《动物细胞的培养条件和培养基》由会员分享，可在线阅读，更多相关《动物细胞的培养条件和培养基（31页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第四节 动物细胞的培养条件和培养基细胞体外培养基本条件: 无菌 营养充足,防止有害物质 氧气 随时清除代谢有害物质 良好的生存外环境 及时分种一、动物细胞的培养条件 器材的清洗和消毒器材的清洗浸泡、刷洗、泡酸、冲洗器材的消毒灭菌物理消毒 化学消毒 水质 :电阻值大于18M,去热原。 pH:7.27.4 渗透压:290300mOsm/kg 温度:370.5 C 空气:氧的饱和质60%,氧分压40.7kPa二、动物细胞的培养基的种类和组成分3类: 天然培养基 合成培养基 无血清培养基天然培养基血清、羊水、腹水等,成分复杂、成分不稳定 合成培养基DME、 MEM、 DMEM、 HAM F12、RPM
2、I1640氨基酸 维生素 糖类 无机盐 其它成分 如：添加小牛血清添加小牛血清的作用 提供生长因子和激素 提供贴附因子和伸展因子 提供结合蛋白 提供必需脂肪酸和微量元素无血清培养基 提高重复性 减少微生物污染 供应充足稳定 产品易纯化 避免血清因素对细胞的毒性 减少血清中蛋白对生物测定的干扰无血清培养基加入添加剂 生长因子和激素 结合蛋白 贴附因子和伸展因子 有利细胞生长的因子和元素第五节 动物细胞培养的基本方法动物细胞大规模培养的方法：依细胞种类: 原代培养、传代培养 依培养基: 液体培养、固体培养依培养器和方式:静止培养、旋转培养、搅拌培养、微载体培 养、中空纤维培养、固定床或流化床培养一
3、 细胞分离v1. 离心分离法v2. 消化分离法二 细胞计数v1. 自动细胞计数器计数v2. 血球计数板计数v3. 结晶紫染色细胞核计数法v4. MTT染色计数法三 细胞传代v1. 悬浮细胞传代v2. 贴壁细胞的传代四 细胞的冻存和复苏v1. 细胞的冻存v2. 细胞的复苏第六节 动物细胞大量培养的方法和 操作方式一、动物细胞大规模培养的方法生产实际分为：悬浮培养，贴壁培养，贴壁-悬浮培养悬浮培养让细胞自由的悬浮于培养基内生长繁殖。贴壁培养让细胞贴附在某种基质上生长繁殖的培养方 法。贴壁-悬浮培养v 微载体培养v 包埋和微囊培养v 结团培养二、动物细胞培养的操作方式分批式操作 半连续式操作 灌流式
4、操作第七节 动物细胞生物反应器及其检 测控制系统一、动物细胞生物反应器的类型及其基本 结构 搅拌式生物反应器 气升式生物反应器 中空纤维式生物反应器 透析袋或膜式生物反应器 固定床或流化床式生物反应器搅拌式生物反应器气升式生物反应器中空纤维式生物反应器 平床式中空纤维式生物反应器 透析袋或膜式生物反应器固定床或流化床式生物反应器CellGen plus生物反应器二、动物细胞生物反应器的 检测控制系统 培养过程需检测的物化参数直接在线检出 取样离线检测 检测后计算 主要参数的检测和控制方法主要参数的检测和控制方法 温度 pH 在培养初期，控制进氧量 当细胞密度提高后控制NaHCO3的量 溶氧 搅
5、拌 进出液流量 其它v一 动物细胞产品的常用纯化方法1. 离心2. 离子交换层析3. 凝胶过滤4. 亲和层析5. 盐析和有机溶剂沉淀6. 透析7. 高压液相层析第八节 动物细胞产品的纯化方法和 质量要求v二 动物细胞产品的质量要求1. 对工程细胞的要求2. 对生产工艺的要求3. 对产品的质量要求v一 类淋巴细胞干扰素v二 组织型纤溶酶原激活剂v三 单链尿型纤溶酶原激活剂v四 促红细胞生成素v五 凝血因子第九节 动物细胞产品的制造实例第十节 动物细胞制药的前景与展望一、提高产量降低成本和改进质量方面 的研究 二、转基因动物的研究 三、组织工程的研究一、提高产量、降低成本和改进质量方 面的研究为了提高产量,要提高细胞表达水平。 为降低成本，须改进培养基配方。 为改进产品质量，关键是糖基化质量。 改进工艺，生产设备等二、转基因动物的研究自1982年Palimiter提出用转基因动物来 生产药用蛋白以来，发展迅速。优点：产量高成本低质量与天然一样。现还有不成熟之处。对动物和人的健康的影响。三、组织工程的研究组织工程：通过对大量细胞的培养，并用细 胞直接作为一种治疗手段用于临床，或用培 养的细胞进一步加工构成一种组织，如人造 皮肤、人造肝脏、人造胰腺、人造血管、人 造骨等并用于临床治疗。
