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1、目录一、摘要中文论著摘要1英文论著摘要3二、英文缩略语5三、论文前言6日I J舌O材料和方法8结果1 4讨论1 9结论一2 1四、本研究创新性的自我评价2 2五、参考文献2 3六、附录综述2 6在学期间科研成绩3 4致谢3 5个人简介3 6中文论著摘要不同剂量G L P 1 对I U G R 幼鼠胰岛I j I 细胞的保护作用目的研究生后早期皮下注射不同剂量的胰高血糖素样肽1 ( G L P 1 ) 对宫内发育迟缓( I U G R ) 幼鼠的胰岛B 细胞的P D X 1 和B C L 2m R N A 表达情况，探讨G L P 1对I U G R 幼鼠的胰岛D 细胞的保护作用，以及G L P
2、 1 对I U G R 幼鼠胰岛p 细胞的最佳保护剂量。方法普通系雌性W i s t a r 处女大鼠9 0 只，雄性1 5 只，体重2 2 0 2 5 0 克，按雌雄6 ：l ，于前一天傍晚合笼。次晨取雌鼠阴道分泌物涂片，以显微镜下检出精子为妊娠第1 天，并分笼单独饲养，选择自然分娩。胎仔I U G R 诊断标准：以对照组活仔平均体重减去2 个标准差作为I U G R 的诊断标准。给予孕期I U G R 组母鼠喂养7 低蛋白饲料建立I U G R 幼鼠模型，哺乳期给予2 0 蛋白普通饲料喂养；对照组( C组) 母鼠孕期及哺乳期全程给予2 0 蛋白普通饲料喂养。I U G R 幼鼠随机分为四组
3、：2 0 u g k gG L P 一1 皮下注射组( 简称I U G R 2 0 组) ；( 喜) 6 0 u g k gG L P 一1 皮下注射组( 简称I U G R 6 0 组) ，1 0 0 u g k gG L P 1 皮下注射组( 简称I U G R l 0 0 组) ， I U G R 空白对照组，不进行任何干预( 简称I U G R 组) 。每组1 6 只I U G R 幼鼠。于生后1 周和3 周取出胰腺，R e a l t i m eP C R 法检测新生幼鼠胰腺P D X 1 和B C L 2m R N A 表达情况。结果1 、空腹血糖和血浆胰岛素：生后7 天和2 1
4、天，C 组、I U G R 组、I U G R 2 0组、I U G R 6 0 组和I U G R l 0 0 组幼鼠的空腹血糖和血浆胰岛素较出生1 天时没有显著性变化，无统计学差异( P 0 0 5 ) 。2 、P D X 一1m R N A 表达：生后1 周时，C 组幼鼠胰腺的P D X 1m R N A 表达显著高于I U G R 组、I U G R 2 0 组、I U G R 6 0 组和I U G R l 0 0 组( P 0 0 5 ) 2 、P D X lm R N Ae x p r e s s i o n ：7d a y sa f t e rb i r t h ，P D X
5、- 1m R N Ae x p r e s s i o no fi s l e t1 3 - c e l lo fCg r o u pr a t sW a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nI U G Rg r o u p I U G R 2 0g r o u p ，I U G R 6 0g r o u pa n dI U G R l0 0g r o u p ( p 0 0 5 ) 。( 见表1 ，2 和图2 ，3 ) 。与C 组相比，枣P 0 0 5 ) 。随着日龄的增加，生后7 天和2 l 天，各组幼鼠空腹血糖和血清胰岛素较基础水平无明
6、显变化( P O 0 5 ) ( 见表3 ，4 ) 。表4 ，生后1 、7 、2 1 天，各组幼鼠的血清胰岛素的比较( p m o l L )二、P D X - 1m R N A 和B C L 2m R N A 的表达1 生后7 天时，C 组幼鼠胰腺的P D X 1m R N A 表达显著高于I U G R 组、I U G R 2 0 组、I U G R 6 0 组和I U G R l 0 0 组( 宰P O 0 5 ) ；I U G R l 0 0 组与I U G R 组相比，明显升高( j | j P 0 0 5 ) 。( 见表5 和图4 ) 。表5 ，生后7 天，各组幼鼠胰腺P D X
7、1m R N A 的表达与C 组相比，P 0 0 5 ，与I U G R 组相比，群P 0 0 51 6C 组I I J G RI U G R 2 0I U G R 6 0I U G R l 0 0 分组与C 组相比，幸P 0 0 5 ，与I U G R 组相比，撑P 0 0 5图4 ，生后7 天，各组幼鼠胰腺P D X 1m R N A 的表达2 生后2 l 天时，C 组幼鼠胰腺的P D X 1m R N A 也同样显著高于I U G R 组、I U G R 2 0 组、I U G R 6 0 组和I U G R l 0 0 组( P O 0 5 ) ；I U G R 6 0 组和I U G
8、 R l 0 0 组显著高于I U G R 组( 拌P 0 0 5 ) 。( 见表6 和图5 ) 。表6 ，生后2 1 天，各组幼鼠胰腺P D X 1m R N A 的表达C 组I U G R 组I U G R 2 0 组I U G R 6 0 组I U G R l 0 0 组P D X 1 m R N A ( ) 一7 9 3 6 士7 8 73 6 1 2 士3 3 8 4 2 3 6 士4 4 7 6 0 4 6 士6 2 4 哗6 8 5 3 ：t = 6 5 5 噌与C 组相比，P 0 0 5 ，与I U G R 组相比，群P 0 0 5金 金 芝 7蓉 e Z管一 山 e - -
9、, 山c 组I I J G RI I J G R 2 0I I J G R 6 0I I J G R l 0 0分组与C 组相比，P 0 0 5 ，与I U G R 组相比，撑P O 0 5图5 ，生后2 1 天，各组幼鼠胰腺P D X - 1m R N A 的表达3 生后7 天时，C 组幼鼠胰腺的B C L 2m R N A 表达显著高于I U G R 组、1 7舌；舯加印的如埔04 生后2 1 天时，C 组幼鼠胰腺的B C L 2m R N A 表达显著高于I U G R 组、I U G R 2 0 组、I U G R 6 0 组和I U G R l 0 0 组( 毒P 0 0 5 ) ；
10、I U G R 6 0 组和I U G R l 0 0 组显著高于I U G R 组( 群P 0 0 5 ) 。( 见表8 和图7 ) 。表8 ，生后2 l 天，各组幼鼠胰腺B C L 2m R N A 的表达与C 组相比，掌P 0 0 5 ，与I U G R 组相比，挣P 0 0 51 8C 组I U G RI U G R 2 0I U G R 6 0I U G R l 0 0 分组与C 组相比，宰P 0 0 5 ，与I U G R 组相比， fP 0 0 5图7 ，生后2 1 大，各组幼鼠胰腺B C L 2m R N A 的表达讨论宫内发育迟缓胎J I , ( I U G R ) 是一种常
11、见的妊娠并发症，它不仅影响胎儿的发育，也影响儿童期及青春期的体能与智能的发育。近年来的流行病学统计和实验研究均提示：I U G R 是造成胰岛素抵抗、2 型糖尿病、代谢综合征及心血管疾病的重要原斟2 1 ，2 2 1 。本实验通过低蛋白饮食建立了I U G R 模型，并对I U G R 组小鼠出生后进行了不同剂量的G L P 1 的治疗干预。G L P 1 是一种主要由远端回肠、直肠和结肠的L 细胞分泌的一种生理性多肽激素其有促胰岛素分泌作用最强，G L P 1 具有葡萄糖依赖性促进胰岛素分泌作用【2 3 】，并且低剂量持续性注射G L P 1 可使D细胞对葡萄糖的反应性恢复正常【2 4 】。
12、1 G L P 1 干预对G R 小鼠的体重及胰腺发育的影响结果显示无论是出生后一周还是三周G L P 1 干预组大鼠的体重和胰腺的重量均较对照组低( P o 0 5 ) ，这说明低蛋白饮食对胎儿的发育和胰腺的发育产生了严重影响。陈璐f 2 5 】等对I U G R 新生大鼠生长发育情况观察发现，不仅其体重低于正常组，且胰重和胰重体重比值也都明显低于正常组，提示营养不良状况，他们对新生大鼠胰腺组织作了免疫组化，染色切片分析发现，I U G R 组胰腺组织中胰岛的面积、数量及胰岛素染色所占阳性率均小于正常新生大鼠，说明I U G R 组胰岛p 细胞群数目明显减少，与胰腺重量下降的变化一致。可见，
13、妊娠晚期母体1 95：舳加加mO2a乳oN，一uvz篮叠釉，lu的宫内状况对子代胰腺组织的发育至关重要，这也印证了“节俭表现型”假说中所提出的宫内“程序化”发育理论。V a h lT P 等实验也发现【2 6 】，G L P 1 的G 蛋白受体被激活后，G 蛋白B 、Y 亚基通过磷脂酰肌醇3 激酶( P 1 3 K ) 及其下游激酶一细胞外信号调节激酶( E R K ) I 2 、p 3 8 丝裂原活化蛋白激酶( M A P K ) 的信号通路，诱导B 细胞的增殖和分化。在G L P 1 促进p 细胞增殖的机制中P 1 3 K 可能起关键作用。本实验同时发现即使出生后使用G L P 1 进行注
14、射干预，仍然无法使胰腺和体重恢复至正常水平。尽管，在啮齿类动物和人类胰岛细胞的体外研究中发现，G LP 1 可以通过促进p 细胞生长和抑制p 细胞凋亡，可提升D 细胞质量。但是却无法完全恢复胰腺的正常形态和大小。S c a g l i aL t 掩1 等研究表明胰岛在围生期发育过程中会发生重构，胎儿期和生后早期是胰岛重构的关键时期，种属不同，胰岛的重构及时间也不同，低蛋白饮食会影响胰腺的发育从而进一步影响胰腺功能而导致糖尿病的发生。这也提示宫内环境，甚至生后早期环境，会对维持发育期胰岛的正常形态乃至功能产生重要影响。2 G L P 1 对I U G R 小鼠胰腺功能的影响出生后7 天，I U G R l 0 0 组与I U G R 各组相比，P D X 1m R N A 表达和B C L 2m R N A 表达均明显升高。而I U G R 2 0 组、I U G R 6 0 组和I U G R 组之间P D X 1m R N A和B C L 2m R N A 的表达，却无明显统计学差异，这说明尽管注射G L P 1 胰腺的重量并未发生变化，但是应用足够剂量的G L P 1 对胰岛功能却产生了影响，因此，G L P 1 对出生后I U G R 小鼠的胰腺功能的恢复是有效的。适当的增大G L P 1的剂量可以促进胰岛功能的恢复。V a h lT P 等【
