绞股蓝细胞培养的初步研究

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1、Ab s t r a c tT h e c e l l c u l t u r e w a s s t u d i e d i n G y n o s t e m m a p e n t a p h y l l u m ( T h u n b .)Ma k i n o .T h i s p a p e r r e p o rt s t h e i n d u c t i o n a n d s c r e e n o f c a l l u s . A n d i t a l s o e x p l a i n st h e c a l l u s g r o w t h , s o m e

2、p h y s i o l o g i c a l a n d b i o c h e m i c a l c h a r a c t e r s a n d t h e s e c o n d a r yp r o d u c t i o n a c c u m u l a t i o n u n d e r t h e d i ff e r e n t c o n d i t i o n s .T h e r e s u l t s we r e as f o l l o ws :1 . B y e x p e r i m e n t s ,t h e o p t i m a l m e

3、d i u m w as c h o s e n f o r t h e c a l l u s i n d u c t i o na n d g r o w t h o f G y n o s t e m m a p e n t a p h y l l u m. I t i s B S w i t h t h e a d d i t i o n o f 2 .0 m g / L2 ,4 - D a n d 0 .5 m g / L K T .2 . T h e e ff e c t s o n t h e c a l l u s g r o w th b y t h e d i ff e r

4、 e n t f a c t o r s :( 1 ) I n t h e w h i t e l i g h t a n d t h e d a r k ,t h e c a l l u s g r o w t h w e r e f o r a b o u t 2 7d a y s , a n d t h e g r o w t h c i r c l e c u r v e w a s l i k e “ S “ . I t c o u l d b e d i v i d e d i n t o l a g p h a s e ,e x p o n e n t i a l g r o w

5、 t h p h a s e a n d s t a t i o n a ry p h as e . T h e c e l l g r e w m o r e r a p i d l y i n t h ew h i t e l i g h t t h a n i n t h e d a r k .( 2 ) I n t h e s o l i d c u l t u r e , t h e i n o c u l u m q u a n t i t y o f 3 g .F W / 5 0 m l m e d i u m w a sb e s t ; T h e o p t i m a l

6、 c o n c e n t r a t i o n o f S u r o s e w as 3 0 g / l a n d t h e o n e o f G l u c o s e w a s4 0 g / l ;-A s t h e s o u r c e s o f c a r b o n , t h e e ff e c t i v e n e s s o f G l u c o s e w as b e t t e r t h a n S u r o s eo n t h e c e l l g r o w t h ; T h e 0 . 0 5 % A g a r o s e

7、w a s b e s t t o t h e c e l l g r o w t h .3 . I n t h e w h i t e l i g h t a n d t h e d a r k , t h e c o n t e n t s o f s o l u b l e p r o t e i n , t h e a c t i v i t i e so f p e r o x i d a s e a n d s u p e r o x i d e d i s m u t a s e , a l l s h o w e d t w o p e a k s o n t h e d i

8、ff e r e n t d a y s ;t h e s o l u b l e p r o t e i n c o n t e n t w a s h i g h e r i n t h e w h i t e l i g h t .4 . T h e s e c o n d a r y p r o d u c t i o n o f t h e c a l l u s w a s a c c u mu l a t e d p r i m a r i ly i ns t a t i o n a ry p h as e . I n t h e w h i t e l i g h t a n

9、d t h e d a r k , t h e G .s a p o n i u m c o n t e n t s w e r ea l m o s t t h e s a m e l e v e l ; b u t t h e fl a v o l o i d s c o n t e n t w a s h i g h e r i n t h e f o r m e r c o n d i t i o n .硕士学位论文6 1 A S T l R S I I I L S I SI n t h e c a s e s o f t h e 3 g .F W/ 5 0 m 1 m e d i u

10、 m i n o c u l u m q u a n t it y ,t h e 3 0 g / L S u c r o s e o r t h e4 0 g / L G l u c o s e a n d t h e 0 . 1 % A g a r o s e , t h e s e c o n d a r y p r o d u c t s c o n t e n t s r e a c h e d t h eh i g h e s t l e v e l r e s p e c t i v e l y .K e y w o r d s : c a l l u s i n d u c t

11、i o n ; l i g h t ; p h y s i c a l a n d c h e m i c a l f a c o r s ;c e l l g r o w t h ; p h y s i o l o g i c a l a n d b i o c h e m i c a l c h a r a c t e r s ;fl a v o l a i d s c o n t e n t ; G . s a o i n i u m c o n t e n t .硕士学位论文八 认S I T R S 1 7 1 E S I S第一章前言绞股蓝 ( G y n o s t e m m a

12、 p e n t e p h l l u m ( T h u n b . ) M a k i n o )又名七叶胆,为葫芦科绞股蓝属多年生草质藤本植物, 茎蔓状柔弱横生, 具多分枝、 具棱、 节间疏生细毛或无毛, 茎长3 -5 米, 粗4 -6 毫米, 大多为掌状复叶膜质, 互生,柄长2 -5 ( 6 ) 厘米,被着糙毛或无毛,叶大多为卵状披针型,也缘具锯齿, 齿 头 具芒 t 0 。 绞 股蓝 广布于 我国 秦 岭 长 江以 南 地区2 1 。 绞 股 蓝不 仅 营 养丰 富,而且具有比人参更广泛的保健、医疗价值, 全草入药,生理活性广泛, 对机体调节免疫系统、 抗肿瘤、 降血脂、 镇 (

13、静) 痛、 防衰老和延年益寿等均有良 效,深受人们青睐, 被誉为“ 南方人参” 、 “ 长寿保健珍品” 3 近几年来,许多学者,尤其国内 学者对绞股蓝进行了以下广泛的研究。1 . 绞股蓝植物活性成份的研究1 . 1 绞股蓝植物的总皂贰及其含量绞股蓝皂试 ( G . s a p o n i n ) 是绞股蓝属植物的有效活性成分,其结构与人参皂贰结构相似。自1 9 7 6 年日 本学者竹本常松等人发现该植物含有类似人参皂贰以来,己经鉴定出8 4 种皂试, 总皂贰含量高达 1 3 . 6 % , 所有绞股蓝皂贰都有达玛烷型的基本结构,如图 1 :图1 . 绞股蓝皂贰的结构绞股蓝总皂贰中的 6种与人参

14、皂贰相同。构成绞股蓝皂贰的贰元共有 1 8种, 最主要的是原人参醇和原人参二醇,至今并未发现有原人参三醇,而人参三醇组皂试和人参二醇组皂试对中枢神经分别有兴奋和抑制作用, 所以绞股蓝不具有人参那样的双重功效。这就是绞股蓝与人参药理作用的最大不同之处 4 1 1 5 1不同种绞股蓝原植株所含的总皂贰含量不同; 同一种绞股蓝原植物因产地不同所含总皂试的含量有较大差异; 同一产地的同种绞股蓝原植物的不同生育期所含的总皂贰含量有所差异; 盛叶期的总皂试含量高于其他各期,而不同种的盛叶期的时间不同; 同一株绞股蓝原植物的不同器官所含的总皂贰含量存在差异,以叶的总皂贰含量为最高 6 1 7 11 . 2

15、绞股蓝的药理作用中药绞股蓝因含有人参皂试, 人们对它进行大量研究。药理与临床研究表明绞股蓝有抗肿瘤、 抗溃疡、 抗疲劳、降血脂、免疫调节作用18 1 。绞股蓝总皂贰 ( G P s )有广泛的药理作用,近几年的主要研究成果是 G P s在心、脑、血管方面的保护作用及其对血脂代谢的调节改善作用。1 . 2 . 1 心脑、血管方面的 作用绞股蓝能 对抗氧自 由 基 对心脏的损伤,保持心肌细胞膜的完整性9 1 ,改善急性心肌缺血时 心肌舒张功能 1 O 。 还能 对抗心肌缺血所致心肌不 可逆坏死, 使S O D 活性升高,心肌释放P IC K 减少O q绞股蓝水提物能松弛主动脉平滑肌,降低血压, 对

16、自由基损伤的主动脉舒 张 功能 有保护 作 用12 1 。 能 明 显 改 善 脑血 管A c h 舒 血管 反 应, 提高S O D 活 性 及N 0 一 含量, 抑制血管壁丙 二 醛生 成对 氧自 由 基所致的 脑血管 痉挛具 保护作用 t 13 1绞股蓝对脑缺血有较好的保护作用, 能显著提高脑细胞对急性缺氧的耐受性,这可能与其能升高S O D 活性,降低P L A 2 活性有关 1 4 1绞股蓝能降血脂,治疗动脉粥样硬化。 G P s 能抑制甘油三脂升高,能显著降低胆固醇、磷脂质、 过氧化脂质、并提高高密度脂蛋白, 从而使高脂血症得到改善O 5 1 l e l I l1 . 2 . 2抗诱变G P s 有较强的 抗诱 变且具 有明 显的 量 一效关系 p a 1 . 2 . 3 抗衰老绞股蓝既能促进生长发育,又能延缓衰老过程.主要与其提高S O D 活性,提高肌体免疫力有关 19 11 . 2 . 4 提高免疫G P s 具有广泛的增强肌体免疫力的能力,可抑制排斥反应,对抗环磷酞胺所致免疫力低下等等

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