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1、第四军医大学硕士学位论文缩略语表缩略词A英文全称Anestrus中文全称动情间期cAMPCyclic monophosphateadenosine环磷酸腺苷CGCOCEFITCGVGVBDhCGIVMHTFIVFLCAMMMPFPPB1Cortical granuleCumulus-oocyte complexsEstrusFluorescein isothiocyanateGerminal vesicleGerminal vesicle breakdownHuman chorionic gonadotrophinIn vitro maturationHuman tubal fluidIn v
2、itro fertilizationLens culinaris agglutininMetaestrusMetaphase Mitosis promoting factorProestrusThe first polar body皮质颗粒卵丘-卵母细胞复合 体动情期异硫氰荧光素生殖泡生殖泡破裂人绒毛膜促性腺激 素体外成熟合成人输卵管液体外受精扁豆凝集素动情后期第二次减数分裂中 期有丝分裂促进因子动情前期第一极体1第四军医大学硕士学位论文PMSGPNAPOPsZPPregnant mare serum gonadotrophinPeanut agglutininpersistent organ
3、ic pollutantsZona pellucida孕马血清促性腺激 素花生四烯酸持久性有机污染物透明带2第四军医大学硕士学位论文甲氧滴滴涕对小鼠卵母细胞体外成熟和体外受精的毒性作用硕 士 研 究 生：高 苗导师：陈必良 教授第四军医大学西京医院妇产科，西安 710032中文摘要甲氧滴滴涕(methoxychlor,MXC)是一种替代滴滴涕的有机氯杀虫剂，因其杀虫效果明显，生物毒性相对较低，在许多国家得到广泛应用。但由于大规模的使用，加之甲氧滴滴涕所具有难降解性、生物聚积性和沿食物链传递的特性，使其所造成的环境污染已遍及全球生态系统。在土壤、河流、动植物体内、人体体液、甚至孕妇血液、胎盘、脐
4、血、新生儿体内、乳汁中都检测到了甲氧滴滴涕。动物实验研究发现MXC具有不孕、流产、诱导卵泡闭锁等生殖毒性。因此，研究MXC对生殖细胞的影响具有重要意义。而有关MXC对体外卵母细胞成熟和受精及胚胎发育的影响的报道却很少。我们的研究以昆明白小鼠未成熟卵母细胞为研究对象，采用体外成熟、体外受精及早期胚胎发育培养的方法研究不同剂量甲氧滴滴涕对卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育的影响。3第四军医大学硕士学位论文研究目的：1 研究 MXC 对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的毒性作用2. 研究 MXC 对小鼠成熟卵母细胞体外受精的毒性作用3. 研究 MXC 对小鼠早期胚胎发育的影响第一部分甲氧滴滴涕对小鼠卵母细胞
5、体外成熟的毒性作用研究方法：1、超促排卵得到未成熟小鼠卵母细胞。实验组 MXC 浓度分别为 7.25，14.5，29g/mL；对照组直接用 M2 培养液培养，各组培养时间均为 24 h。培养过程中在倒置显微镜下观察各组生发卵泡破裂(GVBD)和第一极体(PB1) 的形成情况,出现 PB1 的卵母细胞视为核成熟（M期）。2、激光共聚焦观察有丝分裂纺锤体的形成。3、将出现 PB1 的卵母细胞进行荧光染色，观察皮质颗粒的分布，判断核成熟卵母细胞胞质成熟情况。4、镜下观察 MXC 对卵丘扩展的影响。研究结果：1、培养 24 h 时，甲氧滴滴涕各处理组与对照组卵母细胞 GVBD 发生率差别无统计学意义(
6、P0.05)；培养过程中 GVBD 发生实验组较同期对照组也没有明显延迟。但是成熟率却从 71.2%（对照组）逐渐降低至 22%（29g/mL MXC 组），7.25g/mL MXC 组（52.8%）和 14.5g/mL MXC 组（44.4%）与对照组比较差别也有统计学意义。2、实验组较对照组 M期纺锤体星体变小。3、M期卵母细胞皮质颗粒呈单层状排布于细胞膜下的比例实验组和对照组差异不显著(P0.05)。MXC 对核成熟的卵母细胞胞质成熟影响不明显。4、MXC能抑制卵丘扩展，且随着 MXC 浓度的升高，卵丘扩展程度明显减弱。研究结论：1、甲氧滴滴涕对小鼠卵母细胞的毒性作用，通过抑制卵母细胞胞
7、核成熟，使小鼠卵母细胞成熟率明显下降，从而使母体的受孕能力下降，导致不孕。2、甲氧滴滴涕可直接作用于卵母细胞，4第四军医大学硕士学位论文使卵母细胞有丝分裂纺锤体形成异常，从而抑制卵母细胞核的成熟。3、甲氧滴滴涕可能通过抑制卵丘细胞的扩展，来影响后续胚胎发育，造成流产等。但对皮质颗粒的分布影响不明显，即甲氧滴滴涕不能抑制核成熟卵母细胞的胞质成熟。第二部分甲氧滴滴涕对小鼠卵母细胞体外受精和早期胚胎发育的影响研究方法：1、将 7.25 和 14.5g/mL MXC 组核成熟的小鼠卵母细胞行体外受精，观察卵母细胞的受精能力。2、将受精卵吸出培养，每日在显微镜下观察胚胎发育情况，分析受精卵的 2-细胞形
8、成率、4-细胞形成率、8-细胞形成率、桑椹胚率、囊胚率和胚胎孵化率。3、选择形态较好的囊胚进行胚胎细胞染色计数。研究结果： 1、7.25g/mL MXC 组与对照组小鼠受精卵的受精率，2-细胞形成率、4-细胞形成率、8-细胞形成率差别无统计学意义(P0.05)；14.5g/mL MXC 组与对照组小鼠卵母细胞的受精率，2-细胞形成率、4-细胞形成率差别不明显，但 8-细胞期形成率在两组间差异显著（P0.05)。研究结论：虽然甲氧滴滴涕对体外成熟的小鼠卵母细胞的受精率、2-细胞形成率的影响不明显，但是却能显著降低囊胚的形成率和鼠胚孵化率，尤其是鼠胚孵化率下降明显，从而导致流产和不良妊娠结局。5第
9、四军医大学硕士学位论文关键词甲氧滴滴涕，卵母细胞，生发泡破裂，体外成熟，体外受 精，生殖发育毒性6第四军医大学硕士学位论文The toxicity of methoxychlor on in vitromaturation and fertilization of mouse oocytesCandidate for master：Gao MiaoTutor：Supervisor：Prof. Chen Bi-LiangProf. Ma Xiang-DongDepartment of Obstetrics and Gynaecology, Xijing Hospital, The FourthM
10、ilitry University, Xian ChinaAbstractMethoxychlor (MXC) is an organochlorine pesticide, which iswidely sprayed on fruits, vegetables, forage crops, and home gardens toprevent insects from attacking them. MXC is considered to be analternative to dichloro- diphenyl-trichloroethane (DDT) due to its low
11、ertoxicity to mammals and its shorter half-life. Methoxychlor was detectedin soil, river, animals and plants even in pregnant women，placenta，cordblood and newborn infant. Methoxychlor can disrupt function of maletesticulus and epididymis, reduce spermatozoa; methoxychlor can alsomake ovarian follicl
12、e atresia, uterus protein expression changed.Therefore, in our present study, we selected an in vitro system in whichwe evaluated both oocyte maturation and postfertilization development.The aim of this study was to investigate the effect of different doses ofMethoxychlor on in vitro maturation, fer
13、tilization, and post fertilizationdevelopment of mouse oocytes.7第四军医大学硕士学位论文AIM: 1 To investigate the toxicity of Methoxychlor on in vitromaturation of mouse oocytes.2 To investigate the toxicity of Methoxychlor on in vitrofertilization of mouse oocytes.3 To investigate the toxicity of Methoxychlor
14、on mouse embryosculture.Part 1 The toxicity of Methoxychlor on in vitro maturationof mouse oocytes.METHODS: 1、Immature oocytes were retrieved from mouse ovarianstimulated by PMSG. The oocyte in experimental groups were cultured inM2 medium with 7.25，14.5，29g/mL MXC and the oocytes in theunexposed co
15、ntrol group were cultured in M2 medium for 24 h. Germinalvesicle breakdown and the first polar body extrusion were observed withinvert microscope during maturation.When the first polar body was foundin the perivitelline space, the oocytes were classified as nuclearmaturation (M). 2、Laser scanning co
16、nfocal microscope(LSCM) wasused to examine the meiotic spindle. 3、Oocyte extructed the first polarbody were stained with Fluorescein isothiocyanate- peanut agglutinin toevaluate Cortical granule with Laser confocal microscopy for assesscytoplasmic maturation. 4、 the intensity of cumulus expansion wasestimated with invert microscope.RESULTS: 1、 After 24 h of culture, the incidence of GVBD inexperimental group occurred normally with the same efficiency whencompared to the unexpos
