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1、华中科技大学硕士学位论文去势下调小鼠下丘脑弓状核HAP1表达姓名：陈姣蓉申请学位级别：硕士专业：人体解剖学与组织胚胎学指导教师：李和20080601华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 II 去势下调小鼠下丘脑弓状核去势下调小鼠下丘脑弓状核 HAP1 表达表达 硕士研究生: 陈 姣 蓉 导 师: 李 和 教授 华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学室 武汉 430030 中 文 摘 要 中 文 摘 要 亨廷顿蛋白相关蛋白-1（huntingtin-associated protein 1，HAP1）是第一个被鉴定的亨廷顿蛋白 （hunt
2、ingtin） 结合蛋白， 其功能至今未明。 HAP1 至少有 HAP1A和 HAP1B 两种同工异构型，两种 HAP1 均主要表达于神经系统和内分泌系统。在神经系统中，HAP1 高水平表达于弓状核、室周核、正中隆起等在内的下丘脑许多核团内。下丘脑弓状核、室周核、正中隆起等核团含有分泌促性腺激素释放激素（Gonadotrophin Releasing Hormone，GnRH）的分泌性神经元，GnRH 通过下丘脑-垂体-性腺轴（Hypothalamus- Pituitary gland-Gonad，HPG) 调节性腺激素的分泌， 性腺分泌的性激素对下丘脑分泌 GnRH 的功能具有反馈调节作用。
3、 HAP1在下丘脑弓状核、室周核、正中隆起等部位的高水平表达提示其可能与 HPG 轴功能有关。为了揭示 HAP1 与 HPG 轴之间的关系，本研究在另一实验中观察到不同性激素水平可明显改变下丘脑 HAP1 水平的基础上， 首先分析了下丘脑表达HAP1 的神经元与分泌 GnRH 神经元之间的解剖学关系， 继而观察了不同性激素水平对下丘脑弓状核、室周核、正中隆起等部位 HAP1 免疫反应性的影响。 免疫组织化学 ABC 法观察显示，HAP1 高水平表达于下丘脑弓状核、室周核、正中隆起、室旁核、视上核等部位，而在腹内侧核表达水平较低，HAP1 免疫反应产物弥散分布在这些部位的神经元胞体内，也定位在这
4、些区域的 stigmoid小体上。免疫荧光双标显示，在有 GnRH 阳性神经元的区域，弓状核内HAP1/GnRH 双标细胞较多，室周核和正中隆起内极少或无 HAP1/GnRH 双标细胞。 本实验室的前期工作发现，去势及补充性激素后，下丘脑内 HAP1 在蛋白质和 mRNA 水平均发生了明显变化，但这种变化是否局限在与性腺功能调节有关的区域尚不明确。为此，本研究进一步应用免疫组织化学技术观察了切除睾丸或卵巢 3w 后及切除睾丸或卵巢 2w 补充性激素 1w 后下丘脑 HAP1 水平变化的区华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 III 域特征
5、。切除睾丸或卵巢 3w 后，下丘脑弓状核、室周核和正中隆起的 HAP1 免疫反应性减弱，尤以弓状核内变化最为明显，而下丘脑其他区域的 HAP1 免疫反应性无明显变化。切除睾丸或卵巢 2w 补充性激素 1w 后，下丘脑弓状核、室周核和正中隆起的 HAP1 免疫反应性与正常水平基本相同，下丘脑其他区域的HAP1 免疫反应性与正常水平无明显区别。 HAP1 与 GnRH 均存在于下丘脑弓状核、室周核、正中隆起。弓状核内有较多的 HAP1/GnRH 双标细胞提示，HAP1 可能通过与 GnRH 的相互作用而参与HPG 轴调节作用。 性腺切除后，体内性激素的分泌减少，对下丘脑的负反馈作用减弱，下丘脑弓状
6、核、室周核和正中隆起内 GnRH 的合成和分泌因此而增加。以前的研究表明，HAP1 参与或调节神经元内的物质转运、神经递质的释放和受体的再循环。小鼠下丘脑弓状核等部位 HAP1 免疫反应性随着其性激素水平的改变而变化， 提示其可能参与下丘脑弓状核等部位神经元内 GnRH 的转运和分泌。 性腺切除后，下丘脑弓状核内 HAP1 免疫反应性的减弱可能与 HAP1 参与GnRH 的转运和分泌而大量消耗与代谢有关。 因性激素对神经元具有营养和保护作用， 性腺切除后下丘脑弓状核等部位内 HAP1 的免疫反应性的减弱也可能与失去性激素的营养和保护作用有关。 但由于 HAP1 免疫反应性的变化局限于弓状核等区
7、域，性腺切除后 HAP1 免疫反应性的减弱应以 HAP1 参与 GnRH 的转运和分泌而大量消耗与代谢为主。 关键词：亨廷顿蛋白相关蛋白 1；苯甲酸雌二醇；丙酸睾酮；下丘脑；卵巢切除；睾丸切除；小鼠 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 IV Gonadectomy down-regulates Expression of HAP1 in the Arcuate Nucleus of the Hypothalamus of mouse Master candidate: Chen Jiaorong Tutor: Prof. Li He D
8、ivision of Histology and Embryology, Department of Anatomy, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei, China PR ABSTRACT Huntingtin-associated protein 1 (HAP1) is the first recognized protein, as its binding with huntingtin. HAP1s function is almost u
9、nknown. There are at least two isoforms, HAP1A and HAP1B. Both of the two HAP1 are distributed in nervous system and endocrine system. In nervous system, HAP1 is highly expressed in arcuate nucleus, periventricular nucleus and median eminence of hypothalamus. Also, in arcuate nucleus, periventricula
10、r nucleus and median eminence of hypothalamus, there are the neurons containing GnRH (Gonadotrophin Releasing Hormone). GnRH regulates gonadal hormone by Hypothalamus-Pituitary gland-Gonad (HPG). Gonadal hormone feed back to the GnRH neurons of hypothalamus. HAP1s highly expression in these areas in
11、dicates HAP1 may be related with HPG function. In order to explore the relationship of HAP1 and HPG, on the basis of altering HAP1 in different gonadal hormone, our study observed the distribution of HAP1 and GnRH in hypothalamus, and the influence of arcuate nucleus, periventricular nucleus and med
12、ian eminence of HAP1 immunoreactivity in different gonadal hormone level. According to immunohistochemistry ABC method, HAP1 is highly expressed in arcuate nucleus, periventricular nucleus, median eminence, paraventricular nucleus and supraoptic nucleus, but low expressed in ventromedial nucleus. HA
13、P1 is dispersed adqulisly in cytoplasm and neuropil between cell bodies, and also can be found in stigmoid body. By immunofluorescence double staining, there are many double staining neurons both contained HAP1 and GnRH in arcuate nucleus. But 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 V there a
14、re few neurons both containing HAP1 and GnRH in periventricular nucleus, median eminence. Our lab has found apparent change of HAP1 both in protein and mRNA levels when gonadectomy or supplementary gonadal hormone. Whether the change is only associated with the function of gonad is unknown. With reg
15、ard to this, we observed the change of HAP1 in hypothalamus in castration or ovariectomy 3 weeks later group, and castration or ovariectomy 2 weeks later supplementing gonadal hormone 1week group. After castration or ovariectomy 3 weeks, HAP1 immunoreactivity is weakened in arcuate nucleus, perivent
16、ricular nucleus and median eminence, especially in arcuate nucleus. However, in the other areas of HAP1 distribution there is almost no change. In the group of supplementing gonadal hormone 1 week when castrated or ovariectomized, HAP1s immunoreactivity is as the same as the normal mice. Both of HAP1 and GnRH distribute in arcuate nucleus, periventricular nucleus and median eminence of hypothalamus. Many double staining neurons of HAP1 and GnRH in arcuate nucleus i
