云南烟草曲叶病毒基因组结构及致病性研究

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1、y - 8 1 9 7 5 3云南烟草曲叶病毒基因组结构及致病性研究G e n o m i cS t r u c t u r ea n dP a t h o g e n i c i t yo fT o b a c c oL e a fC u r l 玩n n a H 所A s博士后姓名流动站专业名称合作教授边整垒堑堂垒堑垡堂生盆至垒堑鲎周窒錾握研究工作起始时间研究工作期满时间提交报告日期20 03 年6 月20 0 5 年5 月20 0 5 年5B本研究受国家杰出青年基金( 3 0 1 2 5 0 3 2 ) ,国家自然科学基金( 3 0 4 0 0 0 1 5 ) 及中国博士后科研基金( X

2、 9 0 4 0 1 ) 资助。浙江大学博士后出站报告摘要双生病毒是一类世界范围内广泛发生的植物单链环状D N A 病毒,已在多个国家和地区的多种重要经济作物上引起严重危害,且近年来有逐年加重的趋势。我国云南,双生病毒引起的烟草病害在局部田块达7 0 以上。本论文对云南烟草曲叶病毒( T o b a c c o 如c u r lY u n n a nv i r u s ,T b L C Y N V ) 的基因组结构及致病性进行了研究。测定了Y 1 3 6 和Y 1 4 3 分离物的血清学特性及病毒基因组结构,其全序列非常相似( 核苷酸序列同源性高达9 9 ) ,它们与我国云南烟草曲叶病毒Y 3

3、 分离物( T b L c Y N V Y 3 ) 的核苷酸序列同源性最高( 9 8 9 9 ) ,而与其它病毒的同源性都在8 2 以下,说明Y 1 3 6 和Y 1 4 3 是云南烟草曲叶病毒的两个分离物,并认为它可能是由烟草曲茎病毒( T o b a c c oc u r l ys h o o tv i r u s T b C S V ) ,云南南瓜曲叶病毒( S q u a s hl e a f c u r lY u n n a nv i r u s ,S L C Y V ) ,A Y v V ,马来西亚番茄曲叶病毒f T o m a t ot e a f c u r ll v l a

4、l a y s 坛:v i r u s ,T o L C M V ) 及另一未知病毒重组后形成的。云南烟草曲叶病毒的所有田间分离物都仅分离到类似D N A A 的分子,未检测到D N A B 。对其可能伴随的卫星D N A 3 分子进行研究发现,只有Y 1 3 6 和Y 1 4 3分离物伴随D N A 3 分子,且伴随多个D N A l 3 分子。序列比较和进化分析发现,这7 个D N A 3 分子分为2 个类型( I 和I I ) ,且分别与中国番茄黄化曲叶病毒( T o m a t oy e l l o wl e a f c u r lC h i n av i r u s ,T Y L C

5、 C N V ) ( 9 8 8 9 9 3 ) 和泰国番茄黄化曲叶病毒( T o m a t o y e l l o wl e a f c u r lT h a i l a n d v i r u s ,T Y L C T H V ) ( 9 9 4 9 9 6 ) 伴随的D N A 3分子具有很高的同源性和密切的进化关系。构建了T b L C Y N V - Y 1 4 3 、其同源及异源D N A l 3 分子的侵染性克隆。农杆菌接种及粉虱传毒试验证实T b L C Y N V 单独可以侵染本氏烟、心叶烟、矮牵牛、三生烟,并产生叶片上卷、叶脉增厚、植株矮化等典型的病害症状。S o u t

6、 h e r n 印迹检测表明同源及异源D N A 3 不影响T b L C Y N V 的积累量。说明T b L C Y N V 为单组份b e g o m o v i r u s e s ,其类似D N A A 分子即能诱导病毒病症状,D N A l 3 对于T b L C Y N V 的系统侵染没有明显的促进作用。关健词:云南烟草曲叶病毒;双生病毒;D N A 3 ;重组;致病性浙江大学博士后出站报告S u m m a r yG e m i n i v i r u s e sa r eag r o u po f p l a n tv i r u s e sc h a r a c t e

7、r i z e db yt h e i ru n i q u et w i n n e dp a r t i c l e s ,w h i c he n c a p s i d a t eac i r c u l a rs i n g l e s t r a n d e dD N Ag e n o m e G e m i n i v i r u s e sh a v ec a u s e dd e s t r u c t i v ed i s e a s e si nm a n ye c o n o m i c a l l yi m p o r t a n tc r o p st h r o

8、u g h o u tt h ew o r l da n da r ee m e r g i n ga sg r e a tt h r e a tf o rc r o pp r o d u c t i o n I nY u n n a np r o c i n c e m o r et h a n7 0 t o b a c c a op l a n t sw e r ei n f e c t e db yg e m i n i v i r u s e si ns o m ef i e l d s H e r e ,t h eg e n o m i cs t r u c t u r ea n d

9、p a t h o g e n i c i t yo fT o b a c c ol e a fc u r lY u n n a nv i r u s( T b L C Y N V ) w e r es t u d i e di nt h i sd i s s e r t a t i o n E p i t o p ep r o f i l e so fv i r u si s o l a t e sY 1 3 6a n dY 1 4 3w e r et e s t e dw i t has e to fm o n o c t o n a la n t i b o d i e si nt r

10、i p l ea n t i b o d ys a n d w i c hE L I S A ,t h ec o m p l e t en u c l e o t i d es e q u e n c e so fY I3 6 a n dY 1 4 3w e r ea l s od e t e r m i n e d T h ec o m p l e t eD N A Al i k es e q u e n c e sb e t w e e nY 1 3 6a n dY 1 4 3a r ec l o s e dr e l a t e d ( m o r et h a n9 9 n u c l

11、 e o t i d es e q u e n c ei d e n t i t y ) ,a n dh a v et h eh i g h e s tn u c l e o t i d es e q u e n c ei d e n t i t y ( 9 8 9 9 ) w i t hT b L C Y N V - Y 3 ,w h i l es h a r el e s st h a n8 2 n u c l e o t i d es e q u e n c ei d e n t i t ya r ef o u n dw i t ho t h e r b e g o m o v i r

12、u s e s t ts u g g e s t e d t h a t Y l 3 6 a n d Y l 4 3 a r e t w o i s o l a t e so f T b L C Y N V ,a n da r ec o n s i d e r e dt ob ea r i s e nb yr e c o m b i n a t i o na m o n gv i r u s e sr e l a t e dt oT o b a c c oc u r l ys h o o tv i r u s ( T b C S V ) ,S q u a s hI e 可c u r lY u

13、n n a nv i r u s ( S L C Y V ) ,A g e r a t u my e l l o wv e i nv i r u s ( 甜r v V ) ,T o m a t ol e 矿c u r M a l a y s i av i r u s ( I b L C M V ) a n da n o t h e ru n i d e n t i f i e db e g o m o v i r u s A l li s o l a t e so fT b L C Y N Vo n l yc o n t a i nD N A Al i k ec o m p o n e n t

14、a n dn oD N A Bc o m p o n e n tw a sf o u n d ,b u tY 1 3 6a n dY 1 4 3w e r ef o u n dt ob ea s s o c i a t e dw i t hs a t e l l i t eD N A 3m o l e c u l e s ,m o r e o v e r , t h e yw e r ea s s o c i a t e dw i t hs e v e r a lD N A l 3m o l e c u l e s S e q u e n c ec o m p a r i s o na n d

15、e v o l u t i o nr e l a t i o n s h i pa n a l y s i sr e v e a l e dt h a tt h e s eD N A 6m o l e c u l e sc o n s i s to ft w om a i nt y p e s ,w h i c hh a v et h eh i g h e s tn u c l e o t i d es e q u e n c ei d e n t i t yw i t hD N A l 3m o l e c u l e so fT o m a t oy e l l o wl e a f c

16、u r lC h i n av i r u s ( T Y L C C N V )( 9 88 9 9 3 ) a n dT o m a t oy e l l o wl e a fc u r lT h a i l a n dv i r u s ( T Y - L C T H V ) ( 9 9 4 9 9 6 ) ,r e s p e c t i v e l y 2浙江大学博士后出站报告I no r d e rt oi n v e s t i g a t et h ep a t h o g e n i c i t ya n db i o i o 酉c a ir o l eo fT b L C Y N V ,t h ei n f e c t i o u sc l o n e so fT b L C Y N V - Y 1 4 3a n di t sh o m o l o g o u so rh e t e r o g e n o u sD N A 3

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