《泰山赤鳞鱼BMP11基因表达规律及分子进化研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《泰山赤鳞鱼BMP11基因表达规律及分子进化研究（124页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、B M P l lN JM PM E英文缩略词说明b o n em o t ho g e n e t i cp r o t e i n11n e i g h b o r - j o i n i n gm a x l m um p a r m m o n ym i n i m u m e v o l u t i o nU P G M Au n w e i g h t e dp a i rg r o u pm e t h o dC y t bD l o o pSc a l d w e l l iu s i n ga r i t h m e t i ca v e r a g es d e n t i
2、 c u l a t u sB 1 a t i c e p ss i g r a h a m iS i t i n g iX y u n n a n e n s i sD h u p e i n e n s i s骨形态发生蛋白邻接法最大简约法最小进化法算术平均不加权组对法线粒体细胞色素b线粒体控制区刺鳃倒刺鳃宽头四须伍巴滇池金线鳃抚仙金线鲤云南鲴湖北圆吻鲴关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和
3、使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定。日山东农业大学博七学位论文于闰要泰山赤鳞鱼( V a r i c o r h i n u ss p ) ，是泰山的一种珍贵野生鱼种，肉质分析结果显示泰山赤鳞鱼具有极高的营养价值和特殊的药用价值。为保护这一珍贵的野生鱼种，改良其种质资源，增加其产量，本文首先对泰山赤鳞鱼卵胚胎发育进程和特征进行了观察研究，结果发现泰山赤鳞鱼卵为沉性
4、卵，稍呈粘性，呈橙黄色或淡黄色，未吸水的卵直径为1 6 5m m 1 8 2m m ，吸水后卵径最大达2 3 8m m - - 2 4 5m m 。在水温2 2 5 - - - 2 4 5 的条件下，泰山赤鳞鱼卵历时4 6h5 0m i n 完成整个胚胎发育过程，经过了胚盘形成期、卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官形成期、孵化期7 个主要阶段。初孵仔鱼全长6 咖6 5m m ，肌节数为4 6 “ - - 4 8 ，具心跳、血液循环、无色素。在此基础上克隆了泰山赤鳞鱼B M P l l 的e D N A 序列，并研究了此基因在不同胚胎发育时期及不同组织中的表达状况。从泰山赤鳞鱼的c D N
5、A 中扩增出一条6 4 3 b p 的条带，与斑马鱼的B M P l l 序列同源性高达9 2 3 4 ，证明了此基因在不同物种间有高度的保守性。选择了1 1 个不同的胚胎发育时期研究B M P l l 基因的表达规律，结果表明：B M P l l基因在原肠晚期开始表达，虽然表达量并不恒定，但是在整个胚胎发育期都有表达，证明这是一个胚胎发育的重要基因。另外，检测B M P l l 基因在三个年龄的鱼( 1 龄，2 龄，5 龄) 不同组织中的表达规律。研究表明：不同的年龄阶段表达存在差异，但还存在一些共同的规律：在肌肉、鳃、卵巢、脑中表达量均较高；在脾脏、肾脏、肠中都比较低。为了确定泰山赤鳞鱼的
6、分类地位，并研究泰山赤鳞鱼与本亚科其他鱼类的进化关系，本文克隆了c y t b 和D 1 0 0 p 全序列。结果表明c y t b 全序列为1 1 4 0 b p ，没有插入和缺失，其中单态位点8 2 8 个，多态位点3 1 2 个，占整个序列的2 7 3 7 。碱基含量平均为T2 7 3 、C2 9 1 、A2 9 1 、G1 4 5 ，T + A ( 5 6 4 ) 明显高于G + C ( 4 3 6 ) 。转换明显多于颠换T s T v = 4 6 。基于c y t b 序列的聚类结果表明：四种聚类树上都可明显看出泰山赤鳞鱼和多鳞铲颌鱼聚在一起，二者为同种鱼。从聚类树还可看出所研究的鳃
7、亚科鱼类共聚为5 大支系，分别属于鳃亚科的五个属：突吻鱼属、光唇鱼属、倒刺鲍属、四须鲍属和金线鳃属。在突吻鱼属内泰山赤鳞鱼和多鳞铲颌鱼先聚在一起，然后和白甲鱼聚类，二者关系很近，远远没有达到亚属的分化水平。厚唇鱼和细身光唇鱼个体之间分别聚类后又聚在一起，明显属于同属鱼类：刺鳃和倒刺鳃也是分别聚类后又聚在一起，同属于倒刺缶巴属的不同亚属；金线鳃属两个种聚在一起；宽头四须鳃单独为一类，这与5 属鱼类的地理分布大致吻合。泰山赤鳞鱼与囱巴亚科其他属的亲缘关系为：泰山赤鳞鱼泰山赤鳞鱼B M P l l 基因表达规律及分子进化研究与光唇鱼属的关系最近，其次是倒刺鳃属，与四须鲤属和金线奁巴属的关系都较远。基
8、于本文的研究结果，根据分子钟推断了泰山赤鳞鱼与鲍亚科其他鱼类的分化时间。金线鳃属和泰山赤鳞鱼关系最远( 1 5 2 1 6 5 ) ，分化时间大约是三千二百万年前：其次是四须鲍属( 1 4 2 - - - 一1 5 0 ) ，分化时间大约在二千九百万年前；与倒刺鲍属的分化( 1 3 0 1 4 6 ) 大约在二千八百万年前；光唇鱼属和泰山赤鳞鱼关系最近( 1 0 7 1 3 8 ) ，分化时间大约在二千四百万年前。D 1 0 0 p 全序列约1 0 2 4 b p ，在序列中有一个微卫星存在，因此个体间多态性主要是微卫星核心序列重复数不同造成的。变异位点1 1 个，占整个序列的1 7 4 。碱
9、基含量平均为T3 2 4 、C2 0 8 、A3 3 6 、G1 3 3 。转换稍高于颠换T s T v = 1 5 。根据D 1 0 0 p 全序列分析了泰山赤鳞鱼和多鳞铲颌鱼个体之间的遗传距离为0 一- - 0 5 ，与泰山赤鳞鱼( 0 1 0 6 ) 和多鳞铲颌鱼( O O 5 ) 个体之间的距离几乎一样。而与作为外群的鲮鱼之间的距离分别为：2 0 3 一- - 2 0 8 和2 0 2 - - - 2 0 5 ，也基本上是一样的。从四种聚类图上均可看出，泰山赤鳞鱼和多鳞铲颌鱼聚在一起，两类群之间没有任何分别。本文还利用5 对多态性很好的微卫星引物进行扩增，然后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，利
10、用软件分析了两个群体的基因频率、哈代一温伯格平衡、遗传距离和遗传相似性，发现泰山赤鳞鱼和多鳞铲颌鱼的多态性很差，都是非常纯合的群体。两个群体遗传距离非常小，为O 0 1 1 3 ，而遗传相似性高达0 9 8 8 7 。因此，无论从核外m t D N A c y t b 、D 1 0 0 p 全序列分析，还是从核内D N A 微卫星标记分析均可看出泰山赤鳞鱼和多鳞铲颌鱼聚在一起，二者没有分别。关键词：泰山赤鳞鱼B M P l7 基因表达规律分子进化2山东农业大学博士学位论文A b s t r a c tT h eV a r i c o r h i n u ss p i sa 虹n do fp r
11、 e c i o u sa n dw i l df i s hi nm o u n t a i nT a i ，i t Sm e a th a v eh i g hn u t r i t i o n a lv a l u ea n ds p e c i a lr e m e d yv a l u e I no r d e rt op r e s e r v et h i sr a r es p e c i e s ，s u c ha si m p r o v i n gi t sg e r m p l a s mr e s o u r c ea n di n c r e a s i n gi
12、t sy i e l d ，w eo b s e r v e dc h a r a c t e r i s t i c so fV a r i c o r h i n u ss p e m b r y o sd u r i n gt h ee m b r y o n i cd e v e l o p m e n tp r o c e s s W ef o u n dt h a tt h ee g g sw e r es i n k a b l e ，s l i g h t l ys t i c k ya n d 谢t hc o l o ro fo r a n g eo ry e l l o w
13、 i s h B e f o r es w e l l i n g ，e g g sw e r e1 6 5m m “ - 1 8 2n l l T li nd i a m e t e r , a n dt h ed i a m e t e ro fs w e l l e de g g sw e r e2 38m m - 2 4 5如m U n d e r2 2 5 2 4 5 o fw a t e r , i tt o o k4 6h o u r sa n d5 0m i n u t e sf o rt h ef e r t i l i z e de g g st oh a t c h T
14、h ee m b r y o n i cd e v e l o p m e n tp r o c e s sc o u l db ed i v i d e di n t os e v e ns t a g e s ，i n c l u d i n gb l a s t o d e r mf o r m a t i o n ，c e l lc l e a v a g e ，b l a s t u l a ，g a s t r u l a ，n e u r a l ，o r g a nf o r m i n ga n dh a t c h i n gs t a g e T h et o t a l
15、l e n g t ho fn e w l yh a t c h e dl a r v a ew e r e6m m 4 - 6 5m ma n dt h em y o m e r e sw e r e4 6 “ - - 4 8 ，a n di th a dh e a r t b e a ta n db l o o dc i r c u l a t i o n ，b u tn op i g m e n ti nb o d y T h es e q u e n c eo fB M P llg e n ew a sc l o n e df r o mV a r i c o r h i n u ss
16、 p e D N A ，a n di t se x p r e s s i o ni nd i f f e r e n ts t a g e so fe m b r y o n i cd e v e l o p m e n ta n do fd i f f e r e n tt i s s u e sw e r ee x a m i n e d T h eV a r i c o r h i n u ss p B M P ll ( 6 4 3 b p ) h a sas e q u e n c eh o m o l o g yo f9 2 3 4 t oz e b r a f i s hB M P I1 ，w h i c hd e m o n s t r a t e dt h eg e n ew a sh i g h l yc o
