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1、和组织中都有激活，如乳腺癌、卵巢癌、头颈部鳞状细胞癌、前列腺癌、恶性黑色素瘤、多发性骨髓瘤、 淋巴瘤、脑瘤、非小细胞性肺癌和各种白血病等 7 】1 9 1 - 1 3 】。我们的实验结果表明，在鼠恶性黑色素瘤B 1 6细胞株、人肝癌S M M C - 7 7 2 1 、H e p G - 2 细胞株、人肺癌细胞A 5 4 9 及人子宫癌H e l a 细胞株中均可检测到 S T A T 3 蛋白的高表达和活化。S T A T 3 激活后将诱导上述与细胞增殖、分化、生存、凋亡密切相关的关键 基因的异常高表达，通过各种途径促进细胞增殖、恶性转化、血管形成、阻碍细胞凋亡，表现出致癌的 作用。组成型S
2、 T A T 3 ( S T A T 3 一C ) 不需要酪氨酸磷酸化丽能够使成纤维细胞发生转化【4 1 。而显性负S T A T 3 的表 达则可以终止急性髓细胞性白血病以及胃肠基质细胞肿瘤的转化【1 4 1 。J A K 2 磷酸化抑制剂A G 4 9 0 能够抑 制卵巢癌细胞中的S T A T 3 激活，进而抑制肿瘤的生长【1 】。前列腺癌细胞株中S T A T 3 被激活，反义S T A T 3 能够诱发癌细胞凋亡1 7J 。由于持续性激活的S T A T 3 能够促使培养细胞发生恶性转化并能在裸鼠中形成肿瘤，S 耵订3 已被认为是一种癌基因l l 儿z 【川。我们的初步研究结果表明：
3、反义S T A T 3 转染后细胞中S T A T 3 蛋白的表达下降，磷酸化水平降低，表 明我们所用的全硫代修饰的2 1 个碱基组成的反义S T A T 3 寡核营酸序列能够有效的抑制B 1 6 细胞中S T A T 3 蛋白的表达和活化。不同浓度的反义S T A T 3 转染B 1 6 细胞后细胞增殖受到明显抑制，但超过一定的浓度正义寡核苷酸对照也表现出和反义核酸相似的增殖抑制作用。我们考虑可能是由于寡核苷酸的相对浓度 超过一定限度时，其本身非特异性的毒性作用掩盖了反义干涉的效果。在凋亡监测过程中也发现超过一 定浓度( 2 0 0 0 n M ) 时正义寡核苷酸转染也表现出一定的毒性作用。
4、形态学染色及A n n e x i nV P I 双染流 式细胞测定结果表明：与空白对照及正义传染组相比，在适当浓度范围内，反义转染后细胞凋亡有不同 程度的增加。凋亡发生的时间也提前。因此反义S T A T 3 寡核苷酸转染后能够有效地降低鼠黑色素瘤B1 6 细胞中S T A T 3 蛋白的表达和活化水平，进而抑制细胞的增殖，促进其凋亡，其机制可能是反义S T A T 3 削 弱了S 骼T 3 蛋白的表达和活化，引起一系列和细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡相关基因如B c l x L 、M c l 1 、c - M y c 、c y c l i n sD 1 、V E G F 、P 5 3 等的表
5、达紊乱，进而诱导了细胞的增殖抑制和凋亡增加【4 l 【6 l 【7 】。 尽管S T A T 3 参与正常细胞因子信号的调节，但是在越来越多的肿瘤细胞中发现S T A T 3 的持续性高表 达，而且有证据证实S T A T 3 参与了肿瘤的形成，表明S T A T 3 有可能成为肿瘤治疗的一个新的治疗靶位。 同时研究人员发现正常细胞中阻断S T A T 3 信号通道并不影响细胞增殖和存活，包括鼠胚胎成纤维细胞、 人口腔角化细胞、乳腺细胞中、巨噬细胞、中性粒细胞骨髓祖细胞等等1 4 J 。可能是因为残余的部分低水平的S T A T 3 信号传导对于维持正常细胞的生物进程已经足够。或是有其他途径可
6、以代偿缺失的S T A T 3 信号 途径，而恶变转化细胞的生存和生长对S T A T 3 信号途径呈不可逆的依赖，因而阻断S T A T 3 途径可以抑制 肿瘤细胞的生长而对正常组织呈现出低毒性的损害 2 1 1 3 1 1 4 1 B $ I 。针对S T A T 3 信号途径各个阶段不同蛋白或 核酸可以设计不同的方式对该途径进行阻断，从而抑制肿瘤增殖，或诱导凋亡增加，治疗肿瘤；表明阻断S T A T 3 表达也许会成为一种新的治疗肿瘤的有效手段，如果同时联合放疗或化疗以及其他肿瘤的杀伤 手段，可能有比较乐观的临床应用前景。三丁基氯化锡对小鼠免疫系统的影响张振军陈厌西安交通大学医学院7 1
7、 0 0 6 11 、研究背景：有机锡是一种人工合成的金属化合物，它作为一种重要的工业原料，广泛用作塑料制品的稳定剂、 农药、杀菌药、防腐剂及舰艇、船舶的防污涂料等使用。近2 0 年来，有机锡得以大量进入环境之中，尤 其是海洋环境，使海洋遭到大面积污染。许多国家都出现了有机锡生物污染事件，最严重的是法国阿卡琼湾的三丁基锡污染事件，曾使A T _ 养殖的太平洋牡蛎一度陷入瘫痪，直接经济损失达到8 8 亿法郎。有 机锡的污染不仅给人们造成经济上的损失，更严重的是给人们的健康带来巨大威胁。具调查发现，事机 锡可以使海洋中的一些贝类、牡蛎类生物出现性别畸变，生殖障碍，具有内分泌干扰作用，通过食塑譬 的
8、生物蓄积作用会威胁人类的健康。有机锡的污染引起了世界上许多国家的重视通过对海学的亨墼望 污藁检测发现，在世界上几个大洋中几乎都能发现有机锡的存在。一些国家开始采取措孽，来降掣亨垫 锈酾使用。并对有机锡的毒性作用进行了研究，发现有机锡除了对生物具有内分泌干扰作用聋粤兰璺 毒谨孬，还能影响其神经系统和免疫系统。目前国内外对有机锡的研究主要集中在对水生生物的生殖毒性上，而对免疫系统尤其使哺乳动物的免疫系统的影响研究较少。有人发现有机锡可以抑制N K 细胞的活性，并可导致胸腺萎缩，通过鱼的体外实验发现T B T 可以抑制T 淋巴细胞的增殖反应。对有机锡的免 疫毒性及其作用机制作了初步探讨，而对于有机锡
9、对哺乳动物的免疫毒性及其作用机制尚未完全阐明。目前，我国的有机锡污染也已相当严重，据江桂斌对我国许多港口、内河、湖泊的调查，发现我国 从北到南各港口、内河都存在不同程度的有机锡污染。由于各种原因，我国对有机锡的污染还未重视。 因此，本研究选择有机锡的代表性化合物T B T C L ，这一被认为是海洋中迄今为止最毒的化合物作为研究 对象来研究其对小鼠的免疫毒性并探讨其毒作用机制。其研究成果能够揭示有机锡对免疫系统的影响 及其相互作用机制，不仅丰富有机锡化合物的毒理学资料，为以后的深入研究打下基础，还可以为有机 锡化合物环境标准的制定提供科学依据，保护人群的健康。2 、研究目的： 1 探讨有机锡(
10、 T B T C L ) 对小鼠免疫系统的影响及其毒作用的机制。2 为有机锡环境标准的制定提供依据，保护人们身体健康。3 、研究方法： 刚成年小自鼠设5 个剂量组，分别为对照、低、中、高和阳性组，剂量为0 5 m 眺g ，4 m g k ，2 0 m g l ( g 和2 5 m 眺g ( 环磷酰胺) ，对照组给于蒸馏水，经口灌胃。2 1 d ，在实验结束前6 天给小鼠注射S R B C 进 行免疫。实验期间记录小鼠体重和摄食量的变化，并观察小鼠的一般状况，实验结束后，处死小鼠取胸 腺、脾脏。分别进行下列实验：白细胞计数，脏器系数测定，炭粒廓清实验、淋巴细胞转化实验、A N A E 阳性率测定
11、、迟发超敏实验( D T H ) 、溶血素实验和溶血空斑实验( P F C ) ，通过这些实验来观察T B T C L 对小鼠免疫系统的影响；通过对胸腺和脾脏的病理组织检查，流式细胞仪对胸腺细胞的凋亡的测定和用 免疫组化法检测细胞凋亡相关蛋白F 2 L s 和B c l 2 在胸腺和脾脏的表达情况，以探讨其免疫毒作用发生的机制。3 、结果： 结果显示，在实验期间各组小鼠体重均增加，但实验组小鼠体重的增加速度低于对照组，且实蚴组摄 食量在1 5 d 后也低于对照组，经d u n n e t - t 检验，p O 0 5 ，无显著性差异。炭粒廓清指 数k ，在T B T C L 低、中剂量组高于对
12、照组( 矿0 0 5 ) ，而高剂量组则低于对照组( p 0 0 5 ) 。A N A E 阳性 率、淋巴细胞转化刺激指数( S I ) 、足趾增加厚度，中、高剂量组均低于对照组( p o 0 5 ) ，而A N A E 阳性 率和足趾增加厚度在低剂量高于对照组。体液免疫指标半数溶血素H D s o 在低、中、高剂量组分别为1 3 2 2 34 4 6 3 、1 0 9 5 5 2 6 9 0 、7 4 9 2 8 2 9 ，对照组为1 4 4 4 2 2 3 6 ，经t 检验，p 0 0 5 ，有显著性差异。而抗 体形成细胞数在低剂量组稍高于对照组，中、高剂量时则低于对照组( p 0 0 5
13、 ) 。 对小鼠胸腺、脾脏作病理组织检查，实验组小鼠胸腺的皮质，细胞密度明显低于对照组，且细胞形 态不规则，在胸腺的髓质，可见凋亡小体的形成，及组织结构的实质性损害，对照组则细胞密度大，排列整齐，未见凋亡小体；在实验组小鼠脾脏红髓区可见髓索结构紊乱，排列不规则，甚至消失，细胞稀 少，在白髓区可见，细胞稀疏，多散在分布，亦可见凋亡小体形成。对照组则见髓索结构完整，排列整 齐，细胞形态规则。髓窦内充满细胞，自髓区则细胞排列致密。经免疫组化染色，可见凋亡诱导蛋白F a S 主要表达在胸腺和脾脏的细胞膜或细胞浆，在实验组，F a s 在胸腺和脾脏的阳性表达都较强，分布较为集中，呈簇状分布。在对照组表达
14、则相对较弱，而B c l - 2 蛋白，主要表达在对照组胸腺细胞质中，且分布较为分散，在实验组，B c l 2 蛋白表达较少，通过对脾脏F a S 蛋 白的阳性细胞计数和对胸腺F 雒和B c l 2 蛋白表达的图像定量分析，发现在胸腺和脾脏F 鹤的阳性表达率实验组高于对照组( p o 0 5 ) ，有随T B T C L 剂量的增加而升高的趋势，而在胸腺B c l 2 蛋白表达灰度值则实验组低于对照组( p o 0 5 ) ，有随T B T C L 剂量增加而降低的趋势 经流式细胞仪检测发现，低、中、高剂量组小鼠胸腺细胞的早期凋亡率分别是3 2 1 ，6 2 5 和1 0 3 2，而继发性凋亡
15、率分别是5 2 3 ，1 4 3 8 和1 7 6 8 ，对照组的早期凋亡率和继发性凋亡率则分别是 1 8 5 和3 4 8 ，可见随T B T C L 剂量的增加，小鼠胸腺细胞的凋亡有上升的趋势，经U 检验高、中剂 量组与对照组相比萨O 0 5 ，具有显著性差异。经对F a S 、b c l 一2 在胸腺的阳性表达分别与胸腺细胞凋亡作 相关分析，发现F a s 、B c l 2 的表达和胸腺细胞的凋亡存在较强的相关性，其相关系数分别为r 1 2 0 9 6 8 、r ，= 一O 9 2 5 ，即F 与胸腺细胞凋亡存在正相关，B c l 2 与胸腺细胞凋亡存在负相关，经相关性检验，p o 0
16、5 ，具有显著性差异。4 、结论： 1 三丁基氯化锡( T B T C L ) 能对小鼠的免疫系统产生损害，抑制其非特异性免疫、细胞免疫和体液1 7 3免疫。2 T B T C L 对免疫系统毒作用的机制可能是其本身或代谢产物诱导F a s 的过度表达，抑制B c l 2 的正 常表达，使F a s 和B c l 一2 的相互作用失调，导致胸腺细胞过度凋亡，使胸腺萎缩，淋巴细胞减少，免疫功 能发生障碍。3 T B T C L 也可能直接损伤免疫细胞，导致其溶解坏死。4 T B T C L 代表的有机锡可能对人类存在着免疫毒性作用，应尽早制定有机锡的环境标准。S m a d 7 基因对S m a d s 信号通路的抑制作用项晓琼霍艳英王莉王莹胡迎春李刚吴德昌 军事医学科学院放射医学研究所四室北京1 0 0 8 5 0I 摘要】目的：研究永生化B E P 2 D 细胞及辐射诱发恶性转化的B E R P 3 5 T
