《细菌内毒素检查(2010.12)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细菌内毒素检查(2010.12)（31页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、细菌内毒素检查2010.12Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.目录v1、实验原理 v2、实验试剂 v3、试验器具 v4、检查方法概述 v5、供试品溶液的制备 v6、内毒素限值
2、的确定 v7、最大有效稀释倍数（MVD）的确定 v8、鲎试剂灵敏度复核 v9、干扰试验 v10、供试品的细菌内毒素检查Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.实验原理v利用鲎试剂与
3、微量内毒素产 生凝集反应的现象，以判断 供试品中细菌内毒素的限量 是否符合规定的一种方法。阳性结果 细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.
4、实验试剂v鲎试剂 从海洋无脊椎动物“鲎”的 蓝色血液中提取的变形细胞溶解物 ，经低温冷冻干燥精制而成的生物 制剂。鲎试剂的生物活性以其能检出细菌 内毒素的最低有效浓度表示，即鲎 试剂的灵敏度，单位为EU/ml。当使用新批号的鲎试剂或试验条 件发生可能影响检验结果的改变 时，应进行鲎试剂灵敏度复核试 验。Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profi
5、le 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.实验试剂v细菌内毒素国家标准品 系自大肠埃希菌提取精制得到的 内毒素，用于标定细菌内毒素工作标准品和标定，仲裁鲎试 剂灵敏度。v细菌内毒素工作标准品 系以细 菌内毒素国家标准品为基准标定其 效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复 核、干扰试验及各种阳性对照。 v细菌内毒素检查用水 指内毒素 含量小于0.015EU/ml（用于凝胶法 ）或0.005EU/ml（用于光度测定法 ）且对内毒素试验无干扰作用的灭 菌注射用水。Evaluation o
6、nly.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.试验器具 v 刻度吸管、凝集管（1075mm）、三角瓶、小试管（ 16100mm）、试管架、洗耳球、封口膜或金属试管帽、 时钟、脱脂棉、吸水纸、剪刀砂轮。 v 耐热
7、器皿常用干热灭菌法（250、30 分钟以上）去除， 塑料用具应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械（ 目前多为无热原的一次性用品 ）。Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.检查
8、方法概述v凝胶法限量试验半定量试验 v光度测定法 浊度法（终点浊度法和动态浊度法）显色基质法（终点显色法和动态显色法）凝胶法：最简单、经济、应用最广泛，中国药典的“仲裁” 方法对干扰相对不敏感。较光度测定法不灵敏Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd
9、.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.供试品溶液的制备 v某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸 提制成供试品溶液。v一般要求供试品溶液的pH 值在6.08.0 的范围内 。v可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节pH 值。Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2
10、004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.内毒素限值的确定v 一般按公式： L=K/M式中L 为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg 或EU/U （活性单位）表示。K 为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量。注射 剂K=5EU/（kgh），放射性药品注射剂K=2.5EU/（kgh ），鞘内用注射剂K=0.2EU/（kgh）。M 为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，依据药品 使用说明书，临床用药须知确定。 v 例：某产品M为14.3mg/kg，L=5/14.3=0.35EU/mg假如此产品的浓度为10
11、0mg/ml，那么，L=0.35100=35EU/mlEvaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.最大有效稀释倍数的确定 v最大有效稀释倍数（MVD） 指在试验中供试品溶液 被允许稀释
12、的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进 行内毒素限值的检测。 vMVD=cL/式中L 为供试品的细菌内毒素限值；c 为供试品溶液的浓 度，当L 以EU/ml 表示时，则c 等于1.0ml/ml，当L以 EU/mg 或EU/U 表示时，c 的单位需为mg/ml 或U/ml。如 供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MVD 取1，可计算 供试品的最小有效稀释浓度c=/L；为在凝胶法中鲎试剂 的标示灵敏度（EU/ml）。Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.
13、0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.鲎试剂灵敏度复核v目的 考察鲎试剂的灵敏度是否准确、考察检验人员操作 方法是否正确及实验条件是否符合规定。当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生可能影响检验结果 的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。v细菌内毒素标准溶液的准备1、取细菌内毒素工作标准品（或 国家标准品）一支，轻弹瓶壁， 使粉末落入瓶底，然后用砂轮在 瓶颈上部轻
14、轻划痕，75%酒精棉 球擦拭后启开，启开过程中应防 止玻璃屑落入瓶内。 Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.鲎试剂灵敏度复核2、按照标准品说明书，加入规定量的 细菌内毒素检查用
15、水溶解其内容物，用 封口膜将瓶口封严，置漩涡混合器上混 合15分钟。然后进行稀释，制备成4个 浓度的细菌内毒素标准溶液，即 2、 、0.5和0.25（为所复核的鲎试剂的 标示灵敏度）四个浓度的内毒素标准溶 液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混 匀30 秒钟。v示例 某待复核鲎试剂的灵敏度标示值为0.25EU/ml，细 菌内毒素工作标准品规格为150 EU/ml，将细菌内毒素工作 标准品用1ml细菌内毒素检查用水溶解，再稀释制备成浓度 为0.50 EU/ml，0.25EU/ml，0.125EU/ml和0.06EU/ml的细 菌内毒素标准溶液。 Evaluation only.Evaluation
16、only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.鲎试剂灵敏度复核v 细菌内毒素标准溶液的制备图示：Evaluation only.Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.鲎试剂灵敏度复核v待复核
