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1、 1 目 录 主要英汉缩略对照表 . 1 中 文 摘 要. 3 英 文 摘 要. 5 引 言 . 7 正 文 . 9 第一部分 针对 HP450 基因的 shRNA 真核表达载体的构建 . 9 1 HP450 基因特性 . 9 2 HP450 基因与肝脏疾病的关系及其作用机制 . 11 3 载体设计及合成 .12 4 讨论 .14 第二部分 质粒（HP450 RNAi 表达载体）BRL 细胞的转染 .18 1 实验材料 .19 1.1 主要仪器设备 .19 1.2 细胞培养实验材料 .20 1.3 质粒转染实验材料 .20 1.4 RT-PCR 引物设计实验材料 .20 1.5 琼脂糖凝胶电泳
2、实验材料 .21 1.6 试剂的配臵 .21 2 实验方法 .21 2.1 细胞培养.21 2.2 质粒转染.22 2.2.1 脂质体/质粒 DNA 混合物的准备 .22 2.2.2 转染细胞 .22 2.3 细胞 RNA 提取 .23 2.4 逆转录 .24 2 2.5 聚合酶链反应 .25 2.6 琼脂糖凝胶电泳分析 .25 2.7 HP450 mRNA 基因表达半定量 RT-PCR 检测 .26 2.8 HP450 mRNA 基因表达抑制率计算公式 .26 3 实验结果 .26 3.1 RNA 纯度检测 .26 3.2 BRL 细胞中绿色荧光蛋白（GFP）的表达 .27 3.3 质粒转染
3、对 HP450 基因表达的影响 .27 3.3.1 RT-PCR 产物的凝胶电泳结果 .27 3.3.2 RT-PCR 产物的光密度分析结果 .27 4 讨论 .29 第三部分 靶向干扰 HP450 基因对 BRL 细胞生物学特性的影响 .33 1 实验材料 .33 1.1 主要仪器设备 .33 1.2 主要试剂 .33 2 实验方法 .33 2.1 细胞培养 .33 2.2 质粒转染 .34 2.3 MTT 检测细胞生长的增殖变化 .34 2.4 流式细胞仪检测细胞周期 .34 2.5 统计学处理 .34 3 实验结果 .34 3.1 MTT 试验 .34 3.2 HP450 基因干扰后对 BRL 细胞周期时相分布的影响.35 4 讨论 .39 问题与展望 .
