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1、1红茶茶水内的细菌数量与时间的关系初探红茶茶水内的细菌数量与时间的关系初探李超，张韬，董志会，曹杨，杨龙（石河子大学生命科学学院，08 级生物技术，新疆 石河子）摘要：如茶水搁置过夜，容易被病原性细菌污染，也易导致茶水中的成分发生变化；同时茶叶中的咖啡因积聚过多，对人体会产生刺激作用。因此，隔夜茶可能会引起胃肠疾病、消化不良等症。一般来说，茶水浸泡时间越长，微生物污染成度越高。本探究实验将茶水看作液体培养基利用平板菌落计数技术，来探究红茶茶水内细菌的数量与时间的关系。固体培养基采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，因此此测定值为一种近似值。关键词：红茶、茶水、微生物、细菌、隔夜茶、变质茶叶的化学成分
2、是由3.5%7.0%的无机物和93%96.5%的有机物组成。茶叶中的无机 矿质元素约有27种，包括磷、钾、硫、镁、锰、氟、铝、钙、钠、铁、铜、锌、硒等多种。 茶叶中的有机化合物主要有蛋白质、脂质、碳水化合物、氨基酸、生物碱、茶多酚、有机 酸、色素、香气成分、维生素、皂苷、甾醇等。茶叶中含有2030%的叶蛋白，与一般食物 相比，茶叶中的蛋白质含量是相当高的。最新的资料报道，茶叶中的碳水化合物含量多在 40%左右，某些茶叶高达60%以上，茶叶中的碳水化合物多为多糖类。如茶水搁置过夜，容 易被病原性细菌污染，也易导致茶水中的成分发生变化；同时茶叶中的咖啡因积聚过多， 对人体会产生刺激作用。因此，隔夜
3、茶可能会引起胃肠疾病、消化不良等症。一般来说， 茶水浸泡时间越长，微生物污染成度越高。 本实验将茶水看作液体培养基利用平板菌落计数技术，来探究红茶茶水内细菌的数量 与时间的关系。固体培养基采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，因此此测定值为一种近似 值。1 1、 材料与方法：材料与方法：1.1 红茶茶水来源与接种红茶的来源是在市面的茶叶专卖店得来的，茶水在敞口的烧杯中浸泡，并放置在有人经常生活的室内，进行自然接种。具体方法为：每天上午十二点用开水浸泡一次茶水，茶叶的质量为1.00g，所用水的体积为250ml，并做好标记，置于室内，连续浸泡六天。六天后取出茶水进行平板菌落计数。1.2 消毒与灭菌本实验
4、采用高压蒸汽灭菌方法：将3个三角瓶（盛有牛肉膏蛋白胨琼脂培养基） 、12支1ml吸管、26个培养皿、7支试管 （盛有9ml水）等进行高压蒸汽灭菌。 灭菌前的准备：将高压蒸汽锅的内桶取出，向外锅内加入适量的水，使水与搁架相 偏平，将内桶放入； 装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶中，应注意不要装的过挤，以免妨碍 蒸汽流通而影响灭菌效果，容器口端也不要与内桶壁接触，以免冷凝水浸润包纸口而渗透 入所灭菌的培养基中。盖上锅盖，以两两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气； 加热排气：接通热源，同时打开气阀，待见有大量水汽排出时，维持3-5分钟，锅内 空气排尽，关上排气阀； 升温保压：继续加热至压力表指针达
5、到灭菌所需压力时计时，并控制热源维持压力 至所需的时间（压力为1.05kg/cm2 ,121.3，30min） ； 出锅：隔断热源，自然降温，待压力表指针回零，打开排气阀，稍等一段时间，再2开盖取物，将物品放置在干燥处备用。1.3 培养基的制备实验中所用固体培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，该培养基适于腐生细菌的生长，因此平板菌落计数为茶水内的近似值。 培养基的组成及所需量：药品牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水PH所需量3g10g5g18-20g1000mL7.0-7.2 溶化：将已经称好的药品依次放入融化容器内在电炉上加热促溶，待其他药品已溶， 可将琼脂放入溶化，并不时搅拌，待药品已完全溶化，补充溶
6、化过程中蒸发的水分至所需 培养基的总体积，搅拌均匀； 调节PH：用玻璃棒沾取少许培养基，以PH试纸检测培养基的PH，并用0.1mol/L的 NaOH溶液调整； 将调整好的培养基趁热转入三角瓶内，放入高压锅内进行高压蒸汽灭菌（压力为 1.05kg/cm2 ,121.3，30min） 。灭菌完毕冷却至凝固状态，放入冰箱内备用。1.4 分装及平板接种、培养 将备用的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入高压锅内融化； 用6只灭菌吸管分别吸取6组烧杯中茶水1mL，注入六只盛有9ml无菌水的试管中，做 好标记； 再用上一步骤中的六只吸管一一对应吸取1ml茶水注入培养皿中，每组共做两个平 板培养基，做好标记； 另取六
7、只经过灭菌的吸管，分别吸取浓度为10-1的茶水注入培养皿中，每组仍然做 两个培养基，再取两个空的灭菌培养皿，取一只未用吸管分别注入1mL无菌水作空白对照， 做好标记； 每个平皿分别倾注约15mL已溶化并冷却到45左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，并 立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀； 培养基凝固后，倒置于37保温箱中，培养24h，进行菌落计数。 （两个平板的平均 菌落数即为1mL水样或稀释浓度的细菌总数）2 2、试验结果、试验结果2.1茶水在室内有蒸发，其剩余量如表1所示：泡茶时间第一天第二天第三天第四天第五天第六天茶水剩余量/ml190200210220235245 表1 2.2菌落
8、数如表2所示：泡茶时间第一天第二天第三天第四天第五天第六天无菌水平 板12121212121212 菌落数2430721004028102212144000 平均菌落数27863421132 稀释浓度/10-1013141848204202 平均菌落数6.5166131 细菌总数/mL278634211320 烧杯内菌数 （51301720071404620305549003单位菌数 茶水剩余量） 表22.3细菌数量与时间的关系如表3、4所示：第一天第二天第三天第四天第五天第六天0102030405060708090时间细菌总数/ml表3：细菌总数（ml-1）与时间的关系第一天第二天第三天第四
9、天第五天第六天020004000600080001000012000140001600018000烧杯内细菌总数时间表4：烧杯内细菌总数与时间的关系3 3、分析讨论、分析讨论普通自来水中大肠菌群数约为120个/升，可见隔夜茶确实给腐生细菌提供了一个比较 营养的繁殖场所。从表3、4中可以看出茶水内细菌数在一定时间内确实是随着时间的增长 而增长的，但是第一天泡的茶水细菌总数比第二天的细菌总数少的多除了茶水蒸发之外， 更重要的原因应该是茶水内营养物质的改变导致茶水内的环境不再适合细菌的生长引起细 菌死亡。对此原因还应该进行进一步的探究。 研究表明，当沏好的茶水放置几个小时后，不仅味道会变差，失去原有
10、的香味，而且 茶水呈褐色，并变得浑浊，使茶叶中的维生素C和B族都遭到破坏。另外，茶叶中含有一种 涩味的鞣酸，在高温的作用下，鞣酸会过多地溶解出来，增加了茶水的苦涩味，而且还会4破坏茶水中的维生素等成分。如茶水搁置过夜，茶叶中的咖啡因积聚过多，对人体会产生 刺激作用。本实验也证实了“隔夜茶”宜滋生腐生细菌。所以，不能饮用隔夜的茶。参考文献：1 张亚平，胡文革，李扬.微生物学实验指导M.石河子：石河子大学，2010:126.2 王福先.隔夜茶是否还能饮用J.中国健康月刊，1998（07）:42.3 喝茶十不宜J.长寿，2000（06）：39.4 戴农.饮茶留意时间差J.农村财务会计，1997（09）：59.5 罗龙新.液体茶贮藏期的品质变化J.中国农业科学院茶叶研究所，1996（04）：11-13.
