《毛霉Δ6脂肪酸脱饱和酶基因启动子的克隆和功能鉴定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《毛霉Δ6脂肪酸脱饱和酶基因启动子的克隆和功能鉴定（94页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、福建师范大学毛若雨硕士学位论文动子区域中一9 1 9 一一7 8 4b p 和4 3 铷1b p 融合片段的重组酵母脂肪酸甲酯组分中出现G L A 新峰，转化率达6 0 以1 7 ，明显高出只含有启动子区域中4 3 4 1b p 的转化率。对启动子区域中9 19 - 7 8 4b p 片段的增强子功能做出了验证。关键词：丫。亚麻酸，A 6 脂肪酸脱饱和酶，启动子，增强子，报告基因I IA b s t r a c tA b s t r a c t7 - 1 i n o l e n i ca c i d ( G L A ) i sa ni m p o r t a n tp o l y u n s
2、a t u r a t e df a t t ya c i d ，w h i c hp l a y sl o t so fp h y s i o l o g i c a lf u n c t i o n s T h eA 6 - d e s a t u r a s ei st h er a t e - l i m i t i n ge n z y m eo fG L Ab i o s y n t h e s i sp a t h w a y T ou n d e r s t a n dt h em o l e c u l a rm e c h a n i s mo ft r a n s c r
3、 i p t i o nr e g u l a t i o no fA 6 一d e s a t u r a s eg e n e ，a5 f l a n k i n gr e g i o no fM C D 6a b o u t13 0 0b pw a ss p e c i f i c a l l ya m p l i f i e db yL A - P C R , t h e nt h es e q u e n c ew a sa n a l y z e db ys e v e r a ls o f t ：w a r e s ，o n l i n ep r o m o t e rp r e
4、 d i c t i o nw e b sa n da l i g n e di ns e v e r a lt r a n s c r i p t i o nf a c t o rd a t a b a s e sa n dp r o m o t e rd a t a b a s e st oi d e n t i f yp u t a t i v ec i s r e g u l a t o r yp r o m o t e re l e m e n t ss u c ha sT A T Ab o x ，G Cb o x ，C A A Tb o xl i k ee l e m e n t
5、si nt h ei d e n t i c a lp o s i t i o n sc o m m o nt ot h ee u k a r y o t ep r o m o t e rs e q u e n c er e g i o n s A c c o r d i n gt ot h ep l a s m i do fP Y E S P M C D 6a n dP Y G F P , t h ep l a s m i do fP Y M C D 6w a sc o n s t r u c t e d T h ea m p l i f i e dp r o d u c to fp r o
6、 m o t o rr e g i o nw a sl i g a t e di n t ot h eP Y M C D 6v e c t o rw h i c hc o n t a i n e dt h eA 6 一f a t t ya c i dd e s a t u r a s eg e n et oc o n s t r u c tt h ee x p r e s s i o np l a s m i dP Y M D 6 P M C D 6 T h er e c o m b i n e dp l a s m i dw a st r a n s f e r r e di n t oS
7、a c c h a r o m y c e sc e r e v 括i a es t r a i nI N V S c l T h eG C M Sa n a l y s i so nt h ep r o f i l eo ft h et o t a lf a t t ya c i dd e m o n s t r a t e dt h a tt h en o v e lp e a kf o rp r o d u c tG L Aa p p e a r e di n t h et r a n s g e n e t i cy e a s tc o m p a r e dw i t ht h e
8、c o n t r o ly e a s tc o n t a i n i n gt h eo r i g i n a lv e c t o rP Y M C D 6 T ou n d e r s t a n dt h em o l e c u l a rm e c h a n i s mo ft r a n s c r i p t i o nr e g u l a t i o no fA 6 一d e s a t u r a s eg e n e ，T h ea m p l i f i e ds u b - c l o n e dp r o d u c t so ft h ep r o m
9、t o rr e g i o nw e r el i g a t e di n t ot h ev e c t o rw h i c hc o n t a i n e dt h eA6 d e s a t u r a s eg e n e ( M C D 6 ) a st h er e p o r t e rg e n et oc o n s t r u c tt h ee x p r e s s i o np l a s m i d s T h er e c o m b i n e dp l a s m i dw a st r a n s f e r r e d i n t oS a c c
10、 h a r o m y c e sc e r e v i s i a es t r a i nI N V S c1 T h eG C M Sa n a l y s i so nt h ep r o f i l eo ft h et o t a lf a t t ya c i ds h o w e dt h a ta l ld i f f e r e n tl e n g t hf r a g m e n t so fA 6 -d e s a t u r a s eg e n ep r o m o t o re x c e p tt h e 121b pf r a g m e n tc o u
11、 l dd r i v e dt h ee x p r e s s i o no fA 6 - d e s a t u r a s eg e n ew h i c hc o n v e r t e dL At oG L A T h es u b s t r a t ec o n v e r s i o nr a t ed e c r e a s e dw i t ht h el e n g t ho fp r o m o t o rc h a n g e df r o m12 91b pt o4 3 4b p H o w e r e r , t h es t a b i l i t yo fs
12、 u b s t r a t ec o n v e r s i o nr a t ed e c r e a s e ds h a r p l yu n d e rt h ec o n d i t i o no fl a c k i n gt h e 一919b p - 7 8 4b pf r a g m e n to fp r o m t o r , w h i c hs h o w e dt h a tt h et h e 919b p - - - - 7 8 4b pf r a g m e n tm a yh a v et h ef u n c t i o no fe n h a n c
13、e r T oc o n f i r ma n dr e s e a r c ht h ee n h a n c e rf u n c t i o no f 一919b p 7 8 4b pf r a g m e n t ，t h ef u s i o nf r a g m e n tc o n t a i n i n gt h e 一919b p - - - 7 8 4b pa n d - 4 3 4b p 一一1b pf r a g m e n t sw a sa m p l i f i c a t e du s i n gO v e r l a pP C R T h e nt h ef
14、u s i o nf r a g m e n tb o n d e dt oP Y M C D 6v e c t o rt oc o n s t r u c tt h ee x p r e s s i o np l a s m i dP Y O L 9 4 M C D 6 T h er e c o m b i n e dp l a s m i dw a st r a n s f e r r e di n t oS a c c h a r o m y c e sc e r e v i s i a es t r a i n棚3舢9舢8M 608M 1脚Y1 N V S c1 T h eG C M
15、Sa n a l y s i so nt h ep r o f i l eo ft h et o t a lf a t t ya c i ds h o w e dt h a tb o t ho ft h ef u s i o nf r a g m e n ta n dt h e - 4 3 4b p - 1b pf r a g m e n to fA 6 - d e s a t u r a s eg e n ep r o m o t o rc o u l dd r i v e dt h ee x p r e s s i o no fA 6 一d e s a t u r a s eg e n e
16、w h i c hc o n v e r t e dL At oG L A H o w e v e r , t h es u b s t r a t ec o n v e r s i o nr a t ei n c r e a s e ds h a r p l yw i t ht h ef u s i o nf r a g m e n tr a t h e rt h a nt h e - 4 3 4b p lb pf r a g m e n t K e y w o r d s ：y - l i n o l e n i ca c i d , A 6 一d e s a t u r a s e ，p r o m o t o r , e n h a n c e r , r e p o r t e rg e n eI Vl l中文文摘中文文摘哥亚麻酸( G L A ) 是广泛分布于自然界且对人体具有重要生理作用的一种多不饱和脂肪酸。其在调节脂质代谢，抑制血栓形成，降低心率失常，调节血糖及抗肿瘤等方
