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1、制备手性色谱拆分氧氟沙星光学异构体*曾苏宗俭潘莉王 似菊（ 浙江医科大学药物分析教研室杭州3 1 0 0 3 1 ）提要 利用配合交换原理， 采用手性流动相添加剂方法， 在反相高效液相色谱 R P - H P L C制备柱上， 拆分了氧 氟沙星的两种对映体。 流动相组成为手性添加剂 溶液（ 含6 m m o l / L L - 苯丙氨酸 和3 m m o l / L C U S O 4 - C H 3 O H 8 4 1 6， 流速4 . 6 m L / m i n紫外检测波长2 9 3 n m。 经提取纯化后， 确 证首先洗脱的 是S - （ 十） - 氧氟沙星， 后一个洗脱的是 R -氧
2、氟沙星。经对映体选择性分析方法测定， 制备获得的两种对映体的光学纯度均大于9。关键词手性高效液相色谱法， 制备色谱， 氧氟沙星， 对映体分离1 前言手性高效液相色谱法（ H P L C ） 用于许多药物光 学异构体的分离和定量测定1 4 ， 但制备手性色谱 仍鲜见于 报道。 氧氟沙星（ ） - 9 - 氟- 3 - 甲 基- 1 0 - 4 -甲 基 - 1 - 哌 哙嗪 基 ） -7 - 氧 -3 -二 氢 - 7H吡 啶 骈 1， ，3 - d e 14 苯骄（嗪- 6 - 羧酸 是一优良 的广谱抗菌药， 其分子结构中） 嗪环上 C 3 位接有一甲基， 因 此具有一个不对称碳原子而产生S
3、- （ 一 - 和 R-（ ） - 两种光学异构体。 为了研究氧氟沙星左旋体及右旋体在体内、 体外代谢和抗菌活性的差异， 需要获取高纯度的两种光学异构体。A r a i 等 5 应用牛血清 白蛋白（ B S A ） 反流提取技术， 部分拆分了氧氟沙星光学异构体， 最后还需要薄层色谱法（ T L C ） 纯化。 本文利用氧氟沙星分子结构中的羧基和其邻位羰基可与金属离子以及 L - - 氨基酸形成三元配位化合物，从而导致 S- （ 一） - 和 R- （ ） - 光学异构体的三元配合物具有不同稳定性这一特点， 采用手性流动相添加剂法， 直接在制备 O D S柱上成功地拆分 了 S -（ 一） -
4、和 R - （ 十） - 氧氟沙星。2 实验部分2 . 1 仪器与试剂L C - 6 A液相色谱仪， S P D - 6 A V UV - V I S分光光度检测器、 C R - 4 A数据处理仪、 S h i m - p a c k P R E P - O D S2 5 c m2 0 m m i . d .， 均为日本岛津公司产品。（ ） - 氧氟沙星（ 9 9 . 6L - 苯丙氨酸（ 色谱纯 2 3 4 . 1 ） ， C u S O 4 A R ， 甲 醇（ 色谱级） ， 其它试剂均为AR级 。2 . 2 色谱条件 流动相： 手性流动相添加剂溶液（ 6 m m o l / L L -
5、苯丙氨酸和3 m m o l / L 硫酸铜， p H 3 . 5- C H 3 O H 8 4 1 6； 流速： 4 . 6 m L / m i n 患 检测波长： 2 9 3 n m。2 . 3 S - （ 一 - 和R - 氧氟 沙星的制备拆分 将（ ） - 氧氟沙星配成 1 5 g / L 微酸溶液， 进样 0 . 5 m L ， 于柱后分别接收两峰洗脱液（ 图 1。将洗脱液置于旋转蒸发仪， 于 4 5 水浴真空除去甲醇， 然 后加入醋酸按至饱和。 用 C H 2 C l2 提取 4 次， 每次 5 0 m L ， 合并有机溶剂提取液， 于4 5 水浴真空浓缩 至少量后， 加无水硫酸
6、钠脱水， 过滤。 滤液于4 5 水 浴真空蒸干， 残渣于五氧化二磷真空干燥器中干燥后， 密闭， 置冰箱中备用。3 结果和讨论3 . 1 S - （ 一） - 和R - ） - 氧氟沙星光学纯度分析将 图 1中两 个峰 的干燥 品配 成水溶 液， 用 P e r in - E lm e r 2 4 1 型自动旋光仪分别测定旋光度，*国家自 然科 学基金和浙江省自 然科学基金资助项目本文收稿 日 期： 1 9 9 5 年 3 月 1 0日， 修回日 期 ： 1 9 9 6 年 3 月 1 2日结果表明： 第一个洗脱峰为 S - （ 一） - ， 第二个峰为 R - ） - 氧 氟沙星。 按 文献
7、1 方法， 以 C L C - O D S 0 . 1 5 m6 m m i . d .为分析柱， 手性流动 相添加剂溶液 甲 醇 8 6 1 4 ） 为流动相， 流速 1 . 1 m L / m in ， 荧光检侧器 x 3 3 0 n m5 0 5 n m 抽取 上 述两 种 光 学异 构体 水溶 液2 0 蘈 L注入H P L C 仪 进 行分 析， 采 用峰 面 积归 一 化法， 计算 得 S - （ 一 - 氧氟沙星和R - ） - 氧氟沙星 的 光学纯度分别为9 9 . 1 49 9 . 2 9 （ 图2。3 . 2 小结 采用本文所建立的手性流动相添加剂 R P - H P L
8、C 制备方法， 运用手性配合交换原理， 以L - 苯丙 氨酸为配合 剂， 铜离子为 配合离子， 可以 在常 规非 手 性固定相O D S 上制备拆 分S - （ 一） - 和R - ） - 氧氟 沙星， 光学纯度均可达到 9 9 以 上。 该法简 便易 行， 适于 推广应用。 本文所建立的 方法， 每次进样可制氧氟沙星 左 旋体和右旋体各3 . 7 5 m g ， 再经分离提取和纯化后， 产率仍可达到7 0 以上。 采用隔一段时间连续进样 的 方式， 可以不断地 获得氧 氟沙星的 左旋和右旋光 学异构体。我们应用相同方法拆分另一含氟喹诺酮类药物洛美沙星， 但没有成功。 可能是洛美沙星分子结构中
9、不对称碳原子距手性配合部位太远之缘故。参考文献 1 曾 苏， 章 立， 刘志 强 药学学报， 1 9 9 42 93 :2 2 3 2曾 苏， 沈向 忠 浙 江医 科 大 半 学 报1 9 9 4 2 352 3 4 3曾 苏 色谱1 9 9 5 1 3 12 1 4 曾 苏 现执 代 应 用 药 学 1 9 9 3 1 0 54 5 A r a i T , K u r o d a H . C h r o m a t o g r a p h i , 1 9 9 13 25 6S e p a r a t i o n o f O f l o x a c i n E n a n t i o m e
10、r s b y U s i n g P r e p a r a t i v e C h i r a l C h r o m a t o g r a p h y Z e n g S u , Z o n g J ia n , P a n L i a n d Wa n g S ij u ( D ep a r t m e n t f P h a r m a c e u t ic a l A n a l y s is , Z h e jn g M e d ic a l U n iv e r s i ty , H a n g z h o u , 3 1 0 0 3 1 )A b s t r a c t O
11、 fl o x a c in , ( ) - 9 - fl u o r o - 3 - m e t h y l - 1 0 - ( 4 - m e t h y l - l - p i p e r a z in y l ) - 7 - o x o - 2 , 3 - d i h y d r o - 7 H - p y r d o ( 1 , 2 , 3 - d e ) - 1 , 4 - b e n z o x a z in e - 6 - c a r b o x y lic a c i d , h a s a n a s y m m e t r ic c e n t e r a t t h e
12、 C p o s i t io n in o x a z n e ri n g . I n t h is p a p e r ,a p r e p a r a t iv e h ig h p e r f o r m a n c e li q u i d c h r o m a t o g r a p h ic ( H P L C ) m e t h o d f o r r e s o lu t io n o f t h e e n a n t io m e r s o f ( ) - o f l o x a c i n u s i n g lig a n d - e x c h a n g e
13、 c h r o m a t o g r a p h y , w it h L - p h e n y la l a n in e - C u ( ) a s a c h ir a l a d d it i v e in m o - b il e p h a s e is p r e s e n t e d. T h e p r e p a r a t iv e c h i r a l H P L C c o n d it io n s w e r e c o l u m n ; S h im - p a c k P R E P - O D S ( 2 5 c m 2 0 m m i . d
14、. ) ; m o b ile p h a s e : 6 m m o l/ L L - p h e n y la la n in e a n d 3 m m o l / L c o p p e r s u l p h a t e c o n t a in in g 1 4 % m e t h a n o l ; fl o w r a t e : 4 . 6 m L / m m; d e t e c t o r : fl u o r e s c e n c e 薳 =3 3 0 n m , 薳 e m = 5 0 5 n m ) . T h e e l u a t e s c o n t a
15、in in g o f lo x a c in e n a n - t io m e r w e r e c o ll e c t e d s e p a r a t e l y . T h e m e t h a n o l w a s r e m o v e d f r o m t h e m o b il e p h a s e in a w a t e r b a t h a t 4 5 u n -d e r v a c u u m a n d t h e r e s i d u e w a s s a t u r a t e d w i t h a m m o n i u m a c
16、 e t a t e . T h e e n a n t i o m e r w a s e x t r a c t e d w i t h m e t h y - le n e c h lo r id e ( 4 5 0 m L ) . T h e o r g a n ic s o l v e n t w a s e v a p o r a t e d t o a s m a ll v o lu m e a t 4 5 u n d e r v a c u u m . A n h y - d r o u s s o d iu m s u lf a t e w a s a d d e d a n d t h e l iq u id w a s t h e n f il te r e d . T h e f ilt r a t e w a s e v a p o r a t e d to d r y n e s s a t 4 5 . T
