《药用藻类中多糖对双歧杆菌的促增殖作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《药用藻类中多糖对双歧杆菌的促增殖作用（21页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1药用藻类中多糖对双歧杆菌的促增殖作用关 键 字:多糖 双歧杆菌 促增殖摘 要:目的：探索藻类中药中多糖对双歧杆菌的促增殖作用。方法：在恒温条件下，以时间和多糖浓度为影响因素，了解不同藻类中多糖对双歧杆菌的促增殖作用，对其量效关系进行分析结果：实验结果表明在 37多糖浓度在 0 到 2范围内，双歧杆菌数随多糖浓度的增加而上升；多糖浓度继续升高，则反而下降。结论：海藻中多糖在一定浓度下能很好地促双歧杆菌生长。 Abstract:Object: To research the effect of polysaccharide of algae which belong to the chinese
2、 traditional medicine acting on proliferation of bifidobacteria.Method: Keep on the temperature. Carry out the experiment with time factor and concentration factor.Analysis the connection of estimate and effect.2Result: The amount of bifidobacteria appears an ascending trend with the concentration 0
3、2.0%. And appears appears a descendant trend with the concentration higher than 2% under 37Discussion: Polysaccharide of algae can be an efficient proliferative factor to bifidobacteria.Keywords: Proliferation, Polysaccharide, Bifidobacteria一、前言藻类是低等的海洋隐花类植物，包括紫菜、海带、羊栖菜等。其含有多种生命物质，尤其是海藻多糖有调节细胞分裂与分化、
4、调节细胞生长和衰老及维持生命有机体的正常代谢的功效活性。能够起到抗病毒、抗肿瘤、抗辐射、抗突变、抗氧化、增强免疫机能的效果。随着多糖研究的进展，藻类以其很好的药用价值而得到广泛和深入的研究。双歧杆菌做为人体肠道内占绝对优势，对人体具有许多重要生理功能的有益菌。随着微生态学的迅猛发展，双歧杆菌的临床保健作用逐渐被人们认识和接受，并对其进行了更深入的研究。研究药用海藻中多糖对双歧杆菌的促增殖作用，验证海藻中多糖对双歧杆菌有显著的增殖作用，可作为双歧因子进一步开发研制，促进微生态学发展。而我们的日常膳食结构中尽可能多调配这类食3物，以促进肠道内双歧杆菌的生长，调节肠道菌群结构，使双歧杆菌等有益菌群占
5、优势。双歧杆菌是人体的生理细菌，为革兰氏阳性细菌，无芽孢，不运动，严格厌氧，形态多变，不同种或同种不同菌龄，不同生长环境而呈现弯曲杆状 L 或 Y 形等多种形态而得名，是人体肠道内数量最多饿一种菌。终生存在于人体与人的健康息息相关。人的生理、免疫、营养、消化、抗肿瘤、抗衰老、药物效能等都离不开人体自身携带的微生物群人体肠道内的双歧杆菌具有有病治病，无病防病和保健的作用，它能形成生理屏障，阻止致病菌的定植和入侵，保护宿主免受致病菌侵害。能改善蛋白质代谢，提供多种 B 族维生素，能促进钙铁吸收。还能提高免疫力，增强抗肿瘤等多种作用。双歧杆菌的不足意味着人体发生健康危机，需要及时补充。随着微生态理论
6、体系的建立，使双歧杆菌的临床保健作用逐渐被人们认识和接受。现国内双歧杆菌微生态调节剂所用菌的生产培养原料较贵，如能选择合适剂量的海藻多糖直接调节人体肠道菌，增殖体内双歧杆菌则能有较广的发展前景。本实验中的海藻多糖为双歧因子。能促进双歧杆菌增殖所必需的无毒物质称为双歧因子，双歧因子有的是含氮多糖或寡糖，有的是粘蛋白或酶类，有的是肽类或核酸成分其来源充足，分布广泛。4二、海藻多糖促双歧杆菌生长实验（一）实验材料1样品 羊栖菜多糖：利用乙醇沉淀法从羊栖菜中提取。海带多糖：利用乙醇沉淀法从海带中提取。海藻 为马尾藻科植物海蒿子或羊栖菜的藻体。咸寒，归肝肾经，有消痰软坚，利水消肿之作用。 本草纲目中记载
7、：海藻，现咸能润下，寒能泄热引水，故能消瘿瘤，结核之坚聚，而除浮肿、脚气、痰气之湿热，使邪气自小便出也。昆布 为海带科植物海带或翅藻科植物昆布的叶状体。咸寒，归肝肾经，有消痰软坚，利水消肿之作用。 别录记载昆布，主十二种水肿，瘿瘤聚结气。本实验中将用羊栖菜和海带羊栖菜Sargassum fusiforme (Harv.) Setch：藻体黄褐色，肥厚多汁，高 1540cm。固着器为是北太平洋西部特有的暖温带植物，属褐藻类马尾藻科。是一种营养丰富的藻类，干品每百克含蛋白质 10.6 克，糖类 47 克，灰分 18.3 克，脂肪 1.3 克，钙 1400 毫克，磷 100 毫克，钾 4400 毫克
8、，铁 5.5 毫克，胡萝卜素 550 毫克；还有多种维生素和微量元素。海带 Laminaria japonica Aresch属褐藻门海带科，是一种大型食用海藻，有丰富的营养。每 100 克海带中含有蛋白质 8 克， 5甘露醇 14 克，钾 4.36 克、铁 150 毫克，超过菠菜，油菜几倍至几十倍。更为突出的是，海带富含微量元素碘，每 100 克海带含碘高达 24000 微克。多糖提取工艺取海藻置于托盘放入恒温培养箱低温烘干，用电磨机打碎，使之成粉末状。用天平称取海藻粉 50g 放入 500ml 锥形瓶中加蒸馏水250ml 放置于 95水浴锅中，并隔 10min 晃一次，4h 后取出，冷却到
9、室温。离心取上清液，在离心管中加无水乙醇，得到沉淀再次离心，取沉淀(多糖) ，用蒸馏水冲洗数遍，于 37 度烘箱中烘干所得沉淀为粗多糖。2培养基：MRS 肉汤培养基：蛋白胨 10g、肉浸膏 10 g、酵母膏 5g、葡萄糖 20 g、吐温 80 1ml、K2HPO42g、醋酸钠 5g、柠檬酸铵 2g、MgSO47H2O 0.2g、 MnSO44H2O 0.05g、蒸馏水 1000ml。pH 值 6.4。20肉汤：蛋白胨 1g、肉浸膏 1g、蒸馏水 1000ml。pH 值6.4。3菌株：取自丽珠肠乐胶囊（由双歧杆菌制成的干粉胶囊） ，珠海丽珠医药集团股份有限公司，批号 20030404。4实验仪器
10、Nbox Jar 7.0L，法国生物梅里埃公司S.C.303 型隔水式电热恒温培养与试剂6厌氧培养盒 GE 箱，嘉兴新睦电器厂除氧剂，法国生物梅里埃公司LD42 高速离心机，北京医用离心机厂754 型紫外可见分光光度计，上海第三分析仪器厂TG328B 电光分析天平THZ82 型恒温振荡器，江苏太仓医疗器械厂（二）实验方法与结果1菌液与溶液制备菌液制备：无菌条件下，从丽珠肠乐胶囊中取出内容物，溶解于10ml 浓度为 0.9的无菌生理盐水，搅拌均匀后用接种针蘸取少许溶液，涂布于无菌 MRS 固体培养基平板上，37 下，于厌氧培养盒培养 3d。再从平板中挑取色泽淡黄、圆滑突起的单菌落，接入40ml
11、MRS 液体培养基，37厌氧培养 2d。取少量培养液，测得菌液浓度为 2.7108 个/ml。使用前稀释至 1.0108 个/ml 备用。多糖溶液制备：利用蒽酮硫酸法测得醇沉淀中多糖含量：羊栖菜：25.2；海带：24.7；将 2 种粗多糖分别配制成一定浓度的溶液，并按实验需要稀释为 8.0、4.0 、2.0、1.0、0.5的水溶液，每管各 10ml，分别加入浓度为 20的肉汤培养基 10ml 混匀，同时制备作为对照的 10肉汤，115湿热灭菌 15min 后备用。附. 蒽酮硫酸法测定多糖含量原理：糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩7合产生有色物质，反应后溶液呈蓝绿色，于 620
12、nm 处有最大吸收，显色与多糖含量呈线性关系。标准曲线的制作：分别取 0.1g/L 的葡聚糖溶液0.05，0.10，0.20，0.30，0.40，0.60，0.80ml，用蒸馏水补到1.00ml；分别加入 4.00ml 蒽酮试剂，迅速浸入冰水浴中冷却，各管加完一起进入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸 10 分钟取出，用自来水冷却，室温放置 10 分钟左右，于 620nm 比色。以同样处理的重蒸馏水为空白，进行比色。以光密度(OD 值) 为纵坐标，糖的含量微克数为横坐标，得标准曲线。样品含量测定：取相当于糖浓度 50g/ml 左右的样品溶液1.00ml，加入蒽酮试剂
13、，同标准曲线制作之操作，比色测定。根据标准曲线和样品浓度计算含量。标准曲线的制作 表为标准曲线相应数据80 1 2 3 4 5 6 7 含糖量 ug905102030406080OD 值0.0000.031100.0580.1120.2040.2850.3940.526曲线 Y=A+BX 得： A= -4.8910-3 B=6.71X10-3 r=0.998依数据绘曲线 11Y=0.00671-0.00489X；r=0.998用分析天平取海带多糖 0.1213g，溶于 100ml 蒸馏水中，取1ml 进行吸光度测定。得吸光度：0.153，代入标准曲线得多糖29.9ug 海带提取物含多糖0.02
14、991000/121.3100%=24.7%用分析天平取羊栖菜多糖 0.2008g，溶于 100ml 蒸馏水中，取1ml 进行吸光度测定。得吸光度：0.254，代入标准曲线得多糖50.6ug羊栖菜提取物含多糖0.05061000/200.8100%=25.2 三促双歧杆菌生长实验（一）时间因素取 3 组浓度为 2.0、1.0 的多糖溶液管与作为对照的 10的肉汤液体管各 10ml,加入浓度为 107 个/ml 的双歧杆菌菌液各0.1ml，37厌氧培养。12h、24h、48h 后，分别取样用无菌生理盐水稀释，接种于 MRS 琼脂平板上，37厌氧培养 4d，计算出每ml 培养液中所含的活菌数。结果
15、见表 1。以双歧杆菌活菌数对数为纵坐标，时间为横坐标，绘得图 1。表 1 培养时间对双歧杆菌株的影响 log10n/ml12多糖浓度时间1.0%2.0%对照12h7.9868.2456.0231324h8.3018.5686.17648h8.1218.3026.094图 1 培养时间对双歧杆菌的影响注：图中纵坐标为菌液浓度对数值；横坐标为培养时间（二）浓度因素根据表 1 选择最佳的多糖溶液培养时间 24h。取两组海藻多糖14浓度为 4.0、2.0、1.0、0.5、的多糖肉汤溶液管以及作为对照的 10肉汤管各 9ml，分别加入浓度为 106 个/ml 的双歧杆菌菌液 1ml，37厌氧培养 24h
16、，取样用无菌生理盐水稀释后，接种于 MRS 琼脂平板上，37厌氧培养 4d，计算出每 ml 培养液中所含的活菌数。表 2 即为各浓度多糖培养液中双歧杆菌的活菌数。将实验结果换算成以 10 为底的对数值，进行统计比较，结果见表 3。以双歧杆菌活菌数对数为纵坐标，多糖浓度为横坐标，绘得图 2。表 2 不同浓度海藻多糖对双歧杆菌增殖作用的影响 单位：个/ml多糖来源多糖浓度羊栖菜15海带0.07.41077.41070.58.71072.01081.01.01083.0108162.02.01084.21084.01.51082.9108表 3 各项增殖菌数的对数值及其统计分析17多糖来源 多糖浓度羊栖菜海带试验组与空白组方差分析0.07.8697.8690.57
