《急性排斥反应的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《急性排斥反应的实验研究（95页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 3结论：结论：Th17 细胞参与了小鼠同种异体心脏移植急性排斥反应的发生和发展，对移植脏器中细胞因子 IL-17 的检测可作为急性排斥反应早期诊断的预见性和特异性指标。 关键词：关键词： 急性排斥反应，Th17 细胞，IL-17，RORt，IFN- 第二部分第二部分 anti-IL-6 mAb 抑制小鼠心脏移植急性排斥反应中抑制小鼠心脏移植急性排斥反应中 Th17 和和 Th1 细胞的产生细胞的产生 目的：目的： 观察应用 anti-IL-6 mAb 对同种异体小鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用，并
2、探讨其可能的作用机制。 方法：方法： 以 Balb/c 和 C57 小鼠分别作为供受体，建立小鼠心脏移植急性排斥反应模型。实验动物随机分为 anti-IL-6 mAb 组、anti-IL-17 mAb 组及 rat-IgG 对照组，术后每日通过触诊受鼠颈部移植心脏观察各组小鼠移植心脏存活时间并结合组织学检测。应用 realtime-PCR 检测各组移植心脏中细胞因子 IL-17、IFN- 及 Th17 细胞特异性转录因子 RORt mRNA 表达水平， 流式细胞术分别检测各组受鼠脾脏 CD4+ 、 CD8+ T 细胞中 IL-17、IFN- 的表达。 结果：结果： Anti-IL-6 mAb、
3、 anti-IL-17 mAb 输注均可显著抑制小鼠急性排斥反应的发生，移植心脏存活时间分别延长至（22.0 2.3 天） 、 （13 1.8 天） ，anti-IL-6 mAb 组抑制排斥反应发生的效果更加显著。组织病理学结果显示 anti-IL-6 mAb 输注可减轻移植心肌结构的破坏， 移植心脏中浸润的淋巴细胞明显减少。 Realtime-PCR 结果显示，anti-IL-6 mAb 组移植心脏中 IL-17、 IFN- 和 RORt mRNA 的转录水平较 rat-IgG 对照组及未治疗组显著下降，anti-IL-17 mAb 输注可部分下调 IFN- mRNA 的转录水平。流式细胞仪
4、检测结果显示 anti-IL-6 mAb 组受鼠脾脏 CD4+ 及 CD8+ T 细胞中 IFN- 的比例均有不同程度的下降， 且CD4+ IFN-+ T细胞较CD8+ IFN-+ T细胞下降更为明显，同时 CD4+ IL-17+ T （Th17）细胞的比例在 anti-IL-6 mAb 组中亦明显下降。 结论：结论： anti-IL-6 mAb 可有效抑制急性排斥反应小鼠体内 Th17 和 Th1 细胞的活化，并延长同种异体心脏移植物的存活时间。 关键词：关键词： 急性排斥反应，心脏移植，抗 IL-6 单克隆抗体，IL-17，RORt，IFN- 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文
5、华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 4第三部分第三部分 CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性调节性 T 细胞在细胞在 anti-IL-6 mAb 延长延长 小鼠心脏移植物存活中的作用小鼠心脏移植物存活中的作用 目的：目的： 探讨 CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性 T 细胞在 anti-IL-6 mAb 抑制同种异体心脏移植急性排斥反应中的作用及机制。 方法：方法： 以 Balb/c 和 C57BL/6 小鼠分别作为供受体，建立小鼠心脏移植急性排斥反应模型。实验动物随机分为 anti-IL-6 mAb 组、anti-IL-17 mAb 组及 rat-IgG 对照组，流
6、式细胞仪检测各组受鼠移植术后第 7 天脾脏及移植心脏中 CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性 T 细胞的比例。分别于 anti-IL-6 mAb 组术后第 1、3、5 天给予 anti-CD25 mAb 输注， 于术后第 7 天取受鼠脾脏及移植心脏检测 CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性 T 细胞的比例，观察移植心脏存活时间并结合组织学检查；realtime-PCR 检测 anti-CD25 mAb 输注后第 3、7、10 天移植心脏中 IFN- mRNA 的表达情况。使用去增殖的 BALB/c 或C3H 小鼠脾脏淋巴细胞作为刺激细胞， 各实验组受鼠移植物来源的淋巴细胞作为反应细
7、胞，行混合淋巴细胞培养检测细胞增殖情况。 结果：结果： Anti-IL-6 mAb 组移植术后第 7 天 CD4+ CD25+ T 细胞的比例明显升高，CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性 T 细胞占 CD3+ T 细胞的比例表现出同样的趋势，而anti-IL-17 mAb 组与未治疗组比较无明显差异。 Anti-CD25 mAb 输注 anti-IL-6 mAb 组明显缩短了小鼠移植心脏的存活时间（10.6 1.2 天） ，伴随着 CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性 T 细胞占 CD3+ T 细胞的比例明显下降，同时移植物中 IFN- mRNA 的转录水平升高。混合淋巴细胞培养
8、结果显示 anti-IL-6 mAb 组受鼠淋巴细胞经刺激后其细胞增殖程度较 rat-IgG 对照组、anti-IL-6 mAb+anti-CD25 mAb 组及未治疗组明显下降，而针对来自第三方 C3H 小鼠的脾脏淋巴细胞刺激则无此抑制效应。 结论：结论： Anti-IL-6 mAb 延长小鼠移植心脏存活可能是通过促进移植小鼠脾脏及移植心脏中 CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性 T 细胞的产生而实现的。 使用 anti-CD25 mAb 降低 CD4+ CD25+ T 细胞水平抑制了 anti-IL-6 mAb 的抗排斥效应，并且伴随着移植物中IFN- mRNA 转录水平的升高。 关
9、键词：关键词：急性排斥反应；心脏移植，抗 IL-6 单克隆抗体，抗 CD25 单克隆抗体，调节性 T 细胞，IFN- 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 5Administration of anti-Interleukin-6 monoclonal antibody prolongs cardiac allograft survival Institute of Organ Transplantation, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of
10、Science and Techology Key Laboratory of Organ Transplantation, Ministry of Education Key Laboratory of Organ Transplantation, Ministry of Health Dortoral Candidate: Jun Lei Doctoral Supervisor: Prof. Zhishui Chen Abstract Part Th17 cells were involved in cardiac acute allograft rejection Objective：T
11、o investigate the role of Th17 cell and its cytokines on cardiac acute allograft rejection in mice. Methods： The heterotopic cardiac transplantation models was established, C57BL/6 mice were used as recipients, whereas BALB/c mice were used as donors, recipients mice were randomly divided into two g
12、roups: isograft group and untreated allogeneic group. Mean survival time (MST) was measured. The grafts of recipient in each group were harvested on postoperative day （POD） 1 to 7. The expression of IL-17、 RORt and IFN- were detected by realtime-PCR and Western blot. The expression of IL-17 in CD4+
13、or CD8+ T cells were observed on POD 7 by immunofluorescence techniques. Results： The examination of allograft cytokines mRNA showed that IL-17 and RORt mRNA expressed earlier on the first postoperative day. However we could not find the same early appearance on IFN-. Allograft expression for IL-17,
14、 RORt and IFN- increased significantly in untreated allogeneic group throughout the experimental time. Immunofluorescence staining of the allografts indicated that both CD4+ and CD8+ T cells 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 6were present on POD 7, but the majority of the graft-infiltra
15、ting lymphocytes in untreated allogeneic group were IL-17-producing CD4+ T cells. Conclusion： Th17 cells may play an important role in the development of cardiac transplant rejection. IL-17 could serve as a predictive parameter for allograft rejection in the future. Key Words: Acute rejection, Th17
16、cell, IL-17, RORt, IFN- Part Administration of anti-IL-6 mAb inhibits the induction of Th17 cells and Th1 cells in murine cardiac acute allograft rejection Objective：To investigate the effects of anti-IL-6 mAb on acute allograft rejection and the potential mechanisms in a mouse heart transplantation model. Methods： The heterotopic cardiac transplantation models was performed from Balb/c to C57 mice. The anti-IL-6 mAb was administered to
