《脂联素基因多态性与2型糖尿病及胰岛素抵抗相关因素研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《脂联素基因多态性与2型糖尿病及胰岛素抵抗相关因素研究（25页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中文摘要。目的研究脂联素基因单核苷酸多态性( S N P 4 5 ，S N P 2 7 6 ) 与2 型糖尿病及与体重指数、血糖、血胰岛素、血脂、胰岛素抵抗指数的关系。方法用聚合酶链反应一限制性片段长度多态法( P C R 一磁r L P ) ，检测4 0 名正常对照者和5 0 名2 型糖尿病患者S N P 4 5 ，s N P 2 7 6 多态性，并测定其相关生化指标，计算H o M A 胰岛素抵抗指数。比较分析S N P 4 5 ，S N P 2 7 6 多态性与2 型糖尿病及与体重指数、血糖、血胰岛素、血脂、H o M A 胰岛素抵抗指数的关系。结果1 、s N P 4 5 患者组G G
2、 基因型频率高于对照组( # = 5 2 0 ，p= O 0 2 3 1 8 。0 8 琼脂糖电泳，凝胶成像观察鉴定D N A 。( G e l l eG e 血s 凝胶成像系统，操作软件( b 签m p ，分析软件n eT ( ) o l S ) 。3 ) P C R 扩增：上游引物：57 一a 观A G G A T l 3 c m 竹T G ( 脚一3 ，下游引物：5 La 0 T 1 阽口1 H 玎C C C 虱、TG ，r C T 一3 。以2 u l D N A 为模板，加入1 0 b u f f e r 缓冲液，2 5n m l o d N r P l 6 u l ，0 1 u l
3、 T a q D N A 延伸聚合酶，加入2 条引物1 6 u l ，2 5m o 的M 孑+ 1 2 u 1 混和加入P C R 仪扩增。9 4 3 分钟预变性，9 4 3 0 秒变性，5 6 3 0 秒退火，7 2 1 分钟3 0 秒延伸D N A 链，7 2 5 分钟补充延伸。共3 0 个循环。2 琼脂糖电泳，凝胶成像观察P C R 产物。以1 0 0 1 0 3 1 b p 的D N A M 知k e r 为参照物。4 ) P C R 产物的限制性酶切：取5 u l P C R 产物，在两个反应体系中分别加入8 U 限制性内切酶S r n a I3 0 ( 对蹬昭4 5 ) 、B 6
4、n 1I6 5 ( 对S N P 2 7 6 ) 酶切3 小时。取酶切产物5 u l ，2 琼脂糖电泳，凝胶成像观察酶切产物。以1 0 0 1 0 3 1 b p 的D N AM a r k e r 为参照物。1 2 3 统计学处理统计学处理使用S P S S l 3 0 软件，数据用均数标准差表示。临床指标均进行正态性检验。组内胰岛素抵抗相关因素、H O M E m 比较用方差分析，基因频率采用基因计数法计算，基因频率比较采用x 2 检验。P 0 0 5 有统计学意义。2 结果2 1 基因组D N A 提取结果见图2囤2 基因组D l 峨电泳凝胶成像圈o2 2P C R 扩增结果为5 2 5
5、 b p 的片段见图3嘲3H 承严物电泳疆股成像图P ( 承扩增产物为5 2 5 b p1 0 0 1 0 3 1 b pD N AM a f k 盯2 3P C R 产物的限制性酶切结果：对于S N P 4 5 经S r n a I 酶切后产生3 种基因型，分别为：野生型( T T ) ，杂合子型( T G ) ，纯合子突变型( G G ) 。不包含G 等位基因的5 2 5 b 口片段不被S H 璩I 酶切，含G 等位基因的片段被酶切为1 6 8 b p 和3 5 7 b p 的两个片段。野生型( T T ) 显示一条带( 5 2 5 b p ) ，杂合子型( T G ) 显示3 条带( 5
6、 5 5 b p ，1 6 8 b p 和3 5 7 b p ) ，纯合子突变型( G G ) 显示两条带( 1 6 8 b p 和3 5 7 b p ) 见图4 。凰4 、删5P ( 嚣产物酶切凝胶成像圈1 2 3 野生型( T r ) 显示一条带( 5 2 5 b p J 4 杂台子型( T G ) 显示3 条带( 5 巧b p 。1 6 8 b p 和3 5 7 b p5 纯合子突变型C G G ) 显示两条带( 3 5 7 b p 和1 鹋b p )1 0 0 1 0 3 1 b pD N A 吐叮塑蓥直墨堂堕堡圭目! 窒生堂焦堡塞i ! 塑i 兰2o同样对于S N P 2 7 6 经
7、B s m I 酶切后产生3 种基因型，分别为：野生型( G G ) ( 5 2 5 b p ) ，杂合子型( G T ) ( 5 2 5 b p 4 0 3 b p 和1 2 2 b P ) ，纯合子突变型( T T ) ( 4 0 3 b p 和1 2 2 b p ) 。见图5图SS N P 2 7 6P C R 产物酶切凝胶成像图L 杂台子型 G 广rJ 显示3 条带1 5 2 5 b p 4 0 3 b p 和1 2 2 b p )2 纯台子突变型( T 厂r ) 显示2 条带( 4 0 3 b p 和1 2 2 b p J3 4 野生型fG G ) 显示l 条带( 5 2 5 b p
8、J1 0 0 i 0 3 l b pD N AM a r k e r2 42 型糖尿病患者组和正常对照组脂联素基因单核苷酸多态性基因型和等位基因频率比较；在S N P 4 5 患者组和对照组两组基因型频率比较，纯合子突变型G G 基因型频率两组有显著差异，患者组G G 基因型频率多于对照组( X 2 = 5 2 0 ，p = 0 0 2 3 0 0 5 ) 。S N P 4 5 两组等位基因频率分布无差异。S N P 2 7 6 两组基因型和等位基因频率分布均无差异。见表2 和表3表22 型糖尿病患者组和正常对照组基因型频率比较s N P 4 52 型糖尿病患者组和正常对照组两组比较，G G
9、基因型有显著差异，患者组G G 基因型明显多于对照组x 2 = 52 0 ，p = 00 2 3p O0 5。表32 型糖尿病患者组和正常对照组等位基因频率比较2 型糖尿病患者组和正常对照组等位基因频率比较无差异2 5 脂联素基因s N P 对胰岛素抵抗相关因素、H 0 啪E m 的影响研究：1 ) S N P 4 5 正常对照组T G 基因型者与T r 基因型者比较甘油三脂有显著差异( P = O 0 0 0 ) ，T G 基因型者比T r 基因型者有较高的甘油三脂浓度。见表4 ：表4S N P 4 5 正常对照组脂联素各基因型胰岛素抵抗相关因素、H 0 匠m 比较* T G 基因型者与T
10、r 基因型者比较甘油三脂有显著差异( P = 0 0 0 0 )2 型糖尿病患者组T r 、T G 和G G 三种基因型胰岛素抵抗相关因素、胰岛素抵抗指数比较未发现有统计学意义。见表5 。表5S N P 4 52 型糖尿病患者组脂联素各基因型胰岛素抵抗相关因素、H O M E I R 比较Q2 型糖尿病患者组脂联索T r 、T G 和G G 三种基因型胰岛素抵抗相关因素、胰岛索抵抗指数比较无差异2 ) S N P 2 7 6 正常对照组、2 型糖尿病患者组G G 、G r 和T r 三种基因型胰岛素抵抗相关因素、胰岛素抵抗指数比较未发现有统计学意义。见表6 、7 、表6s N P 2 7 6
11、正常对照组脂联素各基因型胰岛素抵抗相关因素、H O M E I R 比较多态位点比较指标基因型S N P 2 7 6体重指数( k g r n 2 )空腹血糖( r n I n d 1 )空腹胰岛素( p m 0 1 1 )胆固醇( l 1 )甘油三脂( m r n o l 1 )高密度脂蛋白( I 1 )G ，G飞，G飞，I2 2 1 0 3 9 42 2 9 4 4 9 32 0 2 0 2 2 84 5 4 0 4 64 6 5 0 6 94 9 8 0 8 37 5 4 9 5 l ，6 08 3 7 3 4 9 4 97 9 8 0 2 3 o o4 8 8 06 64 2 3 1
12、1 21 8 9 10 71 6 2 0 9 116 4 0 4 91 5 4 0 4 64 2 9 1 8 91 7 9 1 5 91 4 7 0 2 5 I ( ) ! 吸2 5 4 1 7 42 9 0 1 7 62 8 6 0 7 0正常对照组脂联索G 厄，D G ，T ，r 三矜基因型胰岛素抵抗相关因素、胰岛素抵抗指数比较无差异塑鏊直匿堂堕亟巫塞生堂焦堡塞! 塑! 生2表7s N P 2 7 62 型糖尿病患者组脂联素基因型胰岛素抵抗相关因素、H O M E I R 比较2 型糖尿病组脂联素G G T G T r 三种基因型胰岛素抵抗相关因索、胰岛索抵抗指数比较无差异3 讨论2 型糖
13、尿病是一种复杂的疾病其机制还未完全阐明，它是由遗传易感性和环境因素共同作用的结果、本文研究是为脂联素基因单核苷酸多态性是否和2 型糖尿病、胰岛素抵抗相关因素有荧提供进一步的证据主要筛查脂联素基因单核苷酸多态性S N P 4 5N P 2 7 6 俩个位点本文研究发现对于脂联素基因S N P 4 52 型糖尿病患者组突变纯合子G G 基因型频率高于正常对照组，提示脂联素基因可能是2 型糖尿病的易感基因，S N P 4 5 与2 型糖尿病发病有关本文还提东正常人S N P 4 5 和甘油三脂有关，突变杂合子T G 基因型者比来突变野生T 厂基因型者有较高的甘油三脂。脂联素基因s N P 2 7 6
14、 和2 型糖尿病、胰岛素抵抗相关因素、H O M E m 无关。脂联素是脂肪组织表达最丰富的蛋白质产物之一，其血浆浓度为5 3 0 F g 甜，约占总血浆蛋白的O0 1 在肥胖和2 型糖尿病人体脂联素浓度显著低，且脂联素水平和胰岛素敏感性有关。血脂联素能改善糖代谢和胰岛素抵抗一2 2 。其机制主要是脂联素能增加骨骼肌脂肪酸氧化、降低骨骼肌内甘油三脂含量从而改善胰岛素对骨骼肌的作用【；它能增加肝脏的胰岛素敏感性、抑制肝糖异生2 0 ；它能通过其受体( m l 醢) R ) 激活过氧化物酶增殖物激活受体- P P 舭h ) 、5 p L I v 口活化蛋白激酶( 舢腰K ) 和p 3 8 丝裂原由
15、茎直匡堂堕亟圭受窒垒堂垡造奎! ! ! 竖生2o活化蛋白激酶( p 3 8 M A K P ) ，从而促进脂肪酸氧化的同时促进葡萄糖转运，增加葡萄糖摄取【2 4 j 。脂联素基因定位于染色体3 q 2 7 ，且该区域存在2 型糖尿病和代谢综合征的易感位点。因此脂联素基因被认为是参与2 型糖尿病发病机制中的候选基因。近来脂联素基因单核苷酸多态性与2 型糖尿病、胰岛素抵抗综合征被广泛关注。2 0 0 2 年H a r a K 【1 2 3 等对日本人群、2 0 0 3 年靳立忠 2 5 等对中国天津人群、2 0 0 4 年夏晖等对中国南京人群u 3 】且旨联素基因S N P 4 5 基因型频率检测
16、发现，2 型糖尿病G G 基因型频率高于正常对照组，从而提示脂联素基因S N P 4 5 多态性与2 型糖尿病相关，G G 基因型个体比有T _ r 基因型个体有较高的2 型糖尿病发病风险。本研究和这几项研究获得相同的结果。S N P 4 5 位于脂联素基因外显子2 ，碱基1 、G 突变，编码的氨基酸甘氨酸( G l y )并没有改变，属同义突变，但可能由于优势密码子的效应而影响蛋白质的表达效率，从而引起人生物性状的改变。 h r a 王( 对日本人S N P 2 7 6 筛查发现，2 型糖尿病组G G 基因型频率和G 等位基因频率也高于正常对照组，而本研究未获相同的结果。意大利非糖尿病人【1 叫的脂联素基因S
