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1、4 o 中闺防瘩挛志 2 0 1 1 年 1 月 第 3 3 卷 第 1 期 E g 陈献雄 ， 杨倩婷 ， 徐六妹 ， 朱秀云 ， 廖 明风 ， 陈心眷采用 于扰素 释放反应试验和 P P D皮试对 深圳 市高校 学生结 核分枝 杆菌潜 伏感染筛查的研究 J 临床肺科杂志 ， 2 0 0 9 ， 1 4 ( 6 ) ： 7 3 7 7 3 8 1 0 Ho u g a r d y J M，S c h e p e r s K， P l a c e S ，D r o wa r t A，L e c h e v i n V， Ve r s e he u r e V，De b r i e AS，Do
2、he r t y TM ，Va n Vo o r e n j p， L o c h t C， M a s c a r t F He p a r i n bi n d i n g he ma g gl u t i n i n i n d u c e d I FN ga mma r e l e a s e a s a d i a g n o s t i c t o o l f o r l a t e n t t u b e r c u l o s i s J P L o S On e ， 2 0 0 7 ， 3 ； 2 ( 1 O ) ： e 9 2 6 1 1 L a l v a n i A，P
3、 a t h a n AA，Du r k a n I ，Wi l k i n s o n KA，Wh e l a n A ，De e k s J J，Re e c e W H ，La l i f M ，Pa s v ol G ，Hi l 1 AV En h a n c e d c o n t a c t t r a c i n g a n d s p a t i a l t r a c k i n g o f My c o b a c t e r i um - b e r c u l o s i s i n f e c t i o n b y e nu me r a t i o n o f a
4、 n t i g e n s p e c i f i c T c e l l s E J L a n c e t ， 2 0 0 1 ， 3 5 7 ( 9 2 7 3 ) ： 2 0 1 7 2 0 2 1 1 2 Ta n LH， Ka ma r u l z a ma n P r e v e n t i n g t u b e r c u l o s i s i n h e a l t h c a r e ( 收稿 日期 ： 2 0 1 0 0 9 3 0 ) ( 本文编辑 ： 范永德) 短 篇 论 著 基于分枝菌酸分析法鉴定分枝杆菌临床株 王 巨存 赵凤 仪 李 国利。 王海 英。 景
5、辉。 王 学谦 白人骁 陆芸 赵 文君 ( 1 天津市天津医院 天津3 0 0 2 1 1 ； 2 解放军 总医院第二附属医 院结核病研究所北京 1 0 0 0 9 1 ； 3 山东省胸科医院汉光国际感染性疾病研究 中心 济 南2 5 0 0 1 3 ) 非 结核分 枝 杆 菌 ( NT M ) 病 具有 与结 核 病 临 床 表现相 似 的全 身 中毒 症 状 和局 部 损 害 ， 在无 菌种 鉴 定 的情 况下 ， 与结核病 难 以 区别 。NTM 与 T B对 抗 结 核药 物的敏 感 性 大不 相 同 ， 不 同 的 NT M 对 药 物 的敏感性 也不 相 同 ， 根 据 不 同 菌
6、种 化 疗方 案 应 有 所 不 同 。因此 ， 分 枝 杆 菌 菌种 鉴 定 不仅 在 流 行病 学 上 ， 而且在 临床 诊 断 和治 疗 上 均有 重 要 意义 。本 实 验室 建立 了具有 自己技 术特 点 的分 枝菌 酸 ( My c o l i c a c i d s ， MA) 分 析方 法 ， 构 建 了 5 0种 分 枝杆 菌标 准菌 株 的 MA 指纹 谱 库 ， 特别 是解 决 了文 献 未 能 区分 的 8种分 枝杆 菌 的种问鉴 定 问题 。用该 方法 鉴 定 分枝 杆菌 临床分 离 株 国 内 尚未 见 报道 ， 为此 我 们 做 了初 步研究 。 l 材 料 和
7、方 法 1 1 材 料 标 准 菌 株 ： 分 枝 杆 菌 标 准 株 来 源 于 ATC C且 由中 国药 品 生 物 制 品 检 定 所 分 枝 杆 菌 专 业实 验室提 供 。临床 分离株 ： 2 6 株 由 山东省 胸 科 医 基 金 项 目 ： 天津 市 应 用 基 础 研 究 计 划 面 上 项 目( O 7 J C YB J C o 8 7 o o ) 通讯作者 ： 王巨存 E ma i l ： wa n u c u n 2 o 0 O y a h o o C o rn c n 院汉光 国际感 染性疾 病研 究 中心 提供 ； 1 8株 由北 京 市 结核病 胸部 肿瘤研 究所
8、提供 ； 2 5株 由解 放军 总 医 院第二附属 医院分枝杆菌专业实验室提供； 2 3株由 天津市疾病预防控制 中心结核病控制中心提供 。仪 器 与试剂 同文 献心 。 1 2 实验 方法， 1 2 1 菌株的培养、 分枝菌酸样品的制备和色谱条 件 同文献 。 1 2 2 鉴定步骤与依据 第一步根据分离株谱峰 的族 数进 行 分类 ， 确定 单 、 双 、 三 族 峰型 。第 二步 根 据 分离株 图谱 的相 对保 留时 间和相对 峰 高特 征 与相 应的标准图谱 比对 ， 最相似的标 准图谱所代表标准 菌 株 即为 初步 鉴定 结 果 ； 第 三步 同时 测定 相 应 标 准 菌株 样 品
9、 ， 如二 者 图 形基 本 一 致 ， 得 最终 鉴 定 结果 。 在所涉及的 l 9种分枝杆菌中， 脓肿分枝杆菌指纹图 谱在 6 1 6 mi n之 间 、 偶 然分 枝杆 菌指纹 图谱 在 5 1 6 mi n之 间、 耻 垢 分 枝 杆 菌 指 纹 图谱 在 4 5 1 2 mi n 的图谱 是稳 定 的 ， 供 比对 用 。 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 m lH ， 一 一 一 一 一 n 计 m w m S _星 北 一 一 一 一 一 一 中 l习防瘩枭恚 2 0 1 1 年 1 月 第 3 3 卷 第 1 期 4 1 I 牛分枝杆菌 蟾蜍分 枝杆菌
10、戈登分枝杆菌 堪 萨斯分枝杆菌 偶然 分枝 杆菌 鸟分枝杆菌 胞 内分枝杆 菌 瘰疬分枝杆 菌 爱知分枝杆菌 一 不产色分枝杆 菌 耻垢分枝 杆菌 副偶然分枝杆菌 海分枝杆菌 金色分枝杆 菌 浅黄分枝 杆菌 新金 色分枝杆菌 图 1 分枝杆 菌分枝 菌酸指纹 图谱 ( a 为标准株 图谱 b为临床分离株 图谱 I s为 内标 ) j =一= 一 中 l习坊痔枭志 2 0 1 1 年 1 月 第 3 3 卷 第 1 期 2 结 果 山东 省 胸 科 医 院 提 供 的 临 床 分 离 株 ， 经 1 6 S r R NA基 因测序鉴 定为胞 内( 1 6株) 、 脓 肿 ( 3株 ) 、 戈 登
11、 ( 2株 ) 、 瘰疬 ( 1株) 、 偶 然 ( 1 株 ) 、 堪 萨斯 ( 1 株 ) 、 土 地 ( 1 株 ) 。经传 统方法 鉴定 为结核 分枝杆 菌 ( 1株) ， 共 2 6 株 临床 分离株 。采 用分枝 菌酸 分析法 鉴定 ， 有 2 5 株 的鉴定 结 果 与 其 一 致 。另 外 1株 结 核 分 枝 杆 菌 ， 本法 鉴定 为胞 内分枝杆 菌 。 北京 市结核 病胸 部肿瘤 研究所 提供 的 临床分 离 株 ， 经 l 6 S r RNA基 因测 序鉴定 为海 、 脓肿 、 耻垢 、 偶 然 、 结 核 、 胞 内、 浅 黄 、 蟾 蜍 、 金 色 、 不 产 色
12、、 副偶 然 、 爱 知 、 土地 、 戈 登 、 新 金 色 、 牛 、 鸟 、 堪 萨斯 分枝 杆 菌 ， 各 1株 ， 共 1 8株 。采用 分枝 菌酸 分析 法 鉴定 的结 果全 部与其 一致 。 解 放 军 总 医 院第 二 附属 医 院提 供 的临 床 分 离 株 ， 经 传统 方 法 鉴定 和 1 6 S 一 2 3 S r R NA 基 因转 录 间 隔 区测 序 鉴 定 为 胞 内 ( 4株 ) 、 瘰 疬 ( 8株 ) 、 脓 肿 ( 1 株 ) 、 戈登 ( 4株 ) 、 堪萨斯 ( 6 株 ) 、 蟾 蜍 ( 1株 ) 、 结 核 分 枝 杆 菌 ( 1株 ) ， 共
13、2 5株 。采用 分 枝 菌 酸 分 析 法 鉴 定 ， 有 2 4株 的鉴 定结果 与其 一致 。另外 1 株 胞 内分 枝杆菌， 本法鉴定为偶然分枝杆菌。 天津 市 结核 病 控 制 中心 提供 的临床 分 离株 ， 经 传统方法鉴定为结核 ( 2 2株) 、 牛分枝杆菌 ( 1株) 共 2 3株 。采用分 枝 菌 酸 分 析 法 鉴定 ， 有 2 2株 的鉴 定 结果 与其一致 。另 外 1株结 核 分 枝 杆菌 ， 本法 鉴 定 为牛分 枝杆 菌 。 采用 本方 法 ， 共 鉴定 了 1 9 种 9 2株临床 分离 株 ， 择其几个典型 比对图谱 ， 见 图 1 。 3 讨论 分枝 杆
14、菌传 统鉴定 方法 依据 菌落 的表型 特征 和 生化 反应进 行种 间鉴 定 ， 是金 标 准 。但 方 法 复杂 费 时 ， 影响 因素多 ， 国 内仅 少数 实验 室能鉴 定到 种 。基 因测 序方法 也存 在一定 的局 限性 5 。分枝 菌 酸是 一类高相对分子质量含有 a 一 支链、 j 3 一 羟基 的脂肪酸 ， 由C 。 C 。 。 组成 ， 是 分枝 杆 菌细 胞壁 中的化 学成 分 ， 约 占细 胞壁 干重 的 6 o 。应 用 HP L C方 法 分 析 比 较分枝 杆菌 的 MA 指纹 图谱 ， 可 实 现分 枝 杆 菌 的种 间鉴定 。 由图 1 可见 ， 1 9种 分
15、枝杆 菌 分离 株 与标 准 株 的 指纹 图谱 是 基本一 致 的 ， 9 2个 临床 分 离株 都 鉴定 到 种 ， 其 中包 括鸟 和 胞 内分 枝 杆 菌 。J o s e p h等 采 用 HP L C方法 分析 了 3 1 0 7个 临 床 分 离 株 ， 经 与 标 准 株图 谱 比 对 ， 9 9 5 的 临 床 分 离 株 得 到 鉴 定 ， 但 MAC不能区分。而 B u t l e r 等人的方法还不能将 临床 分离 株 完 全 鉴定 到种 ， 其 中包 扩 MT C、 MAC、 土地等较多 复合群。这可能与色谱方法有关 。目 前 ， 国 内关 于 HP I C方 法鉴定 临 床分 离 株还 缺 乏 系 统 的研 究 。 本 实验 中有 8 9 株 的鉴定 结果 与参 比方法 一致 ， 一致率 为 9 6 7 。初 步 表 明所 建 立 的方 法 可 对 上 述分枝杆菌进行快速和可靠 的种间鉴定 ， 但 3株不 一致 的原 因还需进 一步 深入 研究 。 4参考文献 1 何 园钧 ， 肖和 非结核分枝杆菌病的治疗研究进展E J 抗感染 药 学 ， 2 0 0 5 ， 2 ( 2 ) ： 6 0 6 3 2 赵风仪 ，
