北京化工大学仪器分析色谱概论

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1、 色谱分析法色谱分析法概述概述色谱有关术语色谱有关术语色谱法基本原理色谱法基本原理基本色谱分离方程式基本色谱分离方程式1历史 俄国植物学家茨维特在1906年使用的色谱原型装置分离对象 - 植物色素色谱柱 - 玻璃管固定相 - 碳酸钙流动相 - 石油醚色谱法起源色谱法起源21931年 胡萝卜素植物色素分离 1936年 离子交换色谱建立 1940年 吸附色谱与电泳相结合 1941年 分配色谱创立 1952年 气相色谱法建立 1967年 高效液相色谱法建立 80年代后 离子色谱、超临界流色谱、高效毛细管 电泳色谱法发展历史色谱法发展历史3Tiselius, A.W.K. Martin, A.J.P.

2、 Synge, R.L.M. 1948年 Nobel 化学奖 1952年 Nobel 化学奖吸附色谱与电泳 分配色谱色谱法发展历史色谱法发展历史4色谱法概述色谱法概述色谱法是一种物理化学 分离方法，利用不同物质在 两相（固定相和流动相）中 具有不同的分配系数（或吸 收系数，渗透性等），当两 相做相对运动时，这种物质 在两相中反复多次分配，从 而使各物质得到完全的分离 。5色谱法的分类 按流动相与固定相的分子聚集状态分类气相色谱法气相色谱法液相色谱法液相色谱法超临界流体色谱法超临界流体色谱法气固色谱法气固色谱法气液色谱法气液色谱法液固色谱法液固色谱法液液色谱法液液色谱法6 按操作形式分类柱色谱法

3、柱色谱法平面色谱法平面色谱法纸色谱法纸色谱法薄层色谱法薄层色谱法 按分离机制分类吸附色谱法吸附色谱法 分配色谱法分配色谱法 离子交换色谱离子交换色谱法法 空间排阻色谱空间排阻色谱法法7色谱法简单分类气相色谱法气相色谱法(GC)(GC)液相色谱法液相色谱法(LC)(LC)超临界流体色谱法超临界流体色谱法(SFC)(SFC)填充柱气相色谱法填充柱气相色谱法毛细管柱气相色谱法毛细管柱气相色谱法柱色谱法柱色谱法平面色谱法平面色谱法经典液相柱色谱法经典液相柱色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)(HPLC)薄层色谱法薄层色谱法(TLC)(TLC)纸色谱法纸色谱法(PC)(PC)8分类 一般分类分

4、离方法固定相所用平衡液相色谱LCL-L分离吸附在固定相表面的液体不同溶液之间分 配平衡 液相-固定相固定相表面键合的有机相在液体与固定相 表面的分布 液固或吸附固体吸附离子交换离子交换树脂离子交换尺寸排阻聚合物中间隙分布/筛分气相色谱GC（ 流动相为气体 ）气、液吸附在固定相表面的液体气配/气-液气-键相固体表面键合的有机物气配/气-液气-固定体固体吸附超临界流体色 谱SFC（流动 相超临界流体 ）固体表面键合的有机物超临界流体与键 合表面的分配色谱法分类9 气相色谱( Gas chromatography )填充柱气相色谱（Packed column gas chromatography)

5、毛细管气相色谱 (Capillary column gas chromatography)裂解气相色谱(Pyrolysis gas chromatography )顶空气相色谱 ( Headspace gas chromatography)气相质谱联用技术（Gas chromatography-Mass spectrometry) 液相色谱( Liquid chromatography )高效液相色谱( High performance liquid chromatography)超临界流体色谱( Supercritical fluid chromatography)高效毛细管电泳(High

6、performance capillary electrophoresis)毛细管电色谱(Capillary electrochromatography)液相质谱联用技术（Liquid chromatography- Mass spectrometry色谱法分类10 平面色谱法（Planar chromatography）薄层色谱 ( Thin layer chromatography)薄层电泳色谱 (Thin layer electrophoresis )纸色谱( Paper chromatography)色谱法分类11色谱法的特点与其它分析方法相比，具有的优点： 分离效能高 灵敏度高？ 分

7、析速度快 应用范围广 缺点：对未知物的定性比较困难 解决方法：与其它分析方法联用（质谱、红外和 电化学等）12高分离效能高灵敏度?在较短的时间内能同时分离和测定极为复杂的混在较短的时间内能同时分离和测定极为复杂的混 合物，如采用毛细管气相色谱柱分析合物，如采用毛细管气相色谱柱分析4040 150150 汽油，汽油，168 168 种组分可以在种组分可以在110 min110 min内一次进行分离内一次进行分离 测定。测定。可以分析微量或痕量组分，如在大气污染物分析可以分析微量或痕量组分，如在大气污染物分析 中，甚至可测出中，甚至可测出pptppt级的微量毒物。级的微量毒物。13分析速度快一般分

8、析一次样品的时间为几分至几十分钟，一般分析一次样品的时间为几分至几十分钟， 某些快速分析，某些快速分析，1 1秒可以分析秒可以分析7 7个组分。个组分。应用对象：气体和液体、有机物和无机物、小分子和大分子等应用领域：医药、化工、环保、食品、农药、体育等应用范围广14色谱流出曲线 根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含组分的最少个数； 根据色谱峰的保留值，可以进行定性分析； 根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析； 根据色谱峰的保留值及其区域宽度，可以评价色谱柱分离效能； 根据色谱峰两峰间的距离，可以评价固定相（或流动相）选择是 否合适。15保留时间tR 进样到出现色谱峰顶点的时间保留体积VR

9、进样到出现色谱峰最大时消耗的流动相体积死时间t0 流动相流过色谱柱的时间死体积V0 色谱柱的空隙体积校正保留时间校正保留体积保留值16基线：无组分通过色谱柱时，检测器的噪音随时间变化的曲线。 峰宽Wb：色谱峰两侧拐点上的切线在基线上的截距半峰宽W1/2：峰高一半处对应的峰宽标准偏差：正常色谱峰的两个拐点间距离的一半17相对保留值，选择性因子( )色谱法基本概念色谱法基本概念- 固定相对两种组分的选择性18色谱法基本理论不能分离不能完全分离能完全分离峰之间的距离-分配系数（热力学）峰的宽窄-柱效率（动力学）19分配系数 K（热力学性质 ）一定温度下，组分在固定相和流动相之间 分配达平衡时的浓度比

10、。K只与固定相和被分离物质的性质有关K值的差别是分离的先决条件， 差别越大，分离的可能性越大 K值大的组分后出峰20分配比（容量因子）： 一定温度与压力下两相 达平衡后，组分在固定相和流动相量的比值固定相重量流动相重量K与k的关系：容量因子k与保留值的关系:21塔板理论 - 柱效能指标塔板理论是色谱学中的热力学平 衡理论。它是把样品组分在色谱 柱中的分离过程，视为组分在分 馏塔里的分馏过程，把色谱柱看 成一个分馏塔。分馏塔利用各组分的沸点不同， 在塔板上经过多次气-液平衡后 ，最终低沸点组分在塔顶流液的 含量高，高沸点组分在塔低层含 量高，而达到分离目的。石油裂解产物22塔板理论的基本假设(1

11、) 色谱中也存在类似分馏装置的塔板。样品中的某组分 在色谱柱“H”的高度区间内可以很快达到分配平衡。H 称为理论塔板高度，且组分在H高度内服从分配定律。(2) 样品各组分开始时存在于第0号塔板上，且试样沿色 谱柱轴(纵)向的扩散可以忽略不计。(3) 流动相进入色谱柱（洗脱过程）不是连续的，而是 间歇进入，每次进入为一个塔板体积。(4) 分配系数在所有塔板上都相同，与组分在塔板上的 量无关。23塔板理论 - 柱效能指标色谱柱长：L 虚拟的塔板间距离：H色谱柱的理论塔板数：n则三者的关系为：24塔板理论 - 柱效能指标理论塔板数与色谱参数之间的关系 (重点) tR: 保留时间; W1/2：半峰宽；

12、Wb:峰底宽；H：理论塔板高度；L：色谱柱长度；n: 理论塔板数；n有效：有效理论塔板数； H有效：有效塔板高度 25塔板数 n是色谱柱的特征参数。当色谱柱长度一定时，塔板数 n 越大(塔板高度 H 越小)，柱效能则越高，所得色谱峰越窄。不同物质在同一色谱柱上的分配系数不同，用有效塔板数和有效 塔板高度作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质。柱效不能表示被分离组分的实际分离效果，当两组分的分配系数K 相同时，无论该色谱柱的塔板数多大，都无法分离。塔板理论无法解释同一色谱柱在不同的载气流速下柱效不同的实 验结果，也无法指出影响柱效的因素及提高柱效的途径（实际用 用受到限制）。塔板理论 - 几点说

13、明26塔板理论的不足塔板理论虽然指出了理论板数n或理论板高 度H对色谱柱效率的影响，但是没有指出影 响塔板高度的因素，因此无法在理论指导 下从实验上提高色谱柱的效率。27速率理论 - 影响柱效能的因素速率方程（也称范.弟姆特方程式）:H = A + B/u + Cu H：理论塔板高度，u：载气的线速度(cm/s)A：涡流扩散系数； B：分子扩散系数； C：传质阻力系数28A = 2dp指 dp：固定相的平均颗粒直径：固定相的填充不均匀因子细而均匀的颗粒，填充的越均匀，A，H，柱效nA 涡流扩散项由于组分分子在色谱柱填充不均匀的固定相中移动 途径不同所造成的色谱峰展宽。29B = 2 Dg ：弯

14、曲因子，指填充柱内流动相扩散路径弯曲的因 素。 Dg：试样组分分子在流动相的扩散系数（cm2s-1 ）流速，滞留时间，扩散B/u 分子扩散项（纵向扩散项 ）由于组分在液相中的扩散系数只有气体中的1/105，因此在液 相色谱中B可以忽略。由于组分在色谱柱中沿着柱长方向的扩散所致的浓度差而引 起的色谱峰展宽。30传质阻力包括气相传质阻力Cg和 液相传质阻力CL C =（Cg + CL）扩散系数D ，C ,分配平衡时间长，峰变宽C u 传质阻力项指组分在色谱柱流动相和固定相之间的传递过程（溶解或 吸附等）存在不同的阻力而形成的色谱峰展宽。31固定相传质阻力流动相传质阻力q 和 为与两相的构型和性质有

15、关的常数dp 和 df 为固定相颗粒直径和固定液膜的厚度Ds 为试样分子在固定液的扩散系数Dm为试样分子在流动相中的扩散系数。32影响谱带展宽柱外效应进样器死体积大、进样量大，进样速度慢；柱前后连接管道死体积大；检测器死体积大。33分离度塔板理论和速率理论都难以描述难分离物质对的实际分 离程度。即柱效为多大时，相邻两组份能够被完全分离。难分离物质对的分离度大小受色谱过程中两种因素的综合 影响：保留值之差色谱过程的热力学因素；区域宽度色谱过程的动力学因素。色谱分离中的四种情况如图所示： 柱效较高，K(分配系数) 较大,完全分离； K不是很大，柱效较高， 峰较窄，基本上完全分离； 柱效较低，K较大,但分离 的不好； K小，柱