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1、N o 2 0 0 3 3 017学校代码1 1 9 1 9l 巾图分类号|河弦莲科六虿硕士研究生毕业论文P 3 8 M A P K 在缺血性脑损伤中的作用及其抑制剂s B 2 3 9 0 6 3 的神经保护功能研究生导师专业二级学院研究起止日期提交日期冯雪丹李风玲教授神经病学第二临床医学院2 0 0 4 年9 月一2 0 0 6 年3 月2 0 0 6 年3 月中文摘要P 3 8 M P K 在缺血性脑损伤中的作用及其抑制剂S B 2 3 9 0 6 3 的神经保护功能摘要目的：缺血性脑卒中作为最常见的卒中类型，通常急性起病，以其极高的致死率和致残率危害人们的生命和健康。迄今为止，缺血性脑卒
2、中的病理生理机制尚无定论，长期以来是神经科学领域探求的焦点。丝裂原活化蛋白激酶( M A P K ) 是许多信号转导通路的整合点。许多酪氨酸激酶都可以通过刺激信号级联反应激活丝裂原活化蛋白激酶通路。目前已发现至少四种类型的M A P K 途径在不同的生物反应中发挥作用。其中，p 3 8 M A P K主要参与应激条件下细胞的炎症反应、细胞因子分泌和细胞凋亡过程。在中枢神经系统，p 3 8 M A P K 的激活与各种病理状态下细胞的死亡和凋亡密切相关。在信号通路水平调控p 3 8 M A P K 的表达和活性可望成为治疗缺血性脑卒中的新途径。乳酸脱氢酶( L D H ) 是反应细胞活性和功能的
3、敏感指标，因此测定L I ) H 漏出量可判断脑组织受损程度。C - 反应蛋白( c R P ) 不仅是一种炎性标志物，而且介入了缺血性脑卒中的发生发展过程。在这个实验中，我们在建立脑缺血模型的基础上，通过观测梗死后大鼠神经功能缺损状况、脑梗死体积、脑组织L D H 漏出量、血清C R P 水平和缺血脑区磷酸化p 3 8 M A P K的表达，来探讨脑缺血急性期p 3 8 M A P K 与脑组织损伤程度中文摘要及炎症反应的关系。本试验的目的是研究激活的p 3 8 M A P K 在缺血性脑卒中的作用机制，并且评价新研发的第二代p 3 8 M A _ P K 抑制剂s B 2 3 9 0 6
4、3 是否对早期缺血性脑损伤具有神经保护作用。本试验的另个目的是建立一种新的脑缺血模型。此模型通过损伤血管内皮细胞，触发血小板粘附聚集，形成大脑中动脉血栓，导致大面积脑梗死和神经功能缺损。方法：s D 雄性大鼠( 体重2 5 0 3 5 0 2 ) 7 2 只，随机分成缺血模型组、S B 2 3 9 0 6 3 组和假手术组。缺血模型组：一次性向大鼠颈内动脉注入月桂酸钠溶液0 8 m l ( 2 0 0 u m 1 ) 建立缺血模型；S B 2 3 9 0 6 3 组：造模方法如上所述，S B 2 3 9 0 6 3口服制剂( 1 5 m g l ( g ) 分别于术前3 0 m i n 、术后
5、3 h 灌胃；假手术组：手术方法同模型组，不同之处是向颈内动脉注入蒸馏水0 8 m l 。每组大鼠又按不同观测指标随机分成3 个亚组( n = 8 ) 。术后6 小时采用三种方法进行神经功能评分，然后每组中抽取1 亚组，4 多聚甲醛0 1 M 磷酸缓冲液( P h 7 2 7 4 ) 灌流固定后将脑组织冠状切成5 个间距2 m m 的脑片，其中第3 脑片为主要梗死区，2 4 小时后石蜡包埋并切成矩m 的组织切片。这些切片部分进行H E 染色用以组织病理学分析，部分常规免疫组化染色观察磷酸化p 3 8 的表达；第2 亚组经左心室灌注肝素生理盐水后处死，脑组织制成匀浆用于L D H 含量的检测：第
6、3 亚组处死后快速收集血及脑组织标本，血清用于C R P 水平的测定，脑组织切片后T T c 染色测定梗死体积。结果：1 、本实验通过颈内动脉注射月桂酸钠建立卜种新的适用于缺血性脑卒中病理机制研究的模型。在造模的中文摘要5 5 只大鼠中4 8 只呈现出轻至重度神经功能缺损，造模成功率占8 7 2 。2 、神经功能评分结果显示：S B 2 3 9 6 0 3 组大鼠行为功能缺陷( 5 3 8 1 4 1 ) 较缺血模型组( 7 1 3 1 3 6 ) 明显改善，表现为肌力增加，差异有显著意义( P 0 0 5 ) 。5 、假手术组T T c 染色后未发现梗死区。与缺血模型组( 0 4 9 0 0
7、 2 ) 梗死体积比较，S B 2 3 9 0 6 3 组( 0 2 7 0 0 2 ) 梗死体积明显减小( P 0 0 5 ) 。j ( 3 ) 缺血模型组( 1 5 6 3 2 9 0 ) 、S B 2 3 9 6 0 3 组( 1 5 2 5 3 5 4 )与假手术组( 1 3 7 5 3 0 1 ) 三组梗死对侧脑区P p 3 8 M A P K 阳二性细胞数目无显著性差异( 均P O 0 5 ) 。n ，( 4 ) 缺血模型组梗死侧( 4 5 7 5 1 0 6 1 ) P p 3 8 M A P K 阳性细胞数与该组梗死对侧( 1 5 6 3 2 9 0 ) P p 3 8 M A
8、 P K 阳性细胞数比较有显著差异( P O 0 5 ) ；假手术组梗死侧( 1 2 3 8 3 5 0 ) P p 3 8 M A P K阳性细胞数与该组梗死对侧( 1 3 7 5 3 0 1 ) P p 3 8 M A P K 阳性细胞数比较无显著差异( 尸 0 0 5 ) 。5 梗死灶大体形态学观察及梗死体积测定( 见图8 、表4 ) 结果显示：( 1 ) 假手术组被染成均匀一致的红色，1 9研究论文S B 2 3 9 6 0 3 组和缺血模型组可见梗死区脑组织呈苍白色，非梗死部分呈红色；( 2 ) 与缺血模型组( O 4 0 8 O 0 1 8 ) 梗死体积比比较，S B 2 3 9
9、6 0 3 组( O 2 7 5 O 0 4 2 ) 大鼠脑梗死体积比缩小3 2 6 ，有显著性差异( P O 0 5 ) 。6 脑组织匀浆L D H 漏出量( 见表5 )结果显示：( 1 ) 与假手术组( 4 5 5 1 4 2 ) L D H 漏出量比较，S B 2 3 9 6 0 3 组( 6 3 5 0 9 6 ) 和缺血模型组( 8 3 8 1 3 0 ) L D H 漏出量明显增加( 均尸 0 0 5 ) ；( 2 ) 与缺血模型组( 8 3 8 1 3 0 _ )L D H 漏出量比较，S B 2 3 9 6 0 3 组( 6 3 5 O 9 6 ) L D H 漏出量明显减少，
10、有显著差异( 尸 O 0 5 )7 血清C R P 含量( 见表5 )结果显示：( 1 ) S B 2 3 9 6 0 3 组( O 1 5 O 0 3 ) 和缺血模型组( O 2 7 O 0 5 ) 血清C R P 水平均明显高于假手术组( O 1 1 O 0 2 ) 血清C R P 水平，差异有统计学意义俨 O 0 5 ) 。( 2 ) 与缺血模型组( O 2 7 O 0 5 ) 血清C R P 水平比较，S B 2 3 9 6 0 3 组( 0 1 5O 0 3 ) 血清C R P 水平明显降低，差异有统计学意义( P 0 0 5 ) 。2 0研究论文附图R o o 0 0 1 ：T h
11、 ed o s eo fS o d i u mL a u r e a t e( u 曲姝o o 0 0 2 ：N e u r o l o g i c a ls c o r eF i g 1T h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt l l ed o s eo fS o d i u m：L a u r e a t ea n dN e u r o l o g i c a lS c o r et”O ”NO 畦SB2 139O63l ：l 啕I 蛾i - 4 - I l y dr I 】x y l 瞪l 增x ，I | - i ：l -f | ，f I u
12、蚰蓍、 p I - e 1 I y I J 毒- f _ 2 一n e t h 寸I x y p ，l 。l n i d J I I q l “纳i 曩| 嗣羽一t F i g ? 2T h ec h e m j c a lc o n s t i t u t i o no fS B 2 3 9 0 6 32Ir i N，N3 jU10 0 9 0 8 0 7 0 6 0 5 0 4 0 3 0 2 0 lO O 研究论文0滋：j ：誊尊j 囊纛瓣：誊拳：+1 4： 霆奔? ：i 疆江：? ：j f! 鏊：誊萋+：一，：鬻鬻瓣攀鬟= 鬻鬻誉篓j妻：爹莲囊舞搭誊0 囊、鼍蕤；粪l 囊鬻鬃： ：i
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15、)一2 3研究论文F i g 7T h ei n n a m m 孕t o r yr e s p o n s ei ni n f a r c ta I e as h a m o p e r a t e dS B 2 3 9 0 6 3i s c h e m i a( H ES P1 0 0 )F i g 8B r a i nt i s s u es t a i n e db yT T C2 4研究论文胞外刺激生长因子J 妇激、生长了、分化因了、细胞蚓了等不明?M K K K R a s蛋白R a f SM E K KMM E KM E KM A P KR a pR h oR a cC d c 4 2S T E 2 0 l i k e sT p l 一2M E K K I ；M L K s ；M E K K | 4 5 ；删( 1 ；M E Q 3 ；A - S K - 11 A OK 1 2M l K 一7 SM K K 4 1 2S A P K J N K s底物R s k ，S O S ，E l k 1 ，E t a 一1c M y c ，S a p l s ，S 1 A T S
