《复合富血小板血浆的可注射型组织工程骨的构建及修复兔桡骨缺损的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《复合富血小板血浆的可注射型组织工程骨的构建及修复兔桡骨缺损的实验研究（63页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、丫8 1 8 6 1 2舒趋0L J l ) c密级编号第一军医大学硕士学位论文复合富血小板血浆的可注射型组织工程骨的构建及修复免桡骨缺损的实验研究A ne x p e r i m e n t a ls t u d yo nt h ec o n s t r u c t i o no fa ni n j e c t a b l et i s s u ee e r e db o n ew i t ha u t o l o g o u sp l a t e l e tr i c hp l a s m aa n di t se f f e c to nr e p a i r i n gs e g m
2、e n t a lb o n ed e f e c ti nr a b b i t s黄爱文指导教师姓名裴幽献教授至堡堕塑堕主坐量麴一单位名称及地址箜二至堕奎璺j 型圃塑堕1 9 三! ! )一 争业名称骨外科学论灭提交日期2 0 0 5 年5 月论更答辩日期2 0 0 5 年5 月3 0 | = 学住授予单注和日期第军医大学2 0 0 5 年6 月答 委员会主席朱家恺教授论文评阅人周长忍教授余斌副教授2 0 0 5 年5 月1 8l硕士毕业论文复合富血小板血浆的可注射型组织工程骨的构建及修复兔桡骨缺损的实验研究硕士研究生：黄爱文指导老师：裴国献教授摘要目的1 采用二次离心法在实验室制备兔富血
3、小板血浆( P l a t e l e tR i c hP l a s m a ，P R P ) 并检测其血小板含量，研究不同浓度P R P 对体外培养自体骨髓基质于细胞( B o n eM a r r o wS t r o m a lC e l l s ，B M S C s ) 增殖的影响。2 应用可注射型纤维蛋白胶( F i b r i nG l u e 。F G ) ，自体P R P 及体外培养的B M S C s 以组织工程方法体外构建可注射型组织工程骨，观察种子细胞在材料中的生长情况，研究组织工程骨的超微结构特征。3 以动物自体P R P 复合医用纤维蛋白胶构建出一种可注射型骨修复材
4、料，单独应用这种材料或复合骨髓基质干细胞用于修复动物长管状骨骨缺损。以探讨自体P R P 用于骨缺损修复的可行性，探索出种以自体多种生长因子修复骨缺损的新途径，研制出一种新型的有生物活性因子的可注射型复合骨组织工程骨用于骨缺损的修复。方法第一部分兔P R P 的提取及其对B M S C s 增殖的影响：抽取兔耳背中央动脉血，构椽酸钠抗凝，分两次离心老4 备P R P ，显微镜下计数其血小板并与全血比较；抽取兔髂骨骨髓，体外用全骨髓培养法培养兔B M S C s 。P R P 设五个不同浓度组( 1 、j 、1 0 、2 0 9 6 、3 0 ) ，与不加P R P 的对照组比较，M T T 法
5、检测其对细胞增殖的影响。第二部分复合P R P 的可注射型组织工程骨的构建：抽取兔髂骨骨髓，体外以全骨髓培养法培养B M S C s 并用条件培养基( 含1 0 胎牛血清，5 0 u g m l 抗坏血中文摘要酸，1 0 “m o l L 地塞米松，1 0m o l L1 3 一甘油磷酸钠) 培养，诱导B M S C s 向成骨细胞分化。以诱导培养的B M S C s 与自体P R P 及F G 构建可注射型组织工程骨体外培养，倒置显微镜观察细胞生长情况，取培养一周的组织工程骨做H E 染色组织学切片及扫描电镜观察其超微结构，另取部分组织工程骨再消化培养以观察种子细胞存活情况。第三部分复合P
6、R P 的可注射型组织工程骨修复兔桡骨缺损的实验研究3 6只新西兰兔随机分为A 、B 、C 、三组，每组1 2 只。A 、B 组动物术前一周抽取耳背中央动脉血提取P R P 。A 组于术前1 2 月抽取双髂骨处骨髓并培养出B M S C s ，在体外与纤维蛋白胶( F G ) 及自体P R P 构建成可注型组织工程骨，植入自体桡骨1 5 c m 节段性骨缺损，为实验组。B 、C 两组分别植入P R P + F G 、F G 于同样骨缺损处为对照组。另取4 只桡骨同样部位和大小骨缺损旷置作为空白组。术后观察其一般情况并于4 ，8 ，1 2 周取材分别做组织学切片、摄前臂正位X 线片，取1 2 周
7、时骨缺损愈合之桡骨做生物力学、抗扭转实验、压缩实验及三点弯曲实验。分别从组织学观察、放射影像学评分和图像分析X 线阻射影及生物力学强度方面评估比较骨缺损的修复情况。结果：第一部分1 、采用两次离心法提取的P R P 中血小板汁数平均较全血增加了4 倍余：2 、M T T 法细胞增殖实验结果显示从1 3 0 各浓度P R P 组均可促进B M S C s 的增殖( 各实验组与对照组比较，经方差分析，P O 0 5 ) 。第二部分1 、本方法构建的注射型组织工程骨在溶液A 与B 混合后在较短时间( 2 0 3 0 秒) 内形成凝胶2 、倒置显微镜观察材料中细胞密度高，细胞呈多形性，可见球形，多角形
8、，梭形细胞，一周后，凝胶开始降解，培养皿底见散在梭形细胞贴壁生长。3 、组织学切片观察H E 染色切片显微镜F 见纤维蛋白硕士毕业论文基质中圆形、大小不等细胞分布较广泛。4 、扫描电镜观察经扫描电镜观察见凝胶材料中圆形、卵圆形细胞分布密集，嵌于纤维蛋白胶内部。细胞周围有大量小颗粒状物散在分布，有部分小颗粒凝聚成团，细胞膜表面如粘附少量小颗粒。5 、体外培养一周的组织工程骨剪碎后再消化培养，三天后见瓶底有大量多角形及梭形细胞贴壁生长，细胞生长增殖仍较旺盛。第三部分A 、B 两组骨缺损放射影像学评分以及新生骨痂的密度在4 ，8 ，1 2 周均优于c 组，A 、B 两组之间在放射影像学评分上无明显差
9、别，但在新生骨痂密度上，A B C ( P O 0 5 ) ，但其明显优于B 组( P 0 ，0 5 ) 2 I nt h i se x p e r i m e n t ，w ec o n s t r u c tak i n do fi n j e c t a b l et i s s u e e n g i n e e r e db o n e ，w h i c hb e g i nt of o r mak i n do fg e lb e t w e e n 2 0t o3 0s e c o n d sa f t e rt h em i x t u r eo fs o l u t i o
10、n sAa n ds o l u t i o n sB I nt h ei n v e r tm i c r o s c o p e ，i tc a nb es e e nal o to fc e l l sw h i c hh a v ea l lk i n d so fs h a p es u c ha s ：g l o b u l a rs h a p e 、m u l t i a n g e ls h a p ea n df u s i f o r mc e l l A f t e rc u l t u r e do n ew e e k ，t h eg e l a t i n eb
11、e ：g i nt od e g r a d e ，f u s i f o r mc e l l sc o u l db eA B S l R A C Ts e e na d h e r e dt ot h eb o t t o mo ft h eP e t r id i s h H i s t o l o g i c a la n a l y s i se x h i b i t e dS Om u c hg l o b u l a ra n do l i v a r yc e l l sd i s t r i b u t ei nt h eg e le x t e n s i v e l
12、y U s i n gs c a n n i n ge l e c t r o nm i c r o s c o p y ，i tc a nb ef o u n dt h a tg l o b u l a ra n do l i v a r yc e l l se m b e di nt h ef i b r i ng l u e ，a r o u n do ft h ec e l l s ，t h e r ea r eal o to fl i t t l ep a r t i c a l e s ，s o m ep a r t i c a l e sc o n d e n s ei nt o
13、am a s sa n ds o m ea d h e r eo nt h es u r f a c eo fc e l lm e m b r a n e T h et i s s u e - e n g i n e e r e db o n et h a tw a sc u l t u r e daw e e ki nv i t r 0 1 ) w a sc u ti n t ol i t t l ec h i p s ，d i g e s t e dw i t hO 2 5 t r y p s i na n dc u l t u r e da g a i n ，T h r e ed a y
14、 sl a t e r ，m a n yo ft h ep r o d u c t i v em u l t i a n g e ls h a p ea n df u s i f o r mc e l la d h e r e do nt h eb o t t o mo ft h ep e t r id i s ha n dl i v e dp r o s p e r o u s l y 3 R o e n t g e n o g r a p h i cs c o r e sa n dc a l l u sd e n s i t ya tb o n ed e f e c ti ng r o u
15、 pAa n dBw e r eb e t t e rt h a nt h o s ei ng r o u pCa tp o s t o p e r a t i v e4 、8 、1 2 w e e k s T h e r ew e r en os i g n i f i c a n ts t a t i s t i c a ld i f f e r e n c e sb e t w e e ng r o u pAa n dg r o u pBi nt h eR o e n t g e n o g r a p h i cs c o r e s B u tt h ec a l l u sd e
16、n s i t yi ng r o u pAw a sb e t t e rt h a nt h a t i ng r o u pB T h eb o n ed e f e c t si nb l a n kg r o u pw e r et h es a m es i z ea f t e r1 6w e e k so ft h eo p e r a t i o n H i s t o l o g i c a la n a l y s i se x h i b i t e dt h a tt h en e wb o n ef o r m a t i o ni ng r o u pAa n dg r o u pBa r es u p e r i o rt ow h a ti ng r o u pCa te a c hp o i n to ft i m e 。I ng r o u pAa n dB ，m o s to ft h eF Gw a sa b s o r b e da
