医学实验室认可技术要求的关键控制点(pcr专业)

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1、医学实验室认可技术要求的关 键控制点（医学实验室认可技术要求的关 键控制点（PCR专业）专业）沈佐君沈佐君 医疗机构临床实验室管理办法（卫医发医疗机构临床实验室管理办法（卫医发 200673号）号）临床基因扩增检验实验室管理暂行办法（卫医发临床基因扩增检验实验室管理暂行办法（卫医发200210号）号）医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法（卫办医政发 医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法（卫办医政发 2010194号）号）临床基因扩增检验实验室基本设置标准临床基因扩增检验实验室基本设置标准临床基因扩增检验实验室工作导则临床基因扩增检验实验室工作导则ISO15189 准则（准则（CL02）CN

2、ASGL26医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的指南医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的指南参考依据参考依据概述概述 基因体外扩增检验通常称为基因体外扩增检验通常称为PCR检验；检验； 该检验项目是目前我国临床检验项目中 唯一一项需要通过卫生部或省级临床检 验中心现场技术验收合格方可开展临床 检验的技术准入项目。该检验项目是目前我国临床检验项目中 唯一一项需要通过卫生部或省级临床检 验中心现场技术验收合格方可开展临床 检验的技术准入项目。概述概述对实验室的要求：对实验室的要求： 实验室验收合格证书 人员上岗证书 实验室的布局 仪器设备要求 质量手册、管理程序文件、操作程

3、序文 件、作业指导书、记录表格等1 范围本文件规定了1 范围本文件规定了CNAS对医学实验室基因扩增检验领域的认可要 求，包括遗传学检验、病原体检验和病理学检查等领域涉及 的基因扩增检验。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引 用文件仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用 文件，其最新版本（包括修改单）适用于本文件。对医学实验室基因扩增检验领域的认可要 求，包括遗传学检验、病原体检验和病理学检查等领域涉及 的基因扩增检验。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引 用文件仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用 文件，其

4、最新版本（包括修改单）适用于本文件。GB/T 204682006临床实验室定量测定室内质量控制指南卫办医政发临床实验室定量测定室内质量控制指南卫办医政发2010194号医疗机构临床基因扩增管理办 法号医疗机构临床基因扩增管理办 法CNASRL02能力验证规则能力验证规则4 管理要求4 管理要求 4.1.1 从事基于组织/细胞形态学基础项目检 测的医学实验室，应具有病理学诊断资 质。5 技术要求5 技术要求 5.1 人员人员 5.1.2 基因扩增实验室（以下简称实验室）操作人员应经 过有资质的培训机构培训合格取得上岗证后方可上岗。 5.1.4实验室负责人至少应具有以下资格：中级职称，医 学相关专

5、业背景，二年以上基因扩增工作经验。 5.1.11 实验室应制定员工能力评审的内容和方法，每年 评审员工的工作能力；至少每半年评审新员工工作能 力，并保存胜任的证据。当职责变更时，应有政策规定 对员工进行再培训和再评审。没有通过评审的人员应经 再培训和再评审，合格后才可继续上岗，并记录。 5.1.13 实验室应提供工作人员对患者隐私及结果保密的 声明及签字。5.1 人 员 操作人员考核的主要内容：操作人员考核的主要内容：标本接收与处理：流程和标本是否合格的要点试剂耗材质检：为何要质检、如何做核酸提取：原理和操作技术要领防污染：措施和意识质量控制：程序和实际运行情况、失控的分析处理结果分析与判断：

6、结果审核、报告发放标本接收与处理：流程和标本是否合格的要点试剂耗材质检：为何要质检、如何做核酸提取：原理和操作技术要领防污染：措施和意识质量控制：程序和实际运行情况、失控的分析处理结果分析与判断：结果审核、报告发放5.1 人 员 在现场评审时要求安排人员比对：在现场评审时要求安排人员比对：临床基因扩增检验的操作主要是标本处理中的核酸提取步骤，这其中所涉及的又主要是加样器的使用，尽管操作简单，但由于均为微量操作，最后扩增放大，因此要获得稳定可靠的测定结果，操作人员需要一定的专业技术知识和经验。临床基因扩增检验的操作主要是标本处理中的核酸提取步骤，这其中所涉及的又主要是加样器的使用，尽管操作简单，

7、但由于均为微量操作，最后扩增放大，因此要获得稳定可靠的测定结果，操作人员需要一定的专业技术知识和经验。5.1 人 员在现场安排实验时应考虑到的问题：在现场安排实验时应考虑到的问题： 标本数量：一般标本数量：一般5个；个； 标本要求：一份阴性，其余标本要求：一份阴性，其余4份一般要尽可能涵盖高、中、低、临界等浓 度差，了解线性范围。份一般要尽可能涵盖高、中、低、临界等浓 度差，了解线性范围。5.2 设施和环境条件5.2 设施和环境条件(3-1)5.2.1实验室原则上分四个分隔开的工作区域： 试剂贮存和准备区； 标本制备区； 扩增区； 扩增产物分析区。 如使用自动分析仪（扩增产物闭管检测），（c）

8、和（d）区可 合并。 上述每个区域应有充分空间以保证： 样本处置符合分析前、后样本分区放置； 仪器放置符合维修和操作要求； 标本制备区放置生物安全柜、离心机和冰箱等仪器设备； 打印检验报告时交叉污染的控制。5.2 设施和环境条件5.2 设施和环境条件(3-2) 5.2.2 实验室应实施安全风险评估，应针对各工作区 制定针对性的防护措施及合适的警告。 5.2.4 实验室各分区应配置固定和移动紫外线灯，波 长为254nm，照射时离实验台的高度为6090cm。 标本处理区应配置二级生物安全柜。 5.2.5 实验室应依据所用分析设备和实验过程对环境 温、湿度的要求，制定实验室温、湿度控制的目 标，有效

9、地实施控制，并提供温、湿度监控记录。 实验室应依据用途（如：RNA检测用水），制定适 宜的水质标准（如：应除RNase），并定期检测。5.2 设施和环境条件5.2 设施和环境条件(3-3)5.2.6 基因扩增检验各工作区域应有明确的标记，不同工作区域内的设备、物品不能混用。进入各工作区域应按照单一方向进行， 即试剂贮存和准备区标本制备区扩增区扩增产物分析区。不同的工作区域宜使用不同的工作服（如不同的颜色）。工作人 员离开各工作区域时，不能将工作服带出。5.2.7 实验室应有限制进入的标志和措施。5.2.9 实验室应有足够的、温度适宜的储存空间（如冰箱），用以保存临床样品和试剂，设置目标温度和允

10、许范围，并记录。实验 室应有温度失控时的处理措施，并记录。5.2.10 实验室应有经过培训的内务管理人员（如保洁人员），实验室应有地面、台面的维护、清洁和消毒计划及相关的记录。危险物品的存放及处置应遵守相关法规，并应有相关的使用记录。5.3 实验室设备5.3 实验室设备(3-1)5.3.1 实验室应制定设备、试剂和耗材的采购、验收等管理程 序，应有根据工作量保证实验持续进行的试剂/耗材订购计划， 以及试剂/耗材最低贮存量要求。 基因扩增实验室如从事RNA的检测，应具有高速冷冻离心机。 在使用PCRELISA方法检测扩增产物时，应配置洗板机并使用洗 板机洗板。一次性的加样器吸头应带有滤芯。 5.

11、3.2 强检设备按国家相关要求执行，应进行外部校准的设备， 可按制造商校准程序进行。 对分析设备校准的基本项目至少应包括：加样系统、检测系 统、温控系统。应内部校准的辅助设备，实验室应制定内部校 准程序。 应定期对PCR仪、加样器、温度计和恒温设备进行校准。5.3 实验室设备5.3 实验室设备(3-2)5.3.4 实验室应保存与检验质量有关的设备管理记录。实验室应提供对 试剂和耗材检查、接收或拒绝、贮存和使用的记录，包括批号、效 期、实验室接收日期、接收人和使用日期等。试剂耗材的质检记录至少包括：外观检查：肉眼可看出的，如包装完整性；性能检测：通过实验才能判断的，如耗材的抑制物、试剂批间的差异

12、 （应涵盖低浓度和高浓度，如安排过去检测过的临界阳性的患者标本 加上病理定性检查的部分）。 对于试剂性能质检记录，应能反映该批试剂：1）核酸提取效率，2） 核酸扩增效率。商品试剂记录包括：使用效期和启用日期。自配试剂记录包括：试剂名称或成分；规格；储存要求；制备或复融 的日期；有效期；配制人。试剂质检试剂质检强调采用强调采用患者患者标本进行试剂质检的意义：标本进行试剂质检的意义： PCR实验时两个关键步骤：（实验时两个关键步骤：（1）从标本 中提取核酸；（）从标本 中提取核酸；（2）提取核酸的扩增。）提取核酸的扩增。 商品化的质控品和标准曲线的结果良 好，并非能反映提取试剂的质量。商品化的质控

13、品和标准曲线的结果良 好，并非能反映提取试剂的质量。5.3 实验室设备5.3 实验室设备(3-3) 5.3.6 PCR扩增仪应配备稳压电源。 5.3.7 设备故障修复后，实验室应对该设备性能进行验 证。 实验室应首先分析故障原因，如果设备故障影响了方法 学性能，可通过以下合适的方式进行相关的检测、验证 （适用于定量项目）： 可校准的项目结果超出允许范围时，实施校准； 质控品检测结果应在质控范围内； 与其他仪器的检测结果比较，偏差符合附录A的要求； 使用留样再测结果进行判别，偏差符合附录A的要求， 并评价故障对之前检验结果的影响。5.4 检验前程序5.4 检验前程序 5.4.3 b) 样品采集手

14、册中应规定基因扩增检验标本留取 的具体要求：如高压或Rnase灭活的洁净试管、抗凝管 正确使用等。一般全血和骨髓标本应进行抗凝处理， EDTA和枸橼酸盐为首选抗凝剂，不使用肝素抗凝（核酸 提取采用吸附法而不受肝素干扰时除外）；用于RNA （如HCV RNA）扩增检测的血标本宜进行抗凝处理，并 尽快（3小时内）分离血浆，以避免RNA的降解；如未 作抗凝处理，则宜在抽血后1小时内分离血清；分泌 物、拭子、肿瘤组织等标本留取的注意事项等。 5.4.10 基于组织/细胞学形态基础的检测项目应由具有病 理诊断资质的医师确认标本是否满足检测要求。5.5 检验程序5.5 检验程序 5.5.1 如果使用内部程

15、序，如自建检测系统， 应有程序评估并确认分析性能符合预期用途。 对于定量检测项目内容应至少包括正确度、精 密度、可报告范围、生物参考区间等。 5.5.2实验室应在应用于医学检验之前验证所使 用的检验方法和程序的分析性能，对于定量检 测项目内容至少包括正确度、精密度、可报告 （或线性）范围等。对于定性检测项目内容应 包括灵敏度、特异性或符合率及重复性。5.6 检验程序的质量保证5.6 检验程序的质量保证(4-1)5.6.1 实验室应制定室内质量控制程序，可参照GB/T 20468 2006临床实验室定量测定室内质量控制指南。质量控制程序中应有针对核酸检测中防污染的具体措施。质控图应包括质控结果、

16、质控品名称、浓度、批号和有效 期、质控图的中心线和控制界线、分析仪器名称和唯一标 识、方法学名称、检验项目名称、试剂和校准品批号、每个 数据点的日期和时间、干扰行为的记录、质控人员及审核人 员的签字、失控时的分析处理程序和纠正措施等。对于定性检测项目，每次实验应设置阴性、弱阳性和阳性质 控。质控规则应确保试验的稳定性和检验结果的可靠性。实验室应检查失控对之前检验的影响。5.6 检验程序的质量保证5.6 检验程序的质量保证(4-2) 5.6.3 对于定量检测项目，使用配套分析系统时，实验室 可使用制造商提供的溯源性文件。 使用非配套分析系统时，实验室应采用有证参考物质、 正确度控制品等进行正确度验证或与经确认