usp62中文

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1、非无菌产品的微生物学检查：指定微生物检查 导言 以下描述的这些检测将使确定特定微生物不存在或数量在限度内的测定得以进 行，这些微生物可以在描述的条件下进行检测。 这些测试主要设计用于测定某种物质或制备品是否符合已确立的微生物质量标 准。当用于此目的时，遵循以下所给的说明，包括待取样品的数量，并按照以下 所述来解释结果。 可以使用替代的微生物规程， 包括自动化方法， 只要它们与药典方法的同等性得 到论证。 通用规程 按照在非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法中的描述进行样品制 备。 如果供试品具有抗菌活性， 则按照 非无菌产品微生物学检查： 微生物计数检查法 中的描述尽可能将其去除或中和。

2、如果表面活性物质被用于样品制备，则必须按照在 非无菌产品微生物学检查： 微 生物计数检查法 中的描述来论证其对微生物不具毒性以及其与所使用的任 何灭活剂的兼容性，。 培养基的生长促进和抑菌性能以及测试的适用性在存在供试品的情况下， 此项测试检测微生物的能力必须得到确立。如果在测试 性能或产品中作了变更且这些变更可能影响测试的结果，则其适用性必须得到确 认。 供试菌株的制备按下面所述， 使用标准化的稳定供试菌株悬浮液。使用菌种保存技术 （种子批系 统），以便用于接种的可萌发微生物从最初的主种子批开始不超过5 代。好氧微生物 将每个供试细菌菌株单独置于装有大豆酪蛋白消化物肉汤培养基或者大豆酪蛋 白

3、消化物琼脂培养基 中容器内，在温度30o至 35o之间培养 18 至 24 小时。将 白 色念珠菌 的供试菌株单独置于 （沙氏）葡萄糖琼脂培养基 或者（沙氏）葡萄糖肉 汤中，在温度 20o至 25o之间培养 2 至 3 天。 金黄色葡萄球菌如 ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83, 或 NBRC 13276 绿脓杆菌如ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118, 或 NBRC 13275 Esherichia coli 大肠杆菌如ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP 53.126, 或 NBRC 3972 沙门氏肠道菌， 肠道血

4、清型为鼠伤寒沙 门氏菌，作为替代品如 ATCC 14028 沙门氏肠道菌， 肠道血清型为阿邦尼沙 门氏菌如 NBRC 100797, NCTC 6017, 或 CIP 80.39 白色念珠菌如 ATCC 10231, NCPF 3197, IP 48.72, 或 NBRC 1594 使用pH值 7.0 的缓冲氯化钠蛋白胨溶液或pH值 7.2 的磷酸盐缓冲液来制备检 测供试悬浮液。悬浮液在2 小时内使用，或在存放于2o至 8o的情况下，在24 小时内使用。梭状芽孢杆菌使用生孢梭菌如 ATCC 11437 (NBRC14293, NCIMB 12343, CIP 100651) 或 ATCC 19

5、404 (NCTC 532 或 CIP 79.3)。于温度 30o至 35o，厌氧条件下，在 梭状芽孢 杆菌强化培养基 里将梭菌供试菌株培养24 至 48 小时。 作为制备然后稀释新鲜的 梭状芽孢杆菌体细胞悬浮液的替代方法，一种稳定的孢子悬浮液被用于检测接 种。此稳定孢子悬浮液可以在2o至 8o温度内保存，期限需验证。阴性对照 为确认测试条件， 用选定的稀释液代替供试制备品进行阴性对照实验。此试验中 必须没有微生物的生长。 当测试的样品如样品测试方法描述一样，阴性对照也适 用。培养基的生长促进和抑菌性能检测每批已制备的培养基和每批由脱水培养基或培养基成分制备培养基。按表 1 中所描述的内容来验

6、证相关培养基的适用性能。 表 1. 培养基的生长促进、抑菌、指示性能检测/ 培养基特性供试菌株 胆汁耐性革兰氏阴性菌的检测 肠道菌增菌肉汤培养基生长促进大肠杆菌 绿脓杆菌 抑制金黄色葡萄球菌 紫红色胆汁葡萄糖琼脂培养基生长促进 +指示大肠杆菌 绿脓杆菌 大肠杆菌的检测 麦康凯肉汤生长促进大肠杆菌 抑制金黄色葡萄球菌 麦康凯琼脂生长促进 +指示大肠杆菌 沙门氏菌的检测 氯化镁孔雀绿沙门氏菌富集肉汤 培养基生长促进肠道伤寒沙门氏菌 血清型鼠伤寒沙门氏 菌 阿邦尼沙门氏菌 抑制金黄色葡萄球菌木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂培养基生长促进 +指示肠道伤寒沙门氏菌 血清型鼠伤寒沙门氏 菌 阿邦尼沙门氏菌 指示大肠

7、杆菌绿脓杆菌的检测十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基生长促进绿脓杆菌 抑制大肠杆菌 金黄色葡萄球菌的检测 甘露醇氯化钠琼脂培养基生长促进 +指示金黄色葡萄球菌 抑制大肠杆菌 梭状芽孢杆菌的检测 梭状芽孢杆菌强化培养基生长促进生孢梭菌 哥伦比亚琼脂生长促进生孢梭菌 白色念珠菌的检测 （沙氏）葡萄糖肉汤培养基生长促进白色念珠菌 （沙氏）葡萄糖琼脂培养基生长促进 +指示白色念珠菌 对生长促进性能的检测，液体培养基用少量（不多于 100cfu ）适当的微生物， 接种部分适合的培养基。 在指定的温度下进行培养， 且时间不多于检测中规定的 最短时间。发生了清晰可见的微生物生长， 且与用此前检验并批准过的培养基批

8、 次所得到的微生物生长相当。对生长促进性能的检测， 固体培养基 执行表面铺展法（见非无菌产品微生物学 检测：微生物计数检查法 章节下的 平板计数法 ），用少量（不超过100cfu ） 适当的微生物给每个平皿接种。 在指定的温度下培养， 且时间不超过测试中规定 的最短时间。 发生了微生物生长， 且与用此前检验并批准过的培养基批次所得到 的微生物生长相当。 对抑菌性能的检测，液体或固体培养基用至少 100cfu 适合的微生物接种合适 的培养基。 在指定的温度下进行培养， 且时间不少于检测中规定的最长时间。应 没有发生供试微生物的生长。 对指示性能的测试 执行 表面铺展法（见非无菌产品微生物学检测：

9、 微生物计数 检查法 章节下的 平板计数法 ），用少量（不多于100cfu ）的适当的微生物 给每个平皿接种。在指定温度下进行培养， 且时间为在检测中规定的时间范围内。 菌落在外观和指示反应上与从此前已检测并批准的培养基批次所获得的菌落是 相当的。 检查方法的适用性 按照在 供试品的检测 项下相关的段落里的描述，对每种新供试品进行样品制备。 混合的时候， 在指定的增长培养基里加入每种供试菌株。单独接种供试菌株。 在 被接种的供试制备品中，使用数量相当于不多于100cfu 的微生物。 按照在 供试品的检测 项下相关段落里的描述， 使用所规定的最短接种时间进行检 测。 规定的微生物必须按照在供试品

10、的检测 项下的描述，以指示反应进行检测。 产品的任何抗菌活性会使修改检测规程（见在非无菌产品微生物学检测： 微生物 计数检查法 章节下的 抗菌活性的中和 / 去除项）成为必要。 对某个特定的供试品，如果其对于检测所指定的微生物的抗菌活性不能被中和， 则可以假定为在供试品中不会存在此种被抑制微生物。 产品的检测 胆汁耐性革兰氏阴性菌 样品的制备和预培养 按照 非无菌产品生物学检测： 微生物计数检查法 章节中的描述，将不少于1 克的供试品以1:10 稀释来制备样品，但是使用大豆酪蛋 白消化物肉汤培养基 作为所选择的稀释剂，混匀，并在20o至 25o时培养一段时 间，此时间段足以使细菌复苏但不足以促

11、进微生物的繁殖（通常 2 个小时而不超 过 5 小时）。 确认微生物不存在的检测除非另有规定，否则使用按 样品的制备和预培养 项下 规定制备的、对应的 1 克该产品的制备品，接种至 肠道菌增菌肉汤培养基Mossel。 在温度 30o至 35o下培养 24 至 48 小时。再次培养 紫红色胆汁葡萄糖琼脂培养基 平皿上。在温度 30o至 35o下培养 18 至 24 小时。 如果没有菌落生长，则供试品符合该检测的要求。定量检测选择和再培养 将在 样品的制备和预培养项 下规定的制备品和 / 或分别包含0.1 克，0.01 克，和 0.001 克（或 0.1 毫升， 0.01 毫升，和 0.001 毫

12、升）该供试品 的稀释液，接种于适量的肠道菌增菌肉汤培养基 。在温度 30o至 35o下培养 24 至 48 小时。在 紫红色胆汁葡萄琼脂培养基的平皿上对培养物进行再次培养。在 温度 30o至 35o下培养 18 至 24小时。 说明菌落的生长构成了阳性结果。 记录产生阳性结果的最少量供试品和产生阴 性结果的最大量供试品。从表 2 中大概确定细菌的数量。表 2. 结果的说明每个供试品数量的结果每克或每毫升供试品的细菌几率 数量 0.1 g or 0.1 mL 0.01 g or 0.01 mL 0.001 g or 0.001 mL + + + 超过 103+ + - 小于 103并且大于 10

13、2+ - - 小于 102并且大于 10 - - - 小于 10 大肠杆菌样品的制备和预培养 按在 非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法 章节下的描述， 将不少于 1 克的供试品以 1:10 稀释来制备样品， 并使用 10 毫升 或对应 1 克或 1 毫升的数量，接种于适量（按照 检查方法的适用性 项下的内容来 确定）的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基，混匀，并在温度30o至 35o下培养 18 至 24 小时。选择和再次培养 摇动容器，转移1 毫升大豆酪蛋白消化物肉汤培养基至 100 毫升的 麦康凯肉汤培养基 ，并在温度 42o至 44o下培养 24 至 48 小时。在温度 30o至 35o下

14、，于 麦康凯琼脂培养基 的平皿上再次培养18 至 72 小时。沙门氏杆菌样品的制备和预培养按照在非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法 章节下的描述制备供试品， 并使用对应不少于10 克或 10 毫升的数量接种于 适量 （按照 检查方法的适用性 项下内容来确定）的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基， 混合，在温度 30o至 35o下培养 18至 24 小时。 选择和再次培养 转移 0.1 毫升大豆酪蛋白消化物肉汤培养基至 10 毫升氯化镁 孔雀绿沙门氏菌富集肉汤培养基，并在温度 30o至 35o之间培养 18 至 24 小时。 在木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂培养基的平皿内再次培养。在温度30o至 35o之

15、间培 养 18 至 48 小时。 说明可能存在的沙门氏菌通过生长良好的红色菌落， 带有或没有黑色中心来识 别。这由鉴定试验来确认。 如果所描述类型的菌落不存在或如果确认鉴别检测为阴性，则该供试品符合该检 测的要求。绿脓杆菌样品的制备和预培养按照在非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法 章节中的描述，将不少于1 克的供试品以 1:10 稀释来制备样品，并使用10 毫升或对应 1 克或 1 毫升的数量， 接种于适量（按照 检查方法的适用性 项下描述 来确定）的 大豆酪蛋白消化物肉汤培养基，混匀。当检测贴剂时，通过无菌膜过 滤器来过滤对应一贴制备品的样品（见非无菌产品微生物学检测：微生物计数 检查

16、法 章节中 样品的制备 项下贴剂），并置于 100 毫升大豆酪蛋白消化物肉 汤培养基 。在温度 30o至 35o之间培养 18 至 48 小时。 选择和再次培养 在十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基的平皿内再次培养， 并在温 度 30o至 35o之间培养 18 至 72 小时。 说明菌落的生长表明了 绿脓杆菌 存在的可能性。这需通过鉴别检测来证明。 如果菌落不存在或如果确认鉴别检测为阴性，则该供试品符合该检测的要求。金黄色葡萄球菌 样品的制备和预培养 按照 非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法 章节中的描述， 将不少于 1 克供试品以 1:10 稀释来制备样品， 并使用 10 毫升或 对应 1克或 1毫升的数量来接种适量（按照 检查方法的适用性 项下的描述来确定） 于大豆酪蛋白消化物肉汤培养基，并使其均匀。 当检测贴剂时， 通过无菌膜过滤 器来过滤对应一贴制备品的样品（见在非无菌产品微生物学检测：微生物计数 检查法 章节里的 样品的制备 项下的 贴剂），并置于 100毫升大豆酪蛋白消化 物肉汤培养基 内。在温度 30o至