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1、标准曲线及回收实验NelsonSomogyi法测定血糖注意事项：n1、加入少量液体，要垂直送至管底。n2、取混浊液体，先混匀。制备血滤液未知管 回收管H2O 1.5 1.0全血 0.1 0.1标准糖 - 0.5枪式移液器的使用！1、混匀！加入4.5%Ba(OH)2 0.2ml，充分混匀！ 静置至变褐色（至少15分钟）。 2、加入5%ZnSO4 0.2ml，混匀！静止5分钟。 3、离心，3000，10分钟。n按顺序加试剂，立即混匀，试管要干净、 干燥！目的要求n1 了解标准曲线及回收实验的作法及意义 。n2 掌握血滤液的制备。n3 掌握测定血糖的方法Nelson- Somogyi二氏法。n血液中
2、的糖主要是葡萄糖，即血糖n测定血糖含量是判断糖代谢正常与否的一 项重要指标，为临床化验常作的分析。n 本法是基于葡萄糖的还原性。n 由于血液中存在的大量蛋白质对测定有干 扰，必需先去除蛋白质，制备无蛋白血滤 液。 全血+Ba(OH)2+ZnSO4蛋白质 + 非糖还原物 +上清液（G）GCu(OH)2 Cu2O砷钼酸 钼兰颜色深浅与葡萄糖含量成正比其他还原性物质(主要是谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、尿酸等)与Folin吴法比较优点：n一、 测定血糖值接近真实值去除了血液中的其他还原物质，Folin吴法用钨酸法沉淀血样中的蛋白质，不能去除这些还原物质，比真正的还原糖值高。n正常值：Folin吴法 ：801
3、20mg/dl，NelsonSomogyi法 ：65110mg/dln二、最后获得的比色物较为稳定采用砷钼酸代替 Folin吴法的磷钼酸，使，可放置较长时间（24小时以上）而不影响测定结果。三、可不用血糖管NelsonSomogyi法所用碱性铜溶液中含有大量的NaSO4 产生大量离子对溶入的气体产生盐析效应，以减少溶液 中溶解的空气中的氧，从而减少了生成的Cu2O的再氧化。n血糖管的目的：缩小与空气接触的面积，防止了空气中 的氧对生成的Cu2O 的再氧化，以免影响结果。标准曲线 n用不同浓度的标准糖溶液，按测糖方法进行光度法测定 ，读出不同浓度糖溶液的相应吸光度；以吸光度为纵座 标，以糖浓度为
4、横座标，绘出一曲线，此曲线即称为标 准曲线。n1、找出该方法的可测范围n2、标准曲线又叫工作曲线，当用同一方法，同一光度计 及波长时可用标准曲线直接求出末知样品的含量回收实验 n在对一未知样品测定时，设两个管未知管：未知样品回收管：未知样品已知标准样品n回收率M回-M未/已知标准样品量100%n理论值为100，由于实验方法，操作等因素10010回收实验的目的n1、验证方法的可靠性，在操作过程中样品是否有 丢失，破坏，其他成分是否有干扰。n2、校正测得值：若采用此方法，可用回收率校正 测得值，使之接近真值。校正值（真值）测得值 回收率制备血滤液未知管 回收管H2O 1.5 1.0全血 0.1 0
5、.1标准糖 - 0.51、混匀！加入4.5%Ba(OH)2 0.2ml，充分混匀！ 静置至变褐色（至少15分钟）。 2、加入5%ZnSO4 0.2ml，混匀！静止5分钟。 3、离心，3000，10分钟。n按顺序加试剂，立即混匀，试管要干净、 干燥！其余步骤n见讲义。n各管中分别加入砷钼酸试剂1ml，轻轻混匀 至无气泡(CO2)产生，将各管分别加蒸馏水 7.0ml，小心的吹打混匀。结果处理回收率=（ M回-M未） 2/0.5 0.1 0.5100%血糖浓度mmol/L =M未 2/0.5 0.11000180血糖含量（ M未） =A标2 0.5 0.1 A未mg真值=测值回收率血糖浓度标准曲线 5.55 11.11 16.67 22.22 mmol/L 标准曲线查得结果结果要求n1、用座标纸绘制血糖的标准曲线。n2、计算血糖测定方法的回收率。n3、根据公式求出血糖浓度(mmol/L)，并根据回 收率求出血糖浓度的真值。（公式）n4、利用标准曲线求出血糖浓度(mmol/L)。讨论n影响回收率的因素有哪些？
