤

4、维蛋白 生成期aaaa Ca2+ PF3aa Ca2+ PF3凝血酶原 ()凝血酶 aaCa2+纤维蛋 白原(I)纤维蛋 白单体 (Ia)交联纤 维蛋白a共同途径正常的止血机制 - 3个时相血管破损后:1 .血管收缩2 .一期止血 - 血小板血栓(血小板黏附、聚集于血管破损处)3 .二期止血 血浆凝固,纤维蛋白网加固血小板血栓,(凝血系统启动,纤维蛋白生成)防止机体凝血过度,以保 证血液畅通。 4. 抗凝血机制吞噬清除五大因素凝血过程中有关物质和产物细胞抗凝机制:单核-巨噬细胞u 抗凝血酶( Antithrombin,AT) 灭活、a、a、 a、a;体内最重要的抗凝物质 ,其抗凝作用占体内总抗

5、凝血 功能的5067,在肝素介 导下起作用。 u 肝素辅因子(Heparin cofactor , HC) 抗 凝谱同AT-活性仅AT-的1/3在肝素协同下作用可扩大 1000倍注意:病理性抗凝物抗凝血酶系统:组织因子途径抑制物Tissue Factor Pathway Inhibitor TFPITFPI抑制“TF-Fa”复合物和a蛋白C/蛋白S系统灭活Va、 VIIIa,激活纤溶系统5.纤维蛋白溶解系统主要作用:分解纤维蛋白( 原),清除血管内由于纤维 蛋白沉积引起的阻塞,保持 血流通畅纤溶酶原纤溶酶原纤溶酶纤溶酶u-PA t-PAa PK五大因素n原发性纤溶亢进:n凝 血瀑布没有形成,无

6、凝 血酶生成,纤溶酶活性 ,导致纤溶亢进,纤维 蛋白原被降解;nFD P n继发性纤溶亢进:n继 发于凝血酶生成后,有 纤维蛋白单体生成及交 联的纤维蛋白形成,而 后发生的纤溶。n nFDFD P P , , D-DD-D二聚体二聚体 止凝血障碍性疾病的发病机制血管壁结构与功能异常血小板质与量异常凝血因子质与量异常循环中抗凝物质增加纤溶系统异常综合因素一期止血缺陷二期止血缺陷纤溶系统缺陷二、止凝血障碍的实验检查(一)血管壁检 测1.出血时间(Bleeding Time,BT)原理 皮肤刺破后,血液自然流出到出 血自然停止所需要的时间,主要反映血管壁 和血小板相互作用。方法 出血时间测定器法,用

7、标准弹簧 针或刀片刺破皮肤2-3mm 深,观察出血自然 停止的时间。参考值 6.92.1分钟 9min为延长临床意义 nPlt明 显减少如原发或继发性Plt减少性紫癜 n血小板 功能异常(如血小板无力症)n严重缺 乏血浆某些凝血因子(vWD、DIC) n血管异 常n药物原理 对毛细血管壁施加压力,使静脉血流受阻,致 毛细血管负荷,检查一定范围内皮肤出现出血点的数目, 估计血管通透性、脆性,即观察血管壁、血管内皮、血小 板等综合止血作用。方法 血压计袖带上臂加压8min 在前臂直径5cm 圆圈内计数出血点(收缩压+舒张压)22、束臂试验2.束臂试验参考值 男性5 女性和儿 童10临床意义 阳性见

8、于: ()Plt减少 如ITP、AA ()Plt功能异常 ()血管性病变血管病变 :坏血病、败血症、血管性 紫癜; ()其他如vW病、抗血小 板药物过量。其他有关血管方面的检测:nvWF(抗原检测)n 免疫火箭电泳法、ELISAn 减低:血管性血友病( VWD)n 增高:血栓性疾病nvWF活性检测n6酮-前列素F1a测定(二)血小板检测、血小板计数 、血块收缩( CRT)原理 血浆凝固后由于血小 板变性释放的血栓收缩蛋白使 纤维蛋白网收缩而析出血清, 血块因而缩小。是血小板数量 和质量检测的双关试验。方法 全血标本注入试管中 ,静置,观察析出的血清占原 有全血量的百分比了解血块退 缩的程度。.

9、血块收缩( CRT)参考值 h 开始收缩 18h-24h 收缩完全: 血块收缩率 65.8%11%临床意义 收缩不良见于ITP、Plt无力 症、纤维蛋白原减少等。.血小板相关免疫球蛋白(pAIg )血小板自身抗体分类 :n自身抗体:血小板相关免疫球蛋 白(platelet associated Ig, PAIg,又称血小板相关抗体,如 PAIgG、PAIgMn特异性抗体:如抗GPIIb-IIIa 抗体,见于自身免疫病(ITP、 SLE)n同种抗体:多为反复输血时产生n免疫复合物相关抗体:某些病毒 感染、药物可产生测定方法:ELISApAIg增高:是免疫性血小板 减少的共同特征自身抗体(最多90

10、%),如 ITP、SLE、类风湿;同种抗体,如大量输血或血小 板、新生儿免疫性血小板减少症 ;免疫复合物相关抗体,见于药 物性、败血症及AIDS等。.血小板粘附试验参考值: 62.5 8.6 意义:n粘附减低:血小板无力症、vWD、MDS、异常蛋白增多、尿毒症、肝硬化。n粘附增高:心肌梗塞、甲亢、血栓性静脉炎、脑血栓、糖尿病、高脂血症、手术后等。 .血小板聚集试验参考值:意义: n聚 集减低:血小板无力症、 VW病、骨髓增生性疾病 ,应用抗血小板药物。n聚 集增高:静脉血栓病、 心肌梗塞、脑栓塞、糖 尿病。 (三)凝血因子检测1、凝血时间(CT)原理 观察血液自离体后,到玻璃试管中凝观察血液自

11、离体后,到玻璃试管中凝固所需时间固所需时间血液从血管中 抽出与带负电荷表面接触内源性凝血途径启动纤维蛋白形成(血液凝固)XII XII XIIaXIIa参考值6-12min6-12min(试管法)试管法) 临床意义 CT延长、CT缩短病因见APTT 。 原 理 与 方 法 nX I I 因 子 活 化 剂 C a+ +磷 脂 ( 代 替 P F 3 ) 启 动 血 浆 内 源 性 凝 血 途 径n观 察 血 浆 凝 固 时 间 ( n o r m a l : 3 1 - 4 3 s , 正 常 对 照 1 0 s 为 延 长 。 )血浆XII因子 活化剂Ca+ + 磷脂( 代替PF3)、活化的

12、部分凝血活酶时间(Activated Partial Thromboplastin Time, APTT )临床意义 主要检测内凝途径 凝血因子缺陷 延长见于:(1)内源性途径的凝血因子缺陷(、 ):血友 病A、B,因子XI缺乏症 (2)共同途径凝血因子缺陷:FV、FX、凝血酶原、纤维蛋白原(3)严重肝病、DIC (4)循环中抗凝物质增多(5)普通肝素应用的首选监测指标使APTT延长1.5-2.5 倍缩短: 高凝状态 (脑血栓、心梗、DIC高凝期)、血浆凝血酶原时间(Prothrombin Time; PT) 原 理 与 方 法 血 浆 +C a+ + + T F 血 浆 凝 固通 过 外 源

13、 性 凝 血 系 统N o r m a l : 1 1 - 1 3 s ; 应 有 正 常 对 照 , 超 过 对 照 3 s 为 延 长血浆TFCa+临床意义PT延长: 先天性凝血因子异常 :、因 子的缺乏; 后天性凝血因子异常 ,严重肝病、VitK缺乏。 纤溶亢进、DIC后期及使 用抗凝药物如双香豆素。 PT缩短:DIC、心梗、脑血栓 、血栓性静脉炎、MM、 乙醚麻醉后。4、血浆纤维蛋白原测定原理: 在受检 血浆中加人一定 量凝血酶,后者 使血浆中的纤维 蛋白原( fibrinogen,Fg )转变为纤维蛋 白,通过比浊原 理计算Fg的含量 。 参考值 : 24gL临床意义nFIB减低:肝

14、脏疾病、 DIC中晚期、原发性纤溶 亢进、低或无纤维蛋白原 血症、溶栓治疗等。nFIB增高: 血栓前状态或血栓性 疾病如脑梗塞、心机梗塞 ,非特异急性相反应急性 感染,外科手术后、恶性 肿瘤等。 2生理性:部分正常老人,妊娠晚期。5、血浆因子、和 促凝活性测定临床意义:增高 主要见于血 栓前状态和血栓性疾病,如 DVT、肺栓塞、妊高征、晚 期妊娠、口服避孕药、肾病 综合征、恶性肿瘤等。减低 FC减低 见于血友病A、vWD、F抗 体、DIC 。 FC减低见于 血友病B、肝脏病、维生素K 缺乏症、DIC、口服抗凝药 物。FC减低见于因子缺 乏症、肝脏疾病、DIC等。F C减低见于先天性因子 缺乏症

15、、肝脏疾病、DIC和 某些血栓性疾病等。6、血浆因子、和X 促凝活性测定临床意义n增高: 血栓前状态和血栓 性疾病n减低: n相 应的先天性因子、V、 和X缺乏症n获 得性主要见于肝病、DIC、 口服抗凝剂、维生素K缺乏 症等 (四)抗凝血功能检 查病 理 性 抗 凝 物 质 测 定n筛 选试 验n凝 血 酶 时 间 T Tn甲 苯 胺 蓝 纠 正 试 验nA P T T 交 叉 试 验n诊 断试 验n狼 疮 抗 凝 物 质 检 测n抗 心 磷 脂 抗 体生 理 性 抗 凝 因 子 测 定n血 浆抗 凝血 酶活 性测 定n血 浆 PC 活性 测定n血 浆 PS 抗原 和总 蛋白 测定n血 浆凝 血酶 -抗 凝血 酶复 合物1. 血浆凝血酶时间(Thrombin Time TT)原 理 :血 浆 + 凝 血 酶 纤 维 蛋 白 形 成 ; ( 1 6 1 8 s )超 过 正 常 对 照 3 s 为 延 长 。血浆标准凝血酶临床意义主要检测凝血过程第三阶段1纤维蛋白原质与量异常2FDP增多,如纤溶亢进3

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