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1、。Z8 4 4 7 6 2前列地尔对兔动脉粥样硬化 消退作用的影响研究专业名称：内科( 心血管)硕士研究生：陈颖指导教师：蔡久英教授指导小组：刘仁光教授陶贵周教授张玉东教授江珊教授论文提交时间：2 0 0 4 年4 月学位授予时问：2 0 0 4 年6 月论文答辩时间：2 0 0 4 年5 月学位授予单位：锦州医学院前列地尔对兔动脉粥样硬化消退作用的影响研究摘要目的：观察前列地尔短期干预对高脂饮食兔动脉粥样硬化( A S ) 的影响，并初步了解其可能的抗炎机制。方法：日本大耳白兔2 4 只给予普通饲料喂饲周后，随机分为四组：( 1 ) 空白对照组( 6 只) ，继续喂饲静重饲料1 2 周；(
2、2 ) 高脂对照组( 6只) ；给予高脂饲料( 0 7 9 d 胆N 醇+ l O g d 猪油) 喂饲1 2 周；( 3 ) 氟伐他汀组( 6 只) ，给予高脂饲料喂饲1 2 周，并于后四周连续给予鼻饲氟伐他汀l o m B K 一一；( 4 ) 前列地尔组( 6 只) ，给予高脂饲料喂饲1 2 周，并于后四周连续给予静脉注射前列地尔1 0 u g K g “ d - 1 。于实验第8 、1 0 、1 2周末取空腹血，测定甘油三酯( 1 G ) 、总胆固醇( 1 ) 、C 一反应蛋白( a 啦) 、肿瘤坏死因子a ( T N F - Q ) ，实验结束后? 取主动脉行组织形态学观察。计量资料
3、用单因素方差分析，形态学结果采用对比描述分析。结果：1 2 周末，高脂喂饲组血清总胆固醇水平明显高于对照组( P O 0 s ) F l u v a s t a t i nd e c r e a s e ds e r u mc h o l e s t e r o l( p O 0 5 ) C o n c l u s i o n sT h e s er e s u l t si n d i c a t e dt h a ts h o r t t e r mt h e r a p yo fL i p o - p r o s t a g l a d i nE1c a r lr e d u c eo
4、ri n h i b i tt h ep r o g r e s so fa t h e r o s c l e r o s i s ；i tc a nr e d u c et h ec o n c e n t r a t i o no fC R P 、田q F Q ，t h ee f f e c ta m o u n t i n gt of l u v a s t a t i nw h i l ei th a v i n gn oi n f l u e n c eo nl i p i d sa n db l o o dp r e s s u r e S ot h em e c h a n i
5、 s mo fr e d u c i n ga t h e r o s c l e r o t i cp r o g r e s s i o nb yL i p o p r o s t a g l a n d i nE 1m a yb er e l a t e dt ot h ei n h i b i t i o no fj n f l a m m a t i o n K e yw o r dL i p o P r o s t a g l a n d i nE l ；A t h e r o s c l e r o s i s ；R a b b i t ；I n f l a m m a t o
6、r yf a c t o r s刖若动脉粥样硬化( A S ) 可以累及冠状动脉、脑动脉、肾动脉、 肠系膜动脉及四肢动脉等，A S 斑块增大引起慢性缺血症状，而斑块破裂则引起严重的急性血管事件，其中所导致的心、脑血管疾病是目前严重危害人民健康的疾病之一，故应积极重视对A S 的预防及治疗。A S 病因未明，治疗多采用调脂及对症处理。炎症学说是近年来提出的A s 形成的可能发生机制之，大量的病理及动物实验已给予有力的汪实1 2J 。斑块是血管内皮对于刺激的慢性炎症反应。其中，巨噬细胞和T 淋巴细胞的增生及活化，以及炎性介质如T N F o 、I L 一1 口、I N F v 及M M Ps 等的
7、分 泌增多是目前研究的熟点。基于A S 的炎性形成机制，临床及基础实验已开始关注于对A S 的抗炎治疗。其中较为肯定的是他汀类稳定斑块的抗炎效果【3 】，而其他如基因治疗、A C E I 【4 】、A I I 受体拮抗剂、抗生索及抗氧化剂等疗效均未得到肯定。前列地尔具有抑制血小板聚集、稳定细胞膜及溶酶体膜、 减少自由基形成等广泛的生物活性，早已应用于冠心病及抗A S的治疗，疗效肯定。近年来有人提出前列地尔还有抗炎作用，尤其是抑制T N F a 、1 L 1B 、C R P 等的形成，但研究多集中于肝脏、移植、肺动脉高压等治疗方面，对于抗A S 的抗炎治疗方面，国内外尚无同类研究报道。本研究复制
8、了兔A S 模型，旨在观察前列地尔短期干预在抗A S 作用中的可能抗炎机制。材料与方法1 材料与分组1 1 实验动物：健康日本大耳白兔2 4 只，雌雄不限，体重1 9 + 0 2 K g ，购自锦州医学院实验动物中心。1 2 实验分组1 2 实验分组2 4 只日本大耳白兔给予普通颗粒饲料喂饲周后，随机分为2 组，对照组6 只，高腊组1 8 只，喂饲高腊饲料8 周后，按胆固醇水平将高脂组随机分为3 组，每组6 只：( 1 ) 空白对照组：6 只，普通颗粒饲料喂饲1 2 周；( 2 )高脂对照组：6 只，高脂饲料( 每日胆固醇o 棚油1 0 9 ) 喂饲】2周：0 )氟伐他汀组：6 只，高脂饲料喂
9、饲1 2 周，并从第9 周起给予鼻饲氟伐他汀，1 0 r n g K 一；( 4 ) 前列地尔组：6 只，高脂饲料喂饲1 2 周，并从第9 周起给予静脉注射前列地尔，1 o u g K 一d 7 1 。各组动物均在同等环境下喂饲，每日共喂饲1 5 喧，饮水不限，其中两用药组均干预4 周。2 观察指标及测定方法2 1 血脂检测：于第8 周、l O 周、1 2 周末经兔耳缘静脉取空腹血标本，在自动生化仪上测定甘油三酯f i G ) 、总胆固醇f T ) 浓度。2 2 血压与体重测定：于第8 、1 0 、1 2 周末称取动物体重，并于第1 2 周末行右颈总动脉穿刺、置管、测定动脉压。2 3 免疫生化
10、检测：于实验第8 、t 0 、1 2 周末取兔空腹静脉血，在曰立7 1 7 A 分析仪匕测定C R P 浓度，“ I “ N F - 采用E L I S A 方法测定，具体步骤参照试剂盒说明书进行。2 4 病理形态学观察：于实验结束后，处死动物，取其主动脉全长( 从主动脉弓起始到腹主动脉分支处) ，生理盐水冲洗后，放入1 0 福尔马林液中固定2 4 小时，取主动脉弓部动脉，常规酒精脱水、石蜡包埋、切片行H E 染色，用图像分析仪测定斑块内膜、中膜厚度并计算两者比值。剩余动脉沿正中线切开，经苏丹染色后，铺平、摄像，并用称重法计算斑块内膜百分比。3 主要试剂与仪器前列地尔：滴品名：凯时) ，由北京
11、泰德制药有限公司馈赠，氟伐他汀：滴品名：来适可) ，由北京诺华制药有限公司馈赠，胆固醇：购自北京邦定生物制药有限公司， 仆Ba 试剂盒：购自武汉博士德生物有限公司，C R P 试剂：上海荣盛生物技术有限公司产品，血清总胆固醇及甘油三酯试剂为辽宁正通产品，图像分析仪、显微照相机、电子天平等。4 统计学分析：各数据用均数标准差表示，组问比较用单因素方差分析，利用S P S S1 0 0 统计软件对实验数据进行统计学处理。P O o s ) ，与以往报道相符。氟伐他汀干预较高脂对照组可明显降低T C 水平( P O 0 S ) 。( 见表一、图1 1表一三组动物血清T c 、T G 浓度比较塑型!
12、旦! ! 固! ! 题! 旦! ! 旦1 2 围空白刑照织离骀对照织氟伐他汀绸前列地尔绢2 1 0 0 3 83 5 5 4 3 7 73 4 6 0 4 2 73 3 5 4 2 7 9l 、9 2 0 8 01 7 6 0 5 73 9 9 0 _ + 2 0 0 4 t 6 9 + 2 3 2 +3 3 3 6 3 2 0 “2 9 1 0 “ 4 - 2 2 0 + 3 79 2 2 5 2 “3 9 6 7 1 2 0 3 0 0 1 84 1 0 4 j7 5 0 ，7 21 | 3 l 0 5 12 ，1 7 0 ，7 41 4 8 0 9 13 9 07 45 7 0 6 03
13、 4 0 2 71 4 3 0 2 9 1 7 3 0 9 31 4 6 O 5 8注：+ 与空白对照组比较，p O 0 5 ) 。高脂喂饲后血压有上升趋势，而前列地尔组较高脂对照组有下降趋势，但各组间未达到统计学差异( 见表二、图2 ) 。表二三组动物血压、体重比较空向对照纽高脂对照组氟伐他汀纽前列地尔绸1 2 1 7 4 81 2 6 8 3 51 2 5 5 5 5】2 3 4 - 4 - 5 31 0 8 2 4 - _ 4j1 1 28 - 4 - 4 31 5 3 71 1 0 4 4 91 9 4 - _ 0 】1 9 - _ 4 - _ 0 22 0 0 119 0 0 123
14、4 - 0 128 0 】2 8 0 127 O 】25 0 l30 4 - 0 12 7 0 1 2 , 9 0l4 注：+ 与空向对j 组比较，p O 0 5 ) ，( 见表三、图3 、4 ) 。表三三组动物C R P 、T N F o 比较空向对照组3 8 1 13 9 _ - - 4 _ - 1 14 6 4 - 1 21 9 3 1 4 82 3 8 5 92 2 2 4 5高脂对照组9 0 1 2 4 1 + 1 4 9 - 8 8 6 +1 9 78 1 0 2 + 1 2 0 8 158 1 6 4 5 1 06 42 1 0 7 1 67 氟伐他汀皇开8 4 4 4 - 1
15、6 0 “1 2 5 8 - - - - _ 9 9 “1 5 0 5 兰9 6 “1 2 2 7 4 - 8 9 “1 4 1 2 1 1 9 1 5 5 7 9 7 前列地尔纡I9 3 6 1 6 6 + 1 2 2 9 1 2 9 4 1 5 89 1 04 + 1 1 2 6 5 1 09 1 4 2 8 + 75 1 6 1 8 98 + 注；+ 与空闩对照组比较，p 0 0 5 ) ( 见表四、图5 ) ：H E 染色可见，空白对照组内膜为单层上皮细胞，高脂喂饲三组可见斑块隆起、内膜明显增厚，内含大量泡沫细胞，高脂对照组有的甚至可见泡沫细胞坏死、崩解形成的脂质池( 图7 ) ，两药物干预组内膜、中膜厚度及两者比值较高脂对照组明显降低饵 O 0 5 ) ( 表四) 。表四三组动物斑块内膜比、内膜厚度、中膜厚度、内膜中膜厚度比注：4 与空白对照组比较，p 0 0 5 ) ，对A S 的影响如斑块内膜面积比、内膜中膜厚度比等指标两者之间也没有显著差异( p 0 0 5 ) ，而前列地尔对血清胆固醇、体重、血压等没有产生明显影响。以上结果提示前列地尔抗A S 作用基本等同于氟伐他汀，且其中应包含有抗炎机制。动脉粥样硬化( A S ) 可以累及冠状动脉、脑
