实验一 植物细胞的活体染色及死活鉴定 原理 活体染色是介于活观察和固定、 切片染色之间的一种方法， 是选用某些无毒或毒性较小 的染色剂，显示出细胞内某些构造的存在，而不影响细胞的生命活动也不产生任何物理、化 学变化以致引起细胞死亡的方法 中性红是常用的活性染料之一，又是一种 pH 指示剂，变色范围在 pH6.48.0 之间（由 红变黄） ，在酸性条件下中性红的解离度很强，带色的阳离子呈樱桃红色，在 pH7 以上，它 不解离而以分子态溶解于水呈橙黄色的溶液 生活的植物细胞，其含水分的纤维素细胞壁上往往有羟基，泡液呈酸性如果用低于泡 液 pH 的缓冲液配制的中性红溶液进行活染时，由于中性红已成解离态，其带色的阳离子易 被吸附在细胞壁上使壁显红色， 而生活原生质和液泡均无色； 如果在中性或微碱性的液体环 境中，中性红分子便有进入液泡并呈解离形式的趋势，当中性红分子进入偏酸的泡液处，解 离出带色的阳离子而呈玫瑰红色，累积在液泡里，这时液泡显色而原生质和细胞壁不着色； 如果是死细胞，原生质体凝固并丧失半透性，桔红色的中性红分子被吸附在原生质表面，表 现为细胞核和细胞质着色，而液泡不着色。
可根据这些现象鉴定细胞死活 材料与设备 洋葱鳞茎、大葱叶基部分、小麦叶片等 显微镜一台、小培养皿一套、载玻片和盖玻片各 2 片、刀片 1 片、尖头镊子、粗滤纸和 火柴 试剂试剂 0.03％中性红溶液：0.3g 中性红溶于 1000ml 蒸馏水中 实验步骤实验步骤 1．取洋葱的内层幼嫩鳞片，用刀片在鳞片内侧纵横切割成 0.5cm 2 的小块，用尖头镊子 将内表皮小块轻轻撕下， 置于载玻片上， 滴加清水后盖上盖玻片， 在较暗的视野下进行镜检 仔细辨认成熟细胞的各个部分：①透明而界限清晰的细胞壁②有颗粒状结构的原生质③ 含有泡液的液泡若用小麦叶片为材料时，可采 1 片叶片，将叶背面朝上平铺在载玻片上， 再将此载玻片放入盛有少量清水的培养皿内， 用左手将叶片按平， 右手用刀片从一个方向轻 轻刮去下表皮和叶肉部分，只留下透明的一层上表皮细胞，然后将其切成约 1cm 2 的小块 2．将制成的表皮小块放入盛有 0.03％中性红溶液的小培养皿中染色 5－10 分钟，然后 取出浸入自来水中漂洗 10 分钟，选其中染色均匀的材料小块进行镜检，仔细观察经活体染 色后的细胞各部分：①液泡部分（稍有收缩）被中性红染成均匀的玫瑰红色。
②原生质及细 胞壁仍为透明无色这是由于自来水呈中偏碱性 3．将用中性红染色后的材料小块取出用蒸馏水漂洗后，在显微镜下观察，由于蒸馏水 偏酸性， 当进行染色后的活细胞用蒸馏水漂洗时， 解离的中性红带色阳离子便吸附在细胞壁 的－0H 上，因此细胞壁呈现红色而原生质体和液泡均不着色 4．在上述制片中寻找个别死细胞，可见原生质体被染成不均匀的橙黄色，另取制片放 在载玻片上在酒精灯火焰上微微加热使细胞致死， 在显微镜下观察可见死细胞内原生质体凝 结成不均匀的凝胶状，它与细胞核均被染成桔红色。