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1、e n t sS e p a r a t i o na n dp u r i f i c a t i o no ft o t a l一l一1_lr-l- I l a V 0 n o l c l SI r o m ，D Z Z 比，咒P C e l u m 勿i n t sa n di t s“ g h tr e d u c i n ga n d i p i d e 。c t s w e i g h t - r e d u c i n ga n dl i p i d - l o w e r i n ge l i e C t SC a n d i d a t e ：S p e c l a l t
2、y： ：M a j o r：J S u p e r v l s o r ：X u eD o n g n aE c o n o m i cp l a n tb i o t e c h n o l o g y C O n 0p l a n tB o t a n yP r o f e s s o rB a iZ h i c h u a nC O L L E G EO FH O R T I C U 删R EA N DL A N D S C A P EA R C H I T E C T U I 之ES o u t h w e s tU n i v e r s i t yB e i b e i ，C h
3、o n g q i n g4 0 0 716 ，ER C h i n aM a y , 2 0 0 8f爻独创性声明本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了标注。学位论文作者：裤考臼司产签字日期：洲8 年工月，占日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生部可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在
4、解密后适用本授权书，本论文：口不保密，果密期限至2 0 10 年7 月止) 。学位论文作者签名：裤粤唧导师签名：学位论文作者签名：伊了，“7导师签名：签字日期：洲8 年 O 0 5 ) ；但中剂量和高剂量实验组与实验前比较T C 值有显著降低( P 1 2 5 ， 2 5 和 3 6 6 7 1 。5 、其他药理作用苗明三通过结扎小鼠颈总动脉和腹腔注射亚硝酸钠溶液，观察荷橘茶( 荷叶，橘叶，山楂叶，柿叶和茶叶制成的袋泡茶) 对缺氧的影响，结果显示大剂量荷橘茶组和心得安组均可明显延长小鼠结扎颈总动脉后的存活时间，可明显延长小鼠用亚硝酸钠后的存活时间；小剂量荷橘茶组可明显延长小鼠结扎颈总动脉后的存
5、活时间，有延长小鼠用亚硝酸钠后存活时间的趋势。研究表明荷橘茶对多种原因所致的小鼠缺氧均有一定拮抗作用，可提高小鼠对缺氧的耐受力，使存活时间延长【6 8 】。1 2 3 临床应用孔伯华医集中记载9 8 9 医案，使用荷叶者就达2 6 0 案，使用率达2 6 3 。蒲辅周医6户、f第一章绪论 曼曼曼曼曼曼曼曼量曼曼曼量曼曼曼曼曼曼曼曼曼皇曼曼曼曼笪皇曼曼曼曼曼曼笪曼曼曼曼曼皇曼量曼皇曼量皇曼曼曼皇曼曼曼曼曼曼舅曼皇量詈曼皇曼曼曼曼曼曼皇曼曼曼I I 曼曼量案中记载1 2 0 医案，使用荷叶者1 7 案，使用率达1 4 2 。上海已故名老中医、上海中医药大学徐辉光教授治疗冠心病，血脂过高，体态肥胖者
6、也在辩证论治处方的基础上，常配以荷叶同用。北京高辉远教授治消渴病血脂偏高者也应用荷叶【6 9 3 。现在，荷叶主要用于治疗肥胖症、高脂血症及相关疾病的单方及复方制剂中。( 1 ) 用于肥胖症及高脂血症的治疗关章顺等从郴州市各类人员体检检出的高脂血症患者中，选择符合高血脂诊断标准的自愿者共9 0 人，随机分成3 组，每组3 0 人。分别给予荷叶水提物制作的胶囊，4 粒次，3 次d ；洛伐他汀，z O m g 次，1 次d 及安慰剂；各组均进行健康教育和膳食指导，调脂4 0 天。结果A组调脂后血清T C 、T O 、L D L C 水平明显下降，H D L C 水平明显升高，与调脂前比较有显著差异
7、；B 组与A 组比无显著差异，但升高H D L - C 效果不明显；C 组调脂前、后血清T C 、T G 、L D L C 和H D L C 水平无显著差异，且调脂后的血脂水平明显高于A 、B 组。荷叶水提物对人体具有较好的调脂作用，且无毒，未发现副作用。李慧芬应用以荷叶为主要原料的荷丹片治疗高脂血症8 0 例，有效7 4 例，无效6 例，有效率9 2 5 ，且与辛伐他汀的治疗效果相比，无明显差别【7 1 1 。( 2 ) 用于脂肪肝的治疗张建伟等自拟祛脂汤( 由山楂、丹参、荷叶等组成) 治疗脂肪肝9 0 例，总有效率9 1 1 1 。经R i d i t 检验和t 检验，脂肪肝、高血脂治疗前
8、后变化比较，分别为P B D A 。在给定的水平条件下，各因素槲皮素提取量的影响情况为：A l A 2 A 3 ，B 2 B l B 3 ，C 3 C 2 C l ，D 3 D l D 2 。方差分析表明，C 因素( 提取溶剂用量) 对于槲皮素提取量的影响具有显著性差异，而其它因素对其无显著性影响。通过直观分析，又试验结果理论判断几其适应工业化大生产的需两方面因素考虑，最佳组合确定为A I B 2 C I D t 。( 2 ) 提取次数的优化本实验在上述提取条件的前提下，对第二次提取的提取时间做进一步优化。称取荷叶药材( 湖批素含量为1 2 9 2 ) 2 0 0 9 ，加2 0 倍量提取溶剂
9、，提取一次l h ，滤过，37 1 0 7验证试验结果表明，所筛选的工艺条件基本稳定、可行，确定荷叶槲皮素提取物的提取方法为：取荷叶药材，加2 0 倍6 0 乙醇溶液，于8 0 。C 水浴回流提取，第一次提取2 h ，第二次提取1 5 m i n ，合并滤液，备用。3 3 大孔吸附树脂分离纯化荷叶总黄酮部位3 3 1大孔吸附树脂预处理将树脂以乙醇浸泡充分溶胀，用乙醇洗至流出液加适量水无白色浑浊，再用蒸馏水洗至无醇，最后转入酸碱处理，即用4 B V 5 H C L 溶液，以5B V h 的通过树脂层，浸泡3h ，而后用蒸馏水以同样流速洗至中性；用4B V 的5 N a O H 溶液，以5B V
10、h 的通过树脂层，浸泡3h ，而后用蒸馏水以同样流速洗至中性。3 3 2 上树脂用供试品溶液的制备荷叶药材，粉碎成粗粉，按照3 2 4 中确定的条件制备供试液，浓缩至每m L 含0 2g 生药，过滤，备用，H P L C 法测定上柱液槲皮素含量为4 9 4 3 9 0 1 , t g m L l 。第_ = 章大孔吸附树脂分离纯化荷叶总黄酮部何的实验研究3 3 3 树脂的静态吸附效果( 树脂的筛选)将N K A - 9 、D 1 0 1 、A B 8 、H P D l 0 0 等4 种类型大孔吸附树脂，用滤纸吸干表面的水分，各精密称取1 0 9 ，置具塞磨口锥形瓶中，分别精密加入浓度为O 2
11、9 m L “ 1 的供试溶液5 0 m L ，置电动振荡机上振荡2 4h ，充分吸附后，测定其静态吸附效果。将吸附后的树脂过滤，精密加入5 0m L6 0 乙醇进行解吸，H P L C 法测定以上各滤液的浓度，并计算吸附率与解吸率，结果见表3 1 。表3 14 种大孔树脂对于槲皮素的静态吸附效果T a b l e3 1R e s u l t so fs t a t i ca d s o r p t i o no f 4k i n d sm a c r o p o r o u sa d s o r p t i v er e s i n s由表3 1 可见，N K A 9 和H P D l 0
12、0 具有较强的吸附能力，而H P D l 0 0 树脂的解吸能力较强，达到8 0 以上，有利于有效成分的富集、纯化，故选择H P D l 0 0 型树脂进一步作动态吸附考察。3 3 4H P D l 0 0 型树脂吸附的影响因素考察( 1 ) 吸附液P H 值的影响取供试品溶液2 0 0 m L 3 份，分别用5 氢氧化钠溶液调P H 为5 、3 、1 ，混匀，以l m L r a i n l的流速上样吸附，以荷叶累积未吸附率作为指标，确定是否调节供试品溶液最佳P H ，柱床体积( B V ) 为5 M I 。结果见图2 。由图2 可见，在上样体积小于1 5 0 m L ，即3 0 B V 时
13、，P H 为5 的吸附液未吸附率明显高于P H 为1 和3 的，在上样体积为1 5 0 m L - 2 0 0m L 时，三种溶液未吸附率趋于相等。本实验选择吸附液的P H 为3 l 。2 7两南大学硕十学位论文图2 吸附液P H 值的影响F i g2I n f l u e n c e so fp Hv a l u eo fs a m p l es o l u t i o nV鼍 茁 叠 氍2 55 07 51 0 01 2 51 5 0 1 7 52 0 0赞凌魏瞎藏臻款【t )( 2 ) 流速的影响以相同浓度( 0 2 9 m L “ 1 ) 及体积( 4 0 m L ) 的供试品溶液，控
14、制流速分别为2 、4 、6 、8 、1 0 B V h J 进行动态吸附，柱床体积为7 4 m L 。结果见图3 。图3 吸附流速与吸附率的关系F i g3R e l a t i o no ff l o wr a t ea n da d s o r p t i o nr a t e24681 0鬈毽( 1 目i k )由图3 可见，当流速小于4 B V h - 1 时，供试液吸附率较高，达到9 8 以上；当流速大于6 B V h - 1 时，供试液吸附率还不足9 0 。因此本实验选择4 B V h - 1 的流速进行上柱。( 3 ) 吸附液浓度的影响将浓度为0 2g m L l 的供试品溶液分
15、别浓缩为O 5 、O 7 、1 0g m L l 的溶液，和0 2g m L l的供试品溶液以相同的流速( 4 B V h 1 ) 进行动态吸附，柱床体积为2 m L 。结果见图4 。约O的的Ov 警群一广第- = 章大孑L 吸附树脂分离纯化荷叶总黄酮部位的实验研究I I图4 吸附液浓度与吸附率的关系F i g4R e l a t i o no fs a m p l es o l u t i o nc o n c e n t r a t i o na n da d s o r p t i o nr a t e9 08 07 06 0；5 04 0 薹 警3 02 0l OOO0 20 40 6
16、0 8供雌謦赣壤瘦( I v 。I L )1 2由图4 可见，当供试液浓度为0 1 2g m L “ 1 时，其吸附率达到8 4 ，当供试液浓度为0 5g m L l 以上时，其吸附率还不到6 0 。因此本实验选择供试液浓度为0 2g r n L “ 1 。( 4 ) 径高比影响以相同浓度( O 2g m L ) 及相同体积( 5 m L ) 供试液，控制树枝柱的径高比分别为1 ：7 、l ：9 、1 ：1 1 、1 ：1 3 、1 ：1 5 ，以相同的速度( 4 B V h 。) 上样，进行动态吸附。结果见图5 。图5 径高比对吸附率的影响F i g5I n f l u e n c e so fr a t i oo fd i a m e t e rt oh e i g h to
