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1、检测出几乎全部的Bcl - 1基因重排,而PCR检出率 约为FISH的检出率的50 % ,本文CLL的Bcl - 1基 因重排率31 %与Lishner M报告相近,高于NewmanRA和Cuneo A的结果。 本研究发现伴有Bcl - 1基因重排的4例B -CLL的外周血白细胞较没有Bcl - 1基因重排的B -CLL的高,并且这4例B - CLL的外周血的原始淋巴 细胞及幼稚淋巴细胞的比例升高,这与Newman RA 报告一致。Newman RA分析84例CLL ,有5例细胞 周期D 1高表达,并与非典型CLL(atipical CLL ,指按FAB分类法,在外周血中大淋巴细胞与幼稚淋巴细
2、 胞之和占所有淋巴细胞的10 %55 %)相关7;细 胞周期D 1是细胞周期G 1家族的重要成员,调节 细胞由G 1期通过限制点进入S期。细胞周期D 1 的过度表达导致一些有基因损伤的细胞未停留在G1期进行DNA修复或凋亡,而直接进入S期,使这种 细胞不停地处于增殖周期中,在肿瘤的发生过程中 起重要作用。4 参考文献1 Motokura T,Bloom T,K im HGet al.A novel cyclin encoded bya Bcl - 1 linked candidate oncogene. Nature ,1991 ,350:5125152 Chibbar R ,Leung K,
3、McCormick Set al.Bcl - 1 gene rear2rangements in mantle cell lymphoma :a comprehensive analysisof 118 cases ,including B - 5 - fixed tissue ,by polymerase chainreaction and Southern transfer analysis. Mod Pathol ,1998 ,11:10891 0973 Vaandrager JW,Schuuring E,Zwikstra Eet al.Direct visualiza2tion of
4、dispersed 11 q 13 chromosomal translocations in mantlecell lymphoma by multicolor DNA fiber fluorescence in situ hy2bridization.Blood ,1996 ,88:1 1771 1824 Ott MM,Helbing A ,Ott Get al.Bcl - 1 rearrangement and cy2clin D 1 protein expression in mantle cell lymphoma.J Pathol ,1996 ,179:2382425 De Boe
5、r CJ ,Van Krieken JH,K luin - Nelemans HCet al.Cy2clin D 1messenger RNA overexpression as a marker for mantlecell lymphoma.Oncogene ,1995 ,10:1 8331 9406 Bartkova J ,LukasJ ,Strauss Met al.Cell - related variation andtissuerestricted expression of human cyclin D 1 protein.J Pathol ,1994 ,172:2372457
6、 Newman RA ,Peterson B ,Davey FRet al.Phenotypic markersand Bcl - 1gene rearrangements in B - cell chronic lymphocyticleukemia :a Cancer and Leukemia Group B study.Blood ,1993 ,82:1 2391 2468 Cuneo A ,Bigoni R ,Negrini Met al.Cytogenetic and interphasecytogenetic characterization ofatypicalchronic l
7、ymphocyticleukemia carrying Bcl - 1 translocation. Cancer Res ,1997 ,57:11441 150(2001 - 10 - 10收稿,责任编辑 李小萍)散发性结直肠癌微卫星不稳定性 与Mt - P53及Bcl - 2蛋白表达武警四川总队医院外一科 林武华 张永忠 (乐山614000)摘 要 目的 探讨散发性结直肠癌微卫星不稳定性与Mt - P53及Bcl - 2蛋白表达的关系。方法 应用放射性同位素为基础的聚合酶链式反应(PCR)技术检测了48例散发性结直肠癌中四个位点的微卫星不稳定性,同时应用免疫组织化学技术对癌基因Bcl -
8、2、 抑癌基因Mt - P53蛋白的表达。结果 (1)48例散发性结直肠癌中四个微卫星位点D 2 S 123、BAT- 26、D17 S 261、D 17 S 799的微卫星不稳定性检出率分别为1215 %、1818 %、1014 %、813 %;(2)Mt - P53蛋白和Bcl - 2蛋白阳性率分别为6617 %和7711 %;(3)微卫星不稳定性与Mt - P53和Mt - P53蛋白的表达均相差不显著(P 0105)。结论 微卫星不稳定性引起散发性结直肠癌的RER途径是不同于由抑癌基因P53失活及癌基因Bcl - 2激活引起的LOH途径的新致癌机制。关键词 散发性结直肠癌 微卫星不稳定
9、性 Mt - P53 Bcl - 2A study on microsatellite instability and expression of the Mt - P53and Bcl - 2 in the sporadic colorectal cancerLin Wuhua and Zhang Yongzhong. First Surgery Depertment of Sichuan Provincial Corps Hospital of Chinese Peoples ArmedPolice.Leshan 614000,China61武警医学(Medical Journal of
10、the Chinese Peoples Armed Police Forces) Vol.13 No.01 2002 - 01出版 乐山市中医院Abstract Objective T o investigate the relation between microsatellite instability (MSI) and expression of the Mt - P53and Bcl - 2.Methods MSI at the locus D 2 S123 ,BAT- 26 ,D 2 S261 ,D 2 S799 and expression of Mt - P53,Bcl - 2
11、 protein were studied in 48 surgicalspecimens of sporadic colorectal cancer (SRC) with radioactive polymerase chain reaction (PCR) and immunohistochemistry. Results (1)MSIat locus D 2 S123 ,BAT- 26 ,D 17 S261 ,D 17 S 799 occurred in 12.5 % ,18.8 % ,10.4 % ,8.3 %of the SRC respectively;(2) The expres
12、sionof Mt - P53,Bcl - 2 protein was positive in 66.7 % ,77.1 %of the SRC respectively.(3)there was no correlation of MSI to the expression of Mt- P53and Bcl - 2 protein. Conclusions MSI exerts effects through a different mechanism from LOH caused by oncogene Bcl - 2 and anti -oncogene P53in the deve
13、lopment of sporadic colorectal cancer.Key words Sporadic colorectal cancer Microsatellity instability Mt - P53 Bcl - 2散发性结直肠癌(SRC)的发生机制颇为复杂, 目前认为至少包括两条途径,一是由癌基因的异常 激活、 抑癌基因的失活引起的杂合丢失(LOH)途径, 另一途径则是由错配修复基因突变,引起DNA错配 修复系统的功能降低或丧失,从而引起遗传物质不 稳定,主要表现为微卫星不稳定性,进而导致结直肠 癌发生的复制错误(RER)途径,这是结直肠癌发生 的新机制。为了探讨两种机制
14、的关系,本实验应用 放射性同位素为基础的聚合酶链式反应(PCR)技术 检测了48例散发性结直肠癌中4个位点的微卫星 不稳定性,同时应用免疫组织化学技术对癌基因Bcl- 2、 突变型抑癌基因P53蛋白表达进行了研究。1 材料和方法111 标本来源 收集我院1997年3月1998年10 月手术切除的新鲜结直肠癌标本48例,其中男、 女 各24例;年龄2672岁,平均53岁;结肠癌29例, 直肠癌19例;右半结肠癌15例,左半结肠癌14例。 全部病例均排除家族性腺瘤息肉病,并根据以下标 准排除可能的遗传性非息肉病性结直肠癌:(1)在一 个家族中至少有3个成员患结直肠癌;(2)三个成员 中至少有一个成
15、员在50岁以前患病; (3)其中一个 患者是另两个患者的第一级亲属。全部病例的诊断 均经病理证实,同时收集每例标本相应的正常肠组 织,置液氮中冷冻备用。112 应用PCR对MSI的检测11211 基因组DNA的提取 应用苯酚-氯仿抽提 法提取48对基因组DNA ,具体步骤参照文献1 ,2。 提取的48对标本的基因组DNA均经琼脂糖电泳, 溴乙锭染色并在紫外灯下观察证实DNA提取成功。11212 微卫星分析1 ,2 由上海生物工程公司合 成用于扩增D 2 S 123、BAT - 26、D 17 S 261、D 17 S799位点DNA的特异性引物,采用480型PCR扩增 仪分别扩增48对微卫星D
16、NA ,反应总体积为10l , 内含10Buffer 1l、15 mol/L Mgc 12 1l、dNTP 0.8 l、Taq DNA聚合酶112、 引笺各10 pmol、 基因组DNA 100 ng、- 32 PdCTP 1. 2ci ,先在94 变性5min后进入循环,共35个循环,循环参数为9450s ,7250 s ,退火温度为5460,最后一个循环结 束后继续置72 反应10 min;然后将扩增产物与等 体积的上样缓冲液混匀,在95 变性5 min冰水中 快速冷却后,在8 %的聚丙酰胺变性凝胶上电泳(恒 功率60 W)23 h后放射自显影,824 h后洗片观 察结果。11213 MSI阳性结果判定标准 和相应正常组织 细胞DNA的微卫星经扩增后放射自显影比较,出现 等位带的移动、 带的强度增加或获得额外的带型均 称为阳性。113 检测方法 应用免疫组织化学技术检测Mt -P53、Bcl - 2蛋白的表达。11311 石蜡块的制备 分别
