《NFκB、Notch1和Ki67在结肠癌中的表达及其意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《NFκB、Notch1和Ki67在结肠癌中的表达及其意义（60页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 l ( i 6 7 在结肠癌中的表达及粪0 盟8 8 9 14 0j f | I I f I f | J f f f J j I I j J I J | f f J 舢| l f f I f f I | 洲摘要N F 一1 出、N o t c h 1 和K i 6 7 在结肠正常粘膜、的表达，探索N F r B 、N o t c h 1 和飚6 7 与结肠癌发生发展的关系以及它们之间的相关性，为结肠癌的临床诊疗与预后判断提供有参考价值的指标。方法：收集泸州医学院附属医院病理科2 0 0 8 年1 2 月“ - 2 0 1 0 年1 月存档蜡块11 0 例为实验组，其中结肠腺瘤2 0 例；结肠
2、癌9 0 例，包括高分化腺癌4 5 例，中分化腺癌3 3 例，低分化腺癌1 2 例。同时在结肠腺瘤组或结肠癌组中随机取距病变组织5 c m 以上的结肠正常粘膜组织1 0 例作为对照组。每例标本组织学类型均经病理诊断证实。应用免疫组化S P 法检测N F r , B 、N o t c h - 1 、K i 6 7 在结肠粘膜不同病变组织中的表达情况。采用S P S S l 7 0 统计软件分析，计数资料采用卡方检验及F i s h e r 精确概率法检验，非参数统计采用秩和检验，相关性分析采用S p e a r m a n 等级4 7 2 2 、7 5 6 ，K i 6 7 在结肠癌组中的阳性表
3、达率高于结肠腺瘤组及正常粘膜组( X 2 = 7 2 7 5 ，1 3 2 2 8 ) ，差异有统计学意义( 正O 0 5 ) 。( 2 )N F r B 的表达与结肠癌大小、不同侵袭深度，有、无淋巴结转移及分化程度有关( 萨O 0 5 ) ，与患者年龄、性别、组织学类型无明显关系( 矿O 0 5 ) ；N o t c h 1 的阳性表达率与结肠癌大小、分化程度显著相关( 序0 0 5 ) ，与患者的性别、年龄、淋巴转移无明显相关性( 矿O 0 5 ) ；飚6 7 的阳性表达率与结肠癌的组织分化程度及有、无淋巴结转移有关( p _ 5 c m ，6 6 例， 0 0 51 2 主要实验试剂1
4、) N F r B 兔抗人多克隆抗体2 ) N o t c h ld 鼠抗人单克隆抗体3 ) K i 一6 7 羊抗人多克隆抗体( S a n t aC r u z )( S a n t aC r u z )( S a n t aC r u z )4 ) S P 免疫组化系列工作液试剂盒5 ) D A B 显色试剂盒6 ) P B S 缓冲液7 ) 枸橼酸盐缓冲液( P H = 6 O )8 ) D A B 底物工作液9 ) I B S A1 3 主要实验器材( 北京中杉)( 北京中杉)( 碧云天)( 碧云天)( 北京中杉)( s i g m a )1 ) 石蜡切片机( L E L C A R
5、 M 2 1 3 5 ，德国莱卡)2 ) 电热恒温鼓风干燥箱( D H G 9 0 7 0 ，上海益恒)3 ) 酸度计( P H S 。3 C ，成都方舟)4 ) 超低温冰箱( 日本S A N Y O )5 ) 压力蒸汽消毒器( 成都成华区消毒设备厂)6 ) 高压蒸气锅( 浙江苏泊尔)7 ) 倒置显微镜( O L M P U SB X 6 0 )8 ) 计算机彩色病理图像系统( G D 1 0 ，成都电子科大)2 实验方法操作程序：2 1 结肠粘膜标本H E 染色制作石蜡切片：所有蜡块经大体观察后连续切片厚度4 1 x r n ，H E染色，高倍镜下观察。2 2 免疫组化实验方法操作步骤1 )
6、 所有石蜡标本常规4 t t m 连续切片后，放于6 7 。C 烤箱过夜；2 ) 常规脱蜡、水化：切片浸入5 0 。C - 甲苯I 、I I 中脱蜡2 0 m i n ，然后依次置入1 0 0 、1 0 0 、9 5 、8 0 、7 0 梯度乙醇中，每步为1 0 m i n ；3 ) 抗原修复：切片浸入枸橼酸盐缓冲液中( P H 6 O ) ，经微波炉加热至沸腾后断电，间隔5 m i n 后反复2 次，自然冷却后P B S 洗涤3 m i n x 3 次；4 ) 3 H 2 0 2 去离子水室温中孵育5 m i n ，以消除内源性过氧化物酶活性；5 ) P B S 冲洗，3 m i n x 3
7、 次；6 ) 吸去切片上组织周围多余液体，I B S A 封闭，3 7 。C 湿盒内孵育1 5 m i n ，倾去，勿洗；7 ) 滴加一抗工作液：兔抗人N F r d 3 ( 1 ：1 0 0 ) 、小鼠抗人N o t c h 1( 1 ：1 0 0 ) 、羊抗人戤6 7 ( 1 ：1 0 0 ) ，4 。C 过夜；8 ) P B S 冲洗，3 m i n x 3 次；9 ) 滴加第二代生物素标记的二抗工作液，3 7 。C 湿盒内孵育3 0 m i r a1 0 ) P B S 冲洗，3 m i n x 3 次；1 1 ) 滴加辣根酶标记链酶卵白素工作液，3 7 。C 湿盒内孵育1 5 m i
8、 n ：1 2 ) P B S 冲洗，3 m i n x 3 次；1 3 ) D A B 显色剂显色；1 4 ) 自来水充分冲洗；1 5 ) 苏木精复染；1 6 ) 自来水充分冲洗；17 ) 常规梯度酒精脱水：7 0 乙醇5 m i n - 8 0 乙醇5 m i n - 9 0 乙醇5 m i n - 无水乙醇5 m i n - 无水乙醇5 m i n ；1 8 ) 吹干，透明：二甲苯5 m i r a1 9 ) 加拿大胶封片，显微镜下观察。阴性对照采用P B S 代替一抗。3 免疫组化结果判定染色结果判断标准：按照M a r u y 锄a 等嘲提出的判断方法，以细胞膜、细胞质、细胞核中出现
9、淡黄色或棕黄色颗粒为阳性表达，每张切片随机观察5 个视野，取均值，表达率 1 0 的细胞为阳性细胞。N F r B 以细胞质及细胞核内特定部位出现棕黄色颗粒，染色强度高于背景的非特异性染色判定为阳性细胞；N o t c h 1 以细胞质及细胞核内特定部位出现棕黄色颗粒，染色强度高于背景的非特异性染色判定为阳性细胞；K i 6 7 以细胞核内特定部位出现棕黄色颗粒，染色强度高于背景的非特异染色判定为阳性细胞。4 统计学分析本实验数据经S P S S l7 0 统计软件分析。计数资料样本率之间的比较分析采用卡方检验腑h e r 精确概率法检验，非参数统计分析采用秩和检验，相关性分析采用S p e
10、a r m a n 等级相关分析法。1lIIJlJfllIIIlIIijli_图1N F r , B 在正常结肠中的表达图2 6 7 在正常结肠中的表达( S P x 2 0 0 )( S P x 2 0 0 )F i g 1T h ee x p r e s s i o no f N F - r Bi nF i g 2T h ee x p r e s s i o no fK i 一6 7i n n o r m a lc o l o nm u c o s a( S P 2 0 0 )图3N o t c h 1 在正常结肠中的表达( S P x 2 0 0 )F i g 3T h ee x p r
11、 e s s i o no f N o t c h - 1i n( S P x 2 0 0 )1 5n o r m a lc o l o nm u c o s a( S P x 2 0 0 )1 2N F r B 免疫组化染色阳性细胞分布N F r , B 阳性染色均定位于细胞质，亦可见于胞核，为粗细不一的棕黄至棕褐色颗粒，阳性细胞呈片状、弥漫或灶状分布。N F r B 在结肠腺瘤、不同分化程度的结肠癌中阳性细胞数逐渐增多( 图4 7 ) 。图4N F - r B 在结肠腺瘤中的表达( S P x 2 0 0 )F i g 4T h ee x p r e s s i o no f N F r
12、Bi n c o l o na d e n o m a s( S P 2 0 0 )图5N F r , B 在结肠高分化腺癌中的表达( S P x 2 0 0 )F i g 5T h ee x p r e s s i o no f N F - r , Bi nw e l l d i f f e r e n t i a t e dc o l o nc a n c e r( S P x 2 0 0 )图6 N F - r B 在结肠中分化腺癌中的表达图7 N F - r , B 在结肠低化腺癌中的表达 (SPx200)(SPx200)F i g 6T h ee x p r e s s i o no
13、 f N F - r , Bi nm o d e r a t e l yd i f f e r e n t i a t e dc o l o nc a n e r( S P x 2 0 0 )1 6F i g 7T h ee x p r e s s i o no f N T 一1 c Bi np o o r l yd i f f e r e n t i a t e dc o l o nc a n c e r ( S P x 2 0 0 )图8N o t c h l 在结肠腺瘤中的表达图9N o t c h l 在结肠高分化腺癌中的表达( S P x 2 0 0 )F i g 8T h ee x
14、 p r e s s i o n0 一一1-图1 在结肠中分化腺癌中表达图在结肠低分化腺癌中表达1 4K i 6 7 免疫组化染色阳性细胞分布K i 6 7 阳性染色主要定位于细胞核内，呈黄色或棕褐色，在结肠腺瘤、不同分化程度的结肠癌中染色逐步增强( 图1 2 1 5 ) 。图1 2K i 6 7 在结肠腺瘤中的表达( S P x 2 0 0 )F 谵12T h ee x p r e s s i o no fK i - 6 7i nc o l o na d e n o m a s( S P x 2 0 0 )图1 3K i - 6 7 在结肠高分化腺癌中的表达( S P x 2 0 0 )F
15、i g 1 3T h ee x p r e s s i o no f K i 一6 7i nw e l l d i f f e r e n t i a t e dc o l o nc a n c 睨“( S P x 2 0 0 )图1 4K i - 6 7 在结肠中分化腺癌中的表达图1 5K i - 6 7 在结肠低分化腺癌中的表达 (SPx200)(SPx200)F i g 1 4T h ee x p r e s s i o no f K i - 6 7i nm o d e r a t e l yF i g 1 5T h ee x p r e s s i o no f K i 一6 7i n
16、d i f f e r e n t i a t e dc o l o nc a n c , g Tp o o r l y - d i f f e r e n t i a t e dc o l o n n c e r(SPx200)(SPx200)1 5( X 2 = 3 0 8 2 ，t 9 = 0 0 7 9 ) 。N F r B 在正常粘膜与结肠腺瘤组中的表达，差异无统计学意义( 存2 0 6 0 ，网1 5 1 ) 。N o t c h 1 在结肠正常粘膜一腺瘤一癌序列中的表达率呈逐步递增趋势，阳性率分别为2 0 、5 5 、6 2 2 。N o t c h 1 在结肠癌组中的表达率高于正常粘膜组( X 2 = 6 5 8 6 ，p O 0 5 ) ，与结肠腺瘤组相比，差异无统计学意义( X 2 = 0 3 5 8 ，p
