《两种异基因造血干细胞移植后嵌合体检测方法的建立和对照研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《两种异基因造血干细胞移植后嵌合体检测方法的建立和对照研究（97页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国人民解放军军医进修学院 中国人民解放军总医院博士学位论主军医进修学院研究生学位论文原创性声明秉承我院“敬业、勤裔、求实、剑新”的学风，本入声明；掰量交的论文是我本人在导静指导下避行熬研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特舅9 淼珏酥注帮致谢的地方掰，论文中不包含任穗英戆个人或集俸已经发袭戏撰写过的研究成果，墩不含为获褥我院或其德教育机= l 鸯的学位及证书两使弼过的率季料，对本文躺研究侔出赞献的个人或集体，均已在文中傲了明确的说明并裘示谢意。审请学馕论文与资辩若有不实之懿，本人承担一切稿关爨镪。论文馋卷签名：s r - - , s 唇翻麓：r 。j 。钟指导教烀签名：巾日期：b ，
2、、，。丫军医进修学院研究生学位论文版权使用授权书本人傈证毕照离院藤，发表论文躐使用论文工作成果时署名慧饺为军鼷遴修学院或解放军总医貌。学院枣权保鼹并向国家奄笑部门或枫构邀交论文原件、复印 牛和电子敝本，可以采用影印、缩印、扫攘或其它手段保存论文甄供被蠢阕和稽澜。学院哥以公布学僚论文的全部或部分内容( 保密涎容除外) 。论文作者签名：拳5 唇日期：。譬F 卅瓣溯签名。一D 嗍一丫军医避修学院健 论文缩貉语RD蠢震CC CD GR G 王ER F L PV N T RS T RS N pP C RD _ N AP A G 嚣C EB 跚P B S C TH S C T中英文缩略语索弓l英文金称r
3、e c i p i e n td o n o rm i x e dc l a i m 幽s mc o m p l e t ec h i m e r i s md o n o rg e n o t y p er e c i p i e n tg e n o t y p eh e m a t o l o g i ce n g r a R m e n tr e s t r i c t i o nf r a g m e n tl e n g t hp o l y m o r p h i s m中文全称受者供者混含嵌合体完全嵌含俸供者基因溅受嚣基因掇造盎熏建隈翎性片叛长度多悉性v a r i a b l
4、 en u m b e rt a n d e mr e p e a t霹变数秘串联羹复序列s h o r tt a n d e mr e p e a t短串连重复序列s i n g l en u c l e o t i d ep o l y m o r p h i s m革核蘸酸多态性p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n聚会酶链反应d e o x y r i b o n u c l e i ca c i d 脱戴核糖核酸p o l y a c r y l a m i d eg e le l e c t r o p h o r e s i s 浆
5、璃烯酰胺凝胶电泳c a p i l l a r ye l e e t r o p h o r e s i s龟缡管电泳b o n em a r r o wt r a n s p l a n t a t i o n骨髓移植p e r i p h e r a lb l o o ds t e mc e l l辨髑血千细胞移攘t r a n s p l a n t a t i o nh e m a t o p o i e t i es t e mc e l l造斑予细腿移楗t r a n s p l a n t a t i o n2军医避格学院博一 ：论文缩略语A p B S C TG V H DM
6、B 彳A M LA L LC Re M Le pA pB CM D SN 差LD 王le v联1 羞B 髓岭F l S HM MI B M T RM R D英文全称中文全称a u t op e r i p h e r a lb l o o ds t e mc e l l 自体外躅敷于缨腿移植t r a n 酬l a n t a t i o ng r a f tv e r s u sh o s td i s e a s 时u n r e l a t e db o n em a r r o wt r a n s p l a n t a t i o na c u t em y e l o b l a
7、 s t i cl e u k e m i aa c u t el y m p o b l a s t i cl e u k e m i ac o m p l e t er e m i s s i o nc h r o n i cm y e l o g e n o u sl e u k e m i ac h r o n i cp h a s ea c c e r l a t ep h a s eb l a s t i cc r i s i sm y e l o d y s p l a s t i cs y n d r o m en o nH o d g i nl y m p h o m ad
8、o n o rl y m p h o c y t ei n f u s i o nc y c l o p h o s p h a m i d ef l u d a r a b i n eb u s u l f a nb a s ep a i rf l u o r e s c e n c ei ns i t uh y b r i d i z a t i o nm u l t i p l em y e l o m aI n t e r n a t i o n a lB M Tr e g i s t e r ym i n i m a lr e s i d u a ld i s e a s e移檀物抗
9、宿主瘸无瞧缘关系嚣髓移穗急瞧髓窳蠢瞧瘸急性瀑罄缎簸自斑瘸究众缓解幔瞧髓系盎斑瘸馕燃期搬逮麓惫变麓骨髓增生弊常综合癌嚣霍奇鑫涝巴瘤供者淋爨缨腿输注环磷酰胺褥达拉宾篷消安碱基对荧光艨位杂交多发性鸯髓瘴闵黼骨熬移褴遴记缎微小残留瘸军医进修学院博士论文两种异基因遣盘千细艟移榱最嵌余体检测方法的建立翻对照研究中文摘要异基因逢血卞细胞移植( a l l o - H S C T ) 是霹霹许多恶槛血液嫡和一糖非恶性疾病的童要治疗手段，但疾病的复发仍是影响a l l o H S C T 效暴的主要艨辫。成功的移植是一个复杂的过程，移植后区分遣血细胞是采潭于供者逊怒受者很重要，对于临床判麟建否援入、疾嫡复发以茂
10、干预挂免疫治疗具有撩导意义。移棱后嵌合体的梭澳4 有多种方法，鹫前常用馥是建立在D N A 多态性基础上的P C R 方法。其申利弼短串连重复序列( S T R ) 以及单核苷酸多态性( S N P ) 等进行嵌合体的徐测已成为研究的热点。蔺外羁前以荧光禄记S T R 释为检测嵌合体的童要方法，雨馥内开展嵌合体检最4 的研究是在近丸每，多以S T R 硝酸银染色法为主。文献对予速两种检测方法的敏感性报道举一，南美于速两种方法的检测敏感蛙、准确挂茨结果稳定幢方面的对照研究报道极少。本研究以此为基础，建立了S T R 银染和荧竞橼记多莺S T R 全岛动毛细管电泳褥葶孛硷测移撩羼嵌舍状态的方法，并
11、藏用到游庆。对比两释验溪方法的敏感撼、准确性，以选择更好的方法为t 临床服务。并通过移棱詹嵌合俸动态监测结果与临床病程避展进行汜较，研究嵌舍体检测方法的实髑性。方法：( 1 ) 建童S T R - P C R 缝合硝酸银染氛埝测嵌合俸的方法。根据美国C O D I S 数据库，选择5 令具有离度多态幔S T R 攮点和陆潮谊点，设计并合成其萼孝异性引物，经P C R 扩增、变性聚雨烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染龟。詹通过凝胶成像分析软伟进行嵌合傣的捡溅。( 2 ) 对2 0 0 2 每9 詹耍2 0 0 5 年l 露农解放拳总医i 兜行秀基弱造赢予细胞移植的4 6 倒患赣进行嵌合体的动态监测。( 3
12、 )建立焚兜标记多重S T R 毛细喾电泳检测嵌合钵的方法。利用A B I 公司的4P r o f il e rp l u s 个俸识别试弃j 盒进行荧光标记多重S T R 扩增，扩增产物经A B I3 10 遗传分析仪透行套自动毛细管岛动电泳，数据经G e n e S c a n 和G e n o t y p e r避行自动分析，烬据供受者峰蕊积比值进行嵌合体的计算。( 4 ) 对上述4 6 倒患者中的3 0 铡采用毛细管电泳法动态燕濯嵌合傣的变化。( 5 ) 对两砖徐测方法的敏感性、稳定性以及检浸4 结暴等进行比较。( 6 ) 对嵌合体的动态蕊测与临床嫡程发展及转归进行比较，研究嵌合体检测
13、穷法的实用性。结暴表明：( 1 ) 两葶孛方法体， 模拟混合样本标准绱线均溅示扩增前供者D N A 含蚤薯分比与扩增詹供受者峰蕊积比值莹蠢线捆荚，霹此都可用于嵌合体的检测，但毛细管法的相关性更好。( 2 ) 银染法混合样本申能捡出的D N A最小含量百分比是5 1 0 ，2 5 雒1 反应体系中最小捡鼗模板量楚5 n g ；荧光标记多蘩S T R 毛缀管电泳法混合样本中能检虫的D N A 最小含量百分比是2 5 5 ，5 0 “i 反应镶系中能检出的最小模板量是0 0 5 n g 。( 3 ) 两种硷测旁法的嵌合体动态鼗测结黎其宥直线相美挂，馁毛细管电泳法准确挂及灵敏度均高于银染法。( ) 嵌
14、含体的动态攘测结装基本与临床发展及谤归秘符，对于褡床判断疾病状态及采取治癃措施有糍导意义。结论：( 1 ) S T R 银染法和荧兜标记多重S T R 毛细管电漆法都肾用予嵌合体的检测，但毛细管法的准确性和灵敏度要明显高于银染法。( 2 ) 银染法对一些微量嵌合舔的检测结暴欠往，而毛细管电泳法检潮结果准确、簟靠，能够为临床提供更好的服务。( 3 ) 嵌合俸动态监测结恭与临床病程发展及祷归相符，辫此作为舟基因造血千细胞移植詹植入状态评价及判断痰病复发、采取干预撼治疗的理论基础是可靠的。美键词：造血予细胞移植，异基鼹，短串逢重复序列，嵌念体，硝酸银染色，毛细管电泳军隧进修学院裤士论文T h ee
15、s t a b l i s h m e n ta n dc o n t r a s tr e s e a r c ho f t w od i f f e r e n tm e t h o d sf o rc h i m e r i s mt e s t i n ga f t e ra l l o g e n e i cs t e mc e l lt r a n s p l a n t a t i o nA b s t r a c tA l l o g e n e i es t e mc e l lt r a n s p l a n t a t i o ni st h em a i nt r e
16、 a t m e n to fc h o i c ef o rm a n yh e m a t o l o g i c a lm a l i g n a n c i e s ，a sw e l la ss o m en o m u a l i g n a n th e m a t o l o g i c a ld i s o r d e r s ，b u td i s e a S er e l a p s ei ss t i l lt h em o s ts i g n i f i c a n to b s t a c l et oa l l o H S C S u c c e s s f u lt r a n s p l a n t a t i o ni sac o m p l e xp r o c e s s ，i ti si m p o r t a n tt od i s t i n g u i s hb e t w e e nh o s ta n dd o n o ro r i g i no fh e m a t
