《叶酸受体型磁共振靶向对比剂的制备与动物实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《叶酸受体型磁共振靶向对比剂的制备与动物实验研究（39页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第二军医大学硕士学位论文叶酸受体型磁共振靶向对比剂的制备与动物实验研究姓名：袁正申请学位级别：硕士专业：影像医学与核医学指导教师：肖湘生20050501独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：红签字日期：9 厂午厂月= 蝻学位论文使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅
2、和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名签字日期：哆年厂日锄始护签字日期：年月日第二军医大学硕士毕业论文英文缩写C TM R 工F RP L英文缩略词表英文全称c o m p u t e dt o m o g r a p h yM a g n e t i cr e s o n a n c ei m a g i n gf o l a t er e c e p t o rP o l y L L y s i n e中文全称计算机断层成像磁共振成像叶酸
3、受体聚赖氨酸D T P Ad i e t h y l e n et r i a m i n ep e n t a a c e t i ca c i d二乙烯五胺乙酸H P L Ch i g hp e r f o r m a n c e1i q u i dc h r o m a t o g r a p y高效液相色谱法T A AT S AB S AV I PV I P RB A SG P It u m o ra s s o c i a t e da n t i g e nt u m o rs p e c if i ca n t i g e nb o v i n es e r u ma l b u
4、 m i n肿瘤相关抗原肿瘤特异性抗原牛血清白蛋白v a s o a c t i v ei n t e s t i n ap o l y p e p t i d e血管活性肠肽v a s o a c t i v ei n t e s t i n ap o l y p e p t i d er e c p t o r 血管活性肠肽受体b i o t i n a v i d i ns y s t e mg l y c o s y l p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l生物素一亲和素系统聚糖磷脂酰肌醇第二军医大学硕士毕业论文叶酸受体型磁共振靶向对比剂的制各
5、与动物实验研究中文摘要背景磁共振靶向对比剂不仅能够提高病变的诊断正确率，还可反映病变的某些生物学特征，评价治疗疗效，临床应用前景广阔，已成为分子影像学研究热点之一。肿瘤分子生物学研究表明，在肿瘤细胞表面或肿瘤相关血管表面存在一系列受体并在肿瘤组织中过度表达，它与相应配体或配体类似物能特异结合。受体和其配体的结合具有特异性、选择性、饱和性、亲合力强和生物效应明显等特点。这为肿瘤的靶向诊断提供了新的靶向途径。研究表明，叶酸受体( f o l a t er e c e p t o r , F R ) 在大部分恶性肿瘤中，如卵巢癌、子宫内膜癌、肺癌、肾癌、乳腺癌、结肠癌和鼻咽癌中均高度表达，有时可比正
6、常组织高出2 0 3 0 0 倍，但在正常组织中的表达高度保守。其配体叶酸与叶酸受体有高亲和力。目的本研究旨在研制能通过叶酸受体介导靶向肿瘤细胞实现M R 靶向显影的对比剂叶酸偶联G d D T P A P o l y L L y s i n e ( 叶酸一P L G d D T P A ) ，探讨磁共振靶向对比剂叶酸- P L G d D T P A 靶向荷人肺癌裸鼠显像可行性及显影特点。材料与方法一磁共振靶向对比剂的制备与体外表征在碱性条件下利用D T P A 修饰聚赖氨酸( P o l y L L y s i n e ，P L ) ，合成大分子P L D T P A 为载体，与G d C
7、 I ：，反应合成大分子对比剂P L G d D T P A ，在碱性条件下将叶酸与P L - G d D T P A 偶联成大分子多聚体，即得到实验所需靶向对比剂；采用高效液相色谱法( H P L C ) 测定大分子纯度，高频电感藕合等离子体发射光谱法( I C P A E S ) i 贝 J 定G d 3 + 含量，使用细胞叶酸受体竞争结合法证明大分子活性。二磁共振靶向对比剂( f o l a t e P L G d D T P A ) 靶向荷人肺癌裸鼠M 研究将H 4 6 0 人肺癌细胞株传代于B A L B C 裸鼠皮下制成人肺腺癌裸鼠模型。经鼠尾静脉注入磁共振靶向对比剂f o l a
8、 t e - P L G d D T P A ( n - - - - 3 ) ，观察模型注射前及注射后不同时间点瘤体、肝脏及腿部肌肉T w 工信号值变化情况。三磁共振靶向对比剂( f o l a t e P L G d D T P A ) 与常规对比剂( G d D T P A ) 荷人肺癌裸鼠M R I 显像效果对照研究荷人肺腺癌裸鼠模型1 0 只随机分成实验组( n = 6 ) 和对照组( n = 4 ) ，实验组动物分别经鼠尾静脉注入靶向对比剂f o l a t e P L G d D T P A ，对照组分别注入第二军医大学硕士毕业论文G d - D T P A ，观察两组动物注射前及
9、注射后不同时间点瘤体、肌肉T 。W I 信号值变化情况，并进行对比。结果成功地制备出叶酸与G d D T P A P o l y L L y s i n e 偶联大分子多聚体( f o l a t e P L G d D T P A ) ，该多聚体具备高纯度、与叶酸受体高亲和力，同时亦载带高浓度G d 3 + 离子( 每分子含5 6 个G d 3 + ) ；在靶向荷人肺癌裸鼠M R I 研究中，试剂f o l a t e P L G d D T P A 有向瘤体局部聚集的趋势，峰值出现在约增强后4 8 小时，最大强化率1 2 6 0 ；而在肝脏中，强化效果亦明显，峰值出现在约增强后6 小时，之
10、后即成下降趋势。与常规对比剂( G d - D T P A ) 对照，( 1 ) 所制备对比剂f o l a t e P L G d D T P A 有明显的靶向瘤体的效果，实验组瘤体各扫描时间点信号值差异有统计学意义( F = 2 9 3 0 ，P 9 5 ) ，较小分子量峰 2 0 ，0 0 0D a ) 由于拥有足够的大小、循环时间长，广泛应用于M R 血管成像的研究中 9 , 1 0 1 。聚赖氨酸( P o l y L L y s i n e ，P L ) 经D T P A 修饰后，是有效的顺磁性或放射性阳离子的大分子载体【1 1 | 。研究表明，P L G d D T P A (
11、分子量为4 8 7 K D a ) ，较其他大分子对比剂如B S A G d D T P A 相比，其毒性和免疫源性都较弱f 1 2 ，13 1 。同时，P L G d D T P A 还拥有相对较快的血液清除速度，在兔的活体研究中，l 小时血液循环清除率为9 0 ，其血浆半衰期为0 1 3 4 小时【1 4 】。叶酸( 分子量为4 4 1 D a ) 有较小的分子量，作为自然物质，最主要的优点是没有单克隆抗体的免疫源性缺陷，可以多次给药；叶酸在合成与储存过程中比较稳定，连接的化学成分和产物的纯化比较简单【l5 1 。叶酸受体在多种肿瘤细胞( 如卵巢癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌和肾细胞癌等) 膜
12、上高表达【5 J ，叶酸与叶酸受体的结合，是受体和其配体的结合，具有特异性、选择性、饱和性、亲合力强和生物效应明显等特点。以叶酸为药物载体，通过受体介导作用，增加药物在肿瘤局部的浓度，达到靶向显影或治疗目的，是目前研究最活跃的前沿领域之一。我们设想利用叶酸和叶酸受体高亲和力的特性来实现靶向显影，利用P o l y L L y s i n e ( 聚赖氨酸) 的氨基反应链接多个G d 3 + 离子和叶酸，以提高结合率，使靶组织局部处于G d 3 + 离子较高浓度状态，从而提高增强效果。从实验结果看，合成的大分子多聚体在活性测定中，具有叶酸相同的竞争曲线，说明该多聚体有与叶酸受体高亲和力结合特性，
13、每分子多聚体载有5 6 个G d 3 + 离子。本研究成功地制备出叶酸与G d D T P A P o l y L L y s i n e 偶联大分子多聚体，体外检测结果表明该多聚体具备与叶酸受体高亲和力结合特性，同时亦载带较高浓度G d 3 + 离子，将为肿瘤M R 靶向成像打下基础。第二军医大学硕士毕业论文参考文献1 W e i s s l e d e rR ，M a h m o o dUM o l e c u l a ri m a g i n g ( R e v i e w ) R a d i o l o g y 2 0 0 1 ，2 1 9 ：3 1 6 3 3 3 2 E a r l
14、SJ P ，B l u e m k e N e wM Ri m a g in gc o n t r a s ta g e n t s M a g n R e s o n I m a gin g C Iin N A m ，19 9 9 ，7 ：2 5 5 。3 I r o nO x i d eN a n o p a r t i C l e sa sM a g n e t i cR e s o n a n c eC o n t r a s tA g e n tf o rT u m o rI m a g i n gv i aF o l a t eR e c e p t o r t a r g e t
15、 e dD e li v e r yH o o nC h o i ，S e o kR y eC h o i ，R o n gZ h o u ，e ta lA c a dR a d i o l2 0 0 4 ：11 ：9 9 6 1 0 0 4 。4 C h u n Y e nK e ，C a r l aJ M a t h i a s ，M a r kA G r e e n ：N u c l e a rM e d i c i n ea n dB i o l o g y2 0 0 3 ( 3 0 ) 8 1l 一8 1 75 J e n n i f e rS u d i m a c k ，R o
16、b e r tJ L e eT a r g e t e dd r u gd e li v e r yv i at h ef o l a t er e c e p t o rA d v a n c e dD r u gD e li v e r yR e v i e w s4 1 ( 2 0 0 0 ) 1 4 7 1 6 26 S h e e l aD K o n d a a ，b ，C ，M i c h a e lA r e f a ，b ，d ，S t e v e nW a n g S p e c i f i ct a r g e t i n go ff o l a t e d e n d r i m e rM R Ic o n t r a s ta g e n t st ot h eh i g ha f f i n i t yf o l a t er e c e p t o re
