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1、Odyssey Infrared Imaging System 簡介簡介 傳統的蛋白質定量與 western 偵測方法，多數採用化學冷光偵測系統。冷光偵測是一種 Time-dependent enzymatic assay，會因為時間之不確定性而導致定量結果的再現性不高。 一般偵測冷光之方式有傳統之 x-ray film 曝光方法或用高階 CCD 影像擷取系統。然這些方 法之限制性在於 x-ray film 本身之線性度極差而影像系統則往往會因抓不準最適曝光時間 而需一再測試。此外冷光偵測最大之缺點是只能做到單色偵測，若您想於同一片 blot 上觀察 兩種不同之 target proteins
2、，最常用的方法就是將 blot stripping 後再 re-probe。這種做法可 能會有 blot 背景值過高 、訊號過弱等情況發生 ，且無法掌握 re-probe 之反應條件與前次相同。 根據上述之缺點與限制，LI-COR Bioscience 公司針對蛋白質之定量及定性研究，研 發 Odyssey Infrared Imaging System 偵測系統。此一系統最獨特之優點是採用近紅外 光雙色偵測(Infrared two colors detection) 方式，提供您在單張 blot 中，可同時分析兩種 不同之 target proteins，此一技術在蛋白質分析研究方面為一大
3、突破。Odyssey Infrared Imaging system 提供 direct detection 方法，直接在二級抗體上標定 Infrared dye (IRDyeTM)，用近紅外光雷射光源激發，即可得到穩定且清晰的訊號，同時可作數據之分析， 操作快速、方便，取代傳統冷光需加 substrate、底片曝光及沖洗等步驟。獨特之近紅外光 雙色偵測 ，使您一次實驗中可就獲得兩種蛋白質表現定量結果。對於從事訊息傳導實驗之研 究者而言，一次實驗即可同時分析 total & phosphorylated protein。 Odyssey 的特性：的特性： 1. 獨立之偵測系統：LI-COR O
4、dyssey Infrared Imaging System 具備兩支獨立之固態雷射 (680nm；780nm) 及偵測器，雷射壽命長達 60,000 小時，維護容易。 2. 絕佳的準確度與再現性：因採用近紅外光雷射科技：比放射性及冷光標定法，有更高的 敏感性(可偵測 1.2pg 的蛋白質)及準確性 (linear range 達 4000 倍)。 3. 網路連結方式操控儀器：可藉由網路連線，於任何時間、地點及作業平台進行主機操控 或結果分析。 4. 節省實驗所需成本與時間：反應過程不需再加受質來呈色，也不需壓片、沖底片等複雜、 費時、昂貴的步驟。 5. 雙色螢光：雙色紅外光雷射及偵測器，可用
5、雙色螢光同時標定，可在一次實驗內準確完 成蛋白質表現差異之分析，節省一半時間、成本。 6. 多功能的分析軟體：影像分析部分包含自動條帶偵測、分子量計算、絕對定量與相對定 量分析、矩陣點定量分析及基因差異性表現分析 Odyssey Infrared Imaging System 之應用之應用 1. DNA/RNA Analysis ? 應用範圍包括分子量測定、DNA 片段分析、PCR 產物定量、菌落雜交分析、Southern blot、Dot blot、RFLP、SSCP、AFLP、cDNA AFLP、Fluorescent Gel Shift Assay。 ? 應用範圍包括 Northern
6、Blot、RNA 定量分析、分子量偵測、基因表現分析及 RNase Protection Assay。 2. Protein Analysis ? 應用範圍包括偵測蛋白質的表現量，蛋白質的分子量，蛋白質與 DNA 的交互作用. 等。 ? 利用 Two-color Western Blots 技術進行雙色蛋白質磷酸化分析，可於同一張 Membrane 上同時觀察磷酸化與非磷酸化之蛋白質表現 ? 可進行 In-cell Western 及 In-gel Western，適用於大量蛋白質篩檢性實驗。 3. Diagnosis ? 癌症診斷：檢測癌細胞內特定基因（如 oncogene 或 proto-
7、oncogene）的表現量有無異常。 ? 疾病鑑定：檢測引起疾病的病原體中的特定蛋白表現量，包括細菌、病毒.等。 ? 藥物篩檢：觀察特定蛋白質量的變化以判定藥物對疾病的治療效果，或是大量且快速 的藥物篩選。 4. 組織學組織學 Histology ? 活體動物：可檢測特定蛋白質在活體動物內的分佈情形。例如使用 Odyssey 檢測與阿 茲海默症（Alzheimers disease）有關的 amyloid 在活體老鼠中分佈的情形。 ? 免疫組織化學（Immunohistochemistry） ：可觀察分析蛋白質在組織切片的分佈情形。 例如使用 Odyssey 觀察與杭丁頓氏舞蹈症（Huntin
8、gtons disease）有關的多巴胺 （Dopamine）receptor 在老鼠腦部切片分佈情形。 5. Protein Microarray ? Protein micro-array：將蛋白質點在玻片上，進行西方墨點法，即可在 Odyssey 上快 速地觀察分析大量的某特定蛋白質是否有異常表現。 ? Reverse-Phase protein micro-arrays：直接將腫瘤切片點在玻片上，進行西方墨點法， 即可在 Odyssey 上快速地觀察分析大量的腫瘤切片的某特定蛋白質是否有異常表 現。 （Clinical Proteomics J. 1, p81, 2004） 6. 酵素
9、催化與調控酵素催化與調控 ? 觀察細胞內正常酵素或突變酵素的蛋白量以及分佈情形，以分析研究酵素的代謝與細 胞內調控的機制。如 c-ABI （Cell. 112, p845, 2003） ，PDK1 （EMBO. 23, p2071, 2004 ） 。 7. 訊息傳遞訊息傳遞 Signal transduction ? 以 Two-color Western 研究訊息傳遞調控蛋白磷酸化的情形，以及觀察誘發或抑制訊 息傳遞的變化 。 如 Ras （Nature. 427, p256, 2004） ， JAK2 （Mol. Cell. Biol. 24, p4955, 2004） 8. 微生物學與毒
10、物學微生物學與毒物學 ? 研究細菌蛋白質的調控與變化。如黏菌 （JBC. 278, p51395, 2003） ，大腸桿菌 （Applied and Environmental Microbiology. 68, p4117, 2002 ） ? 觀察氧化還原作用對特定蛋白的調控及對細胞的毒性反應。如 Thioredoxin-1 （Toxicol. Sci. 82, p308, 2004） ，peroxisome （Toxicol. Sci. 80, p183, 2004） 9. 細胞凋亡細胞凋亡 Apoptosis ? 觀察引發細胞凋亡的物質與細胞凋亡有關之蛋白質的變化與調控，如 Deoxyc
11、holate （Carcinogenesis. 25, p681, 2004） ，Rad21（Mol. Cell. Biol. 22, p8267, 2002） 10. Transcriptional regulation ? 觀察細胞內轉錄分子的調控。如 sonRNA （Mol. Cell. Biol. 24, p6241, 2004） ，C/EBPa （JBC. 279, p7353, 2004） 11. 細胞生物學細胞生物學 ? 研究蛋白質的變化與調控，如 transferrin （Blood. 104, 4287, 2004） ，phospholipase C （J. Immunol. 172, 6810, 2004） 。 ? 研究細胞內蛋白質裂解（EMBO. 23, p4307, 2004） ，細胞週期的調控（EMBO. 22, p5746, 2003） ，與細胞分裂（PNAS. 100, p14875, 2003） 。 12. 病毒學病毒學 ? 研究病毒的蛋白質，如禽流感病毒 Influenza virus （PNAS. 100, p14610, 2003） 。 13. 其他應用其他應用 ? 可觀察用 Coomassie Blue 染色的膠片及 2-D Gel ? Two-Color EMSA
