颈性心绞痛家兔模型颈肌组织α－肌动蛋白变化的观察

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1、. 2772 .吉林医学2010年6月第31卷第18期通过免疫组化方法，观察颈性心绞痛家兔颈肌组织内肌动蛋白表达及含量变化，为颈性心绞痛的发病机理寻找实验依据。现报告如下。1 资料与方法1.1 实验动物：健康大耳白兔40只，6月龄，体重2.02.5 kg，雌雄不拘，由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供，在贵阳中医学院实验动物研究所分笼饲养，喂标准兔饲料。1.2 实验试剂：S-P免疫组化试剂盒，Lot：50481613；Mouse actin-Alpha Sarcomeric Actin，Lot：41281201；封闭用正常羊血清Blocking Solution，Lot：50481613；

2、二抗 Go Anti-Mo LgG/Bio，Lot：50481613；辣根酶标记链霉卵白素Streptavidin/HRP，Lot：50481613，以上均购自北京中杉金桥生物技术有限公司 1.3 实验设备：光学显微镜：Nikon O-A-S型，日本。石蜡切片机：AiHua QPJ-IC，中国。生物组织自动脱水机：AiHua TSJ-IA，中国。生物组织包埋机：AiHua BMJ-1，中国。图象分析系统：Biomias 2001图象分析系统，四川大学图象图形研究所。1.4 实验方法：颈性心绞痛动物模型制备1：40只家兔适应性饲养1周，随机分为对照组和模型组，3%戊巴比妥钠耳缘静脉推注麻醉，取俯

3、卧位固定，常规术野消毒，C臂X光机引导下穿刺，抵达家兔左侧第7颈椎横突，用制备好的3 ml淤血注入，浸润模型组家兔左侧颈夹肌，横突间肌与横突棘肌。家兔苏醒后送回笼养。次日，将模型组家兔置于特制框架中以改变颈部正常应力分布，低头角度为45，1次/d， 5 h/次，松解后送回笼养。2周后重复注射1次，低头饲养12周。对照组不做任何处理。1.5 观察指标和方法1.5.1 组织学观察：造模后12周取材，采用空气栓塞法处死家兔，即刻取颈胸锁乳突肌，生理盐水冲洗后放入4%多聚甲醛固定液瓶中，经脱水、脱钙、石蜡包埋、切片、HE及免疫组化染色，进行组织病理学检查。1.5.2 显微镜观察及图像分析：显微镜的物镜

4、固定：40。光栅孔径：0.25。光源电压：9 mV。曝光时间：0.1 ms。色温： 5 500 K。分辨率：1 6001 200。图像采集程序：Biomias 2001。阳性视野的确定条件：正常颈肌阳性为胞浆染为棕黄色，颈性心绞痛家兔模型颈肌组织肌动蛋白变化的观察翟海英1，唐东昕2，杨 柱2（1.贵阳中医学院第一附属医院，贵州 贵阳 550002；2.贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002） 摘 要 目的：观察颈性心绞痛家兔模型肌组织内肌动蛋白变化。方法：选用大耳白兔，采用低头干预并注射瘀血，建立颈性心绞痛动物模型，运用免疫组化法观察肌动蛋白变化。结果：对照组可见阳性胞浆染色均一，呈淡棕黄色或

5、深棕黄色，肌纤维平直，横纹可见。模型组大部分肌纤维呈波浪状。胞浆染色不均一，有淡染、缺染现象。结论：颈性心绞痛颈肌细胞发生了早期退变。 关键词 颈性心绞痛；肌动蛋白；颈肌Observation on the Change of-actin in the Muscle Tissue of Rabbit Model with Cervical Coronary Heart Disease ZHAI Hai-ying,TANG Dong-xin,YANG Zhu(1.First Affiliaced Hospital of Gui Yang Medical College GuiYang55002,

6、China 2.GuiYang College of Traditional Chinese Medicine,Guiyang 550002,China)Abstract:Objective To observe the he change of-actin in the muscle tissue of rabbit model with Cervical coronary heart disease.Methods Establishing the animal Model with Cervical Coronary Heart Disease by the injection of b

7、lood stagnation,observe-actin by immunohistochemisty.Results In the control group,the dyeing of masccline endochylema is uniform with the color of light or deep buffy while the muscle fibers is straight and the transverse striation is visible.Meanwhile,most muscle fibers is in wave and the dyeing of

8、 endochylema is the same,occasionally,there is light or incomplete dyeing.Conclusion There is prophase degeneration in the cervical muscle cell in the rabbit model with cervical coronary heart disease. Keywords:Cervical Coronary Heart Disease;-actin;Animal Model基金项目 本论文来源于贵州省教育厅自然科学研究项目 课题编号：黔教科2006

9、2103 讨论实验发现，生物体内低密度的氧化修饰呈现一个自由基的链式反应过程。利用红花水提物来提高受ox-LDL损伤后内皮细胞的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性，以减轻氧化损伤。通过红花水提物的预处理能有效减轻ox-LDL对内皮细胞的氧化损伤，抑制丙二醛（MDA）和乳酸脱氢酶（LDH）的生成，提高NO，SOD，GSH-Px和NOS的活性，保护内皮细胞，抑制其氧化损伤。4 参考文献1 陈少刚,李长潮.当归注射液对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用J.中国中西医结合杂志,1995,10(1):142.2 何煜舟,丁美萍.大豆异黄酮对氧化损伤的血管内皮细胞的保护作用J.浙江中医杂志,2006,

10、13(2):334.3 田晓华,丛建波,施定基,等.褐藻硫酸多糖清除活性氧自由基作用及动力学的ESR研究J.营养学报,1997,23(4):274.4 伍 静,姚尚龙,杨 艳,等. 异丙酚对鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的保护作用J.中华麻醉学杂志,2002,17(9):312.收稿日期：2010-03-19 编校：周浩吉林医学2010年6月第31卷第18期. 2773 .均匀分布，显横纹。采集图像位置的选取：图像采集显微镜下，每张肌组织纵切标本以阳性染色区中心为核心向四周随机取5阳性视野，利用图像分析程序测量该阳性染色面积及染色的光密度。1.6 统计学处理：实验结果用均数标准差（x s）表示，采

11、用t检验。2 结果2.1 颈肌横纹肌肌动蛋白标本光镜观察结果：对照组可见阳性胞浆染色均一，呈淡棕黄色或深棕黄色，肌纤维平直，横纹可见(图1)。模型组大部分肌纤维呈波浪状。胞浆染色不均一，有淡染、缺染现象（图2）。图1 对照组-肌动蛋白 40 2.2 颈肌横纹肌肌动蛋白光密度变化：对照组（0.0630.019），模型组（0.0540.018），两组比较差异有统计学意义（P0.05）。3 讨论实验观察发现，慢性炎性反应刺激使颈肌处于异常应力的非生理状态下，颈部肌群结构及功能蛋白的表达均异常，肌细胞发生了早期的退变。推测可能与肌组织长期受炎性反应刺激而痉挛缺血，神经营养状态不良，导致骨骼肌细胞内肌动

12、蛋白持续下降有关2。由此肌张力等也受到一定影响。可见，在此过程中，肌组织内部肌动蛋白等结构功能蛋白的异常是肌挛缩、肌力下降及炎性反应刺激等改变的内因，且肌组织发生了早期退变。4 参考文献1 唐东昕,杨 柱,金亚弦.应用气血理论建立颈性心绞痛动物模型的探讨J.辽宁中医杂志,2008,35(3):364.2 吕江明,余家树.大鼠死后心肌骨骼肌细胞肌动蛋白变化及与死亡时间的关系J.中国法医学杂志,2004,(19)4:213.收稿日期：2010-04-18 编校：朱建梅图2 模型组-肌动蛋白 40 葛根素（Puerarin，Pue）具有扩血管、降血压、抗心肌缺血等作用。以往研究表明葛根素扩血管机制存

13、在争议，可能与实验条件和动物种属不同有关。本文的研究旨针对血管条的不同血管段血管活性不同对于葛根素血管舒张作用机制的影响，应用NO合酶抑制剂L-硝基精氨酸（L-NAME），探讨葛根素对不同胸主动脉段的舒张作用与NO的关系，观察葛根素的舒血管作用机制。现报告如下。1 资料与方法1.1 实验材料不同血管段活性差异对葛根素血管舒张作用机制的影响赖清瑶，丁选胜（江苏省中国药科大学，江苏 南京 210038） 摘 要 目的：研究离体血管环试验中不同血管段活性差异对葛根素（Puerarin，Pue）的舒张作用差异并探讨其机制。方法：SD大鼠36只，常规方法制备离体血管环标本，分为内皮完整组和内皮组两大组，

14、其中每组都设有远心段、中段和近心段三组。用离体血管灌流大鼠胸主动脉环，血管基础张力定为9.810-3 N(1 g)，测定各组血管环张力及葛根素pEC50。内皮完整组分别加入L-NAME与葛根素（浴槽终浓度为10-4 molL-1）共同孵育，测定血管环张力变化，并计算pEC50。结果：葛根素在10-710-4 molL-1范围内对腹主动脉具有剂量依赖性的舒血管效应，在10-4 molL-1达到（61.23.7）%的最大舒张；去内皮后其舒血管效应可降低（34.66.1）%，比较差异有统计学意义（P0.05）。各组pEC50比较差异均无统计学意义（P0.05）。结论：葛根素具有内皮依赖性的舒血管效应，但不同血管段中舒张活性存在差异，该作用与NO系统有关。 关键词 葛根素；胸主动脉环；NO合成酶；血管舒张