微生物的常规鉴定技术

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1、微生物的常规鉴定技术微生物的常规鉴定技术 一、形态结构和培养特性观察 二、生理生化试验一、形态结构和培养特性观察 形态结构：染色（形状、大小、排列方 式） 、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜 、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性 培养特性：菌落(colony)细胞的特殊结构菌落特征描述 大小、形态、颜色、光泽度、透明度、 质地、隆起形状、边缘特征 特殊结构菌落特征 细菌菌落的共同特征 湿润、粘稠、易挑起（菌体 和基质结合不紧密），质地均匀、菌落各部位的颜色 一致等。 但不同细菌的菌落也具有自己特有特征，例 无鞭 毛、不能运动的细菌。 球菌菌落 常形成较小、较厚、边缘较整齐的菌落； 有鞭毛的细菌菌落

2、较大、扁平，边缘波状、锯齿状 等； 有荚膜 较大且表面光滑，无荚膜者则表面较 粗糙。 有芽孢 表面常有皱褶且很不透明。各类微生物的菌落特征微生物类别 菌落特征单细 胞微生物菌丝状微生物细菌酵母菌放线菌霉菌 主 要 特 征细 胞形态特征小而均匀、 个别有芽孢大而分化细而均匀粗而分化相互关系单个分散或 按一定方式 排列单个分散或 假丝状丝状交织丝状交织菌 落含水情况很湿或较湿较湿干燥或较干 燥干燥外观特征小而突起 或大而平坦大而突起小而紧密大而疏松 或大而致密 参 考 特 征菌落透明度透明或稍透 明稍透明不透明不透明菌落与培养基结合 度不结合不结合牢固结合较牢固结合菌落的颜色多样单调十分多样十分多

3、样菌落正反面颜色差 别相同相同一般不同一般不同细胞生长速度一般很快较快慢一般较快气味一般有臭味多带酒香常有泥腥味霉味根据菌丝形态和功能的不同，放线菌菌丝可 分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。放线菌的结构二、生理生化试验 微生物生化反应是指用化学反应来测定 微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴 别一些在形态和其它方面不易区别的微 生物。因此微生物生化反应是微生物分 类鉴定中的重要依据之一。 二、生理生化试验 、糖酵解试验 、淀粉水解试验 3、V-P试验 4、甲基红（Methyl Red）试验 5、靛基质（Imdole）试验 6、硝酸盐（Nitrate）还原试验二、生理生化试验 7、明胶（Gela

4、tin）液化试验 8、尿素酶（Urease）试验 9、氧化酶（Oxidase）试验 10、硫化氢（H2S）试验 11、三糖铁（TSI）琼脂试验 12、硫化氢-靛基质-动力（SIM）琼脂试验其他鉴定手段 染色体DNAG+Cmol%含量 生物体的遗传物质DNA中四种碱基G、C、A 、T的排列和比例是DNA特性的决定因素。染 色体DNA G+Cmol%含量即DNA的碱基组 成具有种特异性且不受菌龄和外界因素的影响, 成为细菌分类和菌种鉴定的重要指标 测定方法： 纸层析法纸、浮力密度法、高效液相色谱法、 热变性温度(Tm)测定法 、连续荧光检测法 微生物与乳酸菌的鉴定 参见伯杰氏细菌手册与乳酸细菌 分

5、类鉴定及方法 API微生物鉴定试剂条法国梅里埃公司生产3、V-P试验 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能 分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合， 脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境 下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰 与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V -P（+）反应。 4、甲基红（Methyl Red）试验 肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分 解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分 解中，由于糖代谢的途径不同，可产生 乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性 产物，可使培养基pH值下降至pH4.5以 下，使甲基红指示剂变红。 5、靛基质（Imdole）试验 某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生 成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现 出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合， 形成玫瑰吲哚，为红色化合物。 6、硝酸盐（Nitrate）还原试验 有些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将 硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等。 亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验。