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1、即用型即用型SABCSABC免疫组化染色试剂盒使用说明书产品编号： SA1020小鼠/兔IgG(适于一抗为小鼠单克隆和兔多克隆抗体)SA1021小鼠IgG(适于一抗为小鼠IgG 类单克隆抗体) SA1022兔IgG(适于一抗为兔多克隆抗体) SA1026小鼠IgM(适于一抗为小鼠IgM 类单克隆抗体)试剂的保存：4 4可保存一年，应避免冷冻。工作原理SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉 亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。同亲和素一样，对生物素分子有极 高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素的等电点为IP10.0-10
2、.5,在一般缓 冲 液中带阳电荷，对组织和细胞的阴离子集团有较强的亲和力，因而基于亲和素的免疫组化 方 法有时会有严重的背景问题。而链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.06.5，对组织和细胞 的 非特异吸附很低，因而基于链霉亲和素的免疫组化方法背景往往很低。SABC 即 StreptAvidinBiotin Complex,。根据研究，SABC 大约可形成一百个左右的过氧化物酶和 五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC 具有很高的敏感性。 SABC 兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。试剂盒中内容1.正常山羊血清封闭液：12ml。为二抗同种动物血清，用于组织切片的封闭。
3、 2.二抗：12ml。亲和纯化抗体，标记长臂生物素。山羊抗小鼠IgG(或IgM)或兔IgG。 3.SABC：12ml。链酶亲和素过氧化物酶复合物。 4. 试剂盒附送试剂：复合消化液6ml，消化石蜡切片以暴露被遮蔽的抗原。 抗原修复液I6ml，接在热修复抗原之后，进一步增强某些指标染色。用户自备试剂：1 粘片剂APES 或POLY-L-LYSINEPOLY-L-LYSINE（博士德公司有售）。 2 0.02M0.02M PBSPBS（pH7.2-7.6）配法：1000ml 蒸馏水中加氯化钠9g, Na2HPO412H2O 7g, NaH2PO42H2O 0.5g)。 3 0.01M 枸橼酸盐缓冲
4、液：1000ml 蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O72H2O）3g, 枸 橼酸(C6H8O7H2O ) 0.4g。 4 DABDAB显色试剂盒（博士德公司有售）。免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。 A A程序程序：石蜡切片热修复抗原程序。适于核抗原，易被固定破坏的抗原。B B程序程序：石蜡切片酶消化程序。适于被固定遮避的抗原。 C C程序程序：石蜡切片酶不消化/修复程序。适于稳定的抗原。 D D程序程序：细胞涂片，冰冻切片染色程序。A.石蜡切片微波修复抗原染色程序:1. 载玻片防脱片剂处理:可选择APES 或Poly-Lysin
5、e。捞片后置烤箱58-60 30-60 分以 使切片紧密粘附。 2. 切片常规脱蜡至水。 3. 30%H2O2 1 份+蒸馏水10 份混合,室温5-10 分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3 次。 4 热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾 后断电，间隔5-10 分钟后，反复1-2 次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2 次。 5. 抗原修复液I：对于大部分指标，可以直接进入第6 步；对于难以显示的抗原，可用抗 原修复液I 进一步暴露抗原滴加在切片上室温10 分钟后，PBS（pH7.2-7.6）洗涤 2-3 次。 6. 滴加正常山羊血清封闭液
6、,室温20 分钟。甩去多余液体, 不洗。 7. 滴加适当稀释的一抗（小鼠或兔IgG），37 1 小时左右或20时2 小时左右。也可 4过夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2 分钟3 次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色 强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育 时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。） 8. 滴加生物素化山羊抗小鼠IgG(或兔、人IgG),20-37 20 分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗2 分钟3 次。 9. 滴加试剂SABC,20-37 20 分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗5 分钟4 次。 10. DAB 显色:使
7、用DAB 显色试剂盒(AR1022)。取1ml 蒸馏水,加试剂盒中A,B,C 试剂各1 滴, 混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30 分钟之间。也可自配显 色剂显色。蒸馏水洗涤。 11. 苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。B.B. 石蜡切片酶消化程序:以下面的步骤代替A 程序中的第4-5 步:滴加复合消化液5-10 分钟。蒸馏水洗3 次。C.C. 石蜡切片酶不消化/修复程序:对于不需要微波修复或消化的抗原,省略A 程序中的第4-5 步即可。D D.血涂片，细胞和冰冻切片染色程序1.载玻片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine）。 2.抗凝血经分层离心后涂片
8、；培养细胞也可涂片或贴片生长；冰冻切片室温风扇吹干。 3.固定方案首选4%多聚甲醛或10%福尔马林固定30 分钟；对不能耐受甲醛固定的抗原，纯 丙酮室温固定30 分钟。蒸馏水洗。（干燥后可冰冻保存） 4. 30%H2O2 1 份+纯甲醇50 份混合,室温浸泡30 分钟，以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水 洗 3 次。 其余步骤和石蜡切片6-11 步相同。 注意事项：如果染色背景过高，在SABC 反应之后，DAB 显色之前,用加有0.010.02% TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗涤切片4 次，单纯PBS 洗2 次，然后DAB 显色。武汉博士德生物工程有限公司武汉市关山二路特1 号国际企业中心3 号楼（聚贤楼）5 楼430074 联系电话：02767845390，1，1,2,3,4,5_
