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1、Beijing BLKW Biotechnology Co., Ltd.Tel:010-57158602/人人 IL-IL-2222 定量分析酶联免疫检测试剂盒定量分析酶联免疫检测试剂盒本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的 IL-22 浓度。使用前请仔细阅使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整读说明书并检查试剂组分是否完整, 如有疑问请与北京博凌科为生物科技有限公司联系，我们将提供力所能及的帮助。如您有其它需求，请登录北京博凌科为生物科技有限公司网站或致电本公司。 IL-IL-2222简介：简介：白细胞介素 22(IL-22)， 属于 IL10 细胞因子
2、家族， 该家族其它成员包括 IL-10, IL-19, IL-20, IL-24 和 IL-26等，这些成员都有一部分相同的氨基酸序列，但生物功能却是迥异的。IL-22 主要由活化的 Th1 型 T 细胞和 NK 细胞分泌，主要作用于上皮细胞和炎症反应，人的 IL-22 的 cDNA 编码含33 个氨基酸信号肽的 179 个氨基酸的蛋白，与小鼠的 IL-22 有 79%的同源性，与人的 IL-10 有 22%的同源性。IL-22 通过 Th2 细胞抑制 IL-4 的产生，能够在肝和胰脏内诱导产生急性相反应物，IL-22 的信号都是通过都属于 II 型细胞因子受体的 IL-22R 和 IL-10
3、R-/CRF2-4 来介导的。在人的类风湿性关节炎的病人的关节滑液内的成纤维细胞和巨噬细胞都观察到有 IL-22 的产生，提示在类风湿关节炎的的关节滑液中介导炎症反应。 检测原理检测原理: :本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-22的浓度。IL-22捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时， 其中的IL-22会与捕获抗体结合， 其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人IL-22抗体后，抗人IL-22抗体与IL-22接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会
4、与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在IL-22将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IL-22浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-22浓度。人定量分析酶联免疫检测试剂盒组成人定量分析酶联免疫检测试剂盒组成: :组分规格预包被板12条 或 6条样本分析缓冲液1瓶5ml/3 ml标准品稀释液10 ml/5ml标准品2支/1支(冻干)生物素化抗体1瓶10ml/5mlHRP连接的酶结合物1瓶10
5、ml/5ml浓缩洗涤液 2030ml/瓶TMB底物1瓶10ml/5 ml终止液1瓶5ml/3 ml封板胶纸3/2张说明书1份 标本收集标本收集: :1.标本的收集请按下列流程进行操作：A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测；D.标本收集后请分装，冻存于20，避免反复冻融。Beijing BLKW Biotechnology Co., Ltd.Tel:010-57158602/2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除；4.请
6、勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。 注：正常人血清或血浆样本请用标本缓冲液做倍比稀释后再检测。注：正常人血清或血浆样本请用标本缓冲液做倍比稀释后再检测。 注意事项注意事项: :1.试剂盒请保存在28。2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。3.若标准品复溶后，请在三天内用完。4.底物请勿接触氧化剂和金属。5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。8.室温反应，请严格控制在2528。9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并
7、导致结果误差较大。10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。11.加样过程中避免气泡的产生。12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。 检测前准备工作检测前准备工作: :1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于28保存。2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。3.标准品:加入标准品稀释液0.4ml至冻干标准品瓶中使IL-22终浓度达到2000pg/ml，静置15分钟后轻轻混悬待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，最高浓度为2000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）洗涤方法
8、洗涤方法: :自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。 实验过程需自备的材料：实验过程需自备的材料：1.不同规格的加样枪及相应的枪头；2.酶标仪；3自动洗板机；4去离子水或双蒸水； 操作步骤操作步骤: :1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4。2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反
9、应孔，室温孵育120分钟。对于血清或血浆标本，请加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本, 如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。Beijing BLKW Biotechnology Co., Ltd.Tel:010-57158602/4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育60分钟。6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。7.加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育20分钟。8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。9.加入显色剂T
10、MB100ul/孔，避光室温孵育20分钟。10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。 结果判断结果判断: :1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。4.若标本 OD 值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 典型数值和参考曲线典型数值和参考曲线浓度pg/ml典型OD值1典型OD值2OD平均值00.09650.12170.109162.50.
11、41690.35150.38421250.61570.59470.60522500.90010.82490.86255001.19561.131.162810001.52361.62441.57420002.02582.11862.0722人人IL-IL-2222参考标准曲线参考标准曲线人IL-22标准曲线0123062.512525050010002000人IL-22 浓度（pg/ml）OD值注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。 灵敏度，特异性和重复性灵敏度，特异性和重复性: :1.灵敏度：多次重复结
12、果表明，最小检出量为6.7pg/ml。2.特异性：与IL-15,IL-20,IL-22R,IL-29,Leptin,LIF,MIF,OPG,OSM,SCF,TNF-,TNF-等没有交叉反应。3.重复性：板内，板间变异系数均10%. 参考文献参考文献: :1. Pestka, S. et al. (2004) Annu. Rev. Immunol. 22:929.2. Xie, M.H. et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:31335.3. Kotenko, S.V. and J.A. Langer. (2004) Int. Immunopharmacol. 4:B
13、eijing BLKW Biotechnology Co., Ltd.Tel:010-57158602/4. Boniface, K. et al. (2005) J. Immunol. 174:3695.5. Nagalakshmi, M.L. et al. (2004) Int. Immunopharmacol. 4:679.6. Ikeuchi, H. et al. (2005) Arthritis Rheum. 52:1037.9.ELISAELISAELISAELISA KitKitKitKit forforforfor thethethethe QuantitativeQuanti
14、tativeQuantitativeQuantitative AnalysisAnalysisAnalysisAnalysis ofofofof HumanHumanHumanHuman IL-IL-IL-IL-22222222The human IL-22 ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) kit is used for detection of human IL-22 in cell culturesupernatants,human serum and plasma.THETHETHETHE ELISAELISAELISAELISA KI
15、TKITKITKIT ISISISIS FORFORFORFOR RESEARCHRESEARCHRESEARCHRESEARCH USEUSEUSEUSE ONLYONLYONLYONLY. Please read this instruction manualcarefully and check out the material provided before use, and you can contact with our company if any questions. You can enterour website or call us for other aim. Intr
16、oductionIntroductionIntroductionIntroductionInterleukin 22 (IL-22), is a member of the IL-10 cytokine family. Other members of this family include IL-10, IL-19, IL-20, IL-24,and IL-26 (1). Members of this family share partial homology in their amino acid sequences, but they are dissimilar in theirbiological functi
