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1、东北农业大学本科实验课程教学大纲东北农业大学本科实验课程教学大纲食品微生物学实验食品微生物学实验Experiments of Food Microbiology一、实验课程课号：一、实验课程课号：10600016js适用专业：食品科学与工程、粮食工程理论课程总学时：56实验总学时（周学时）：32（4）学分：1.0开出实验个数：（验证实验 5 个；综合实验 2 个；设计实验 0 个；创新性实验 0 个）应开实验学期：二、实验课程简介二、实验课程简介食品微生物学实验是食品科学与工程专业的学科基础课程实验课，与主干理论课程食品微生物学配套，其任务是使学生掌握必要的食品微生物学实验的基础知识和基本理论
2、，并与理论课程相关内容结合，使学生掌握有关食品微生物学实验的技术与方法。食品微生物实验课是对理论教学讲授的某些内容的验证和综合，通过实验使学生增强动手能力。实验主要内容包括：显微镜的使用方法、微生物的染色方法和观察，细菌的分离、纯化和鉴定，常用的菌数测定方法和乳品发酵剂的制作和鉴定等。三、实验教学目标及基本要求三、实验教学目标及基本要求实验教学的目标是通过实验，验证课堂上讲解的理论知识，加深对理论课程的理解，建立无菌观念和锻炼学生的动手能力，提高综合实验技能解决实际问题的能力。 课程的基本要求是熟练掌握细菌的染色和观察技术，掌握微生物的培养方法和常用的计数技术，以及菌种的分离、纯化、保藏和扩培
3、方法。四、教材及主要参考书四、教材及主要参考书1教材食品微生物学实验指导李铁晶，许岩主编，2006/9，东北农业大学自编教材2主要参考书食品微生物实验室手册 （第三版）英W.F.Harrigan 著，2004/4，李卫华等译现代食品微生物学实验技术刘慧主编，2006/7，中国轻工业出版社五、考核办法五、考核办法课堂提问，课堂表现，实验报告成绩与实际操作能力考察相结合的考核办法；并在食品微生物学论理课程考试中考察相关的实验理论。大纲主撰人：李铁晶（一）实验项目 1显微镜的构造和使用方法及细菌的革兰氏染色1实验特点实验类型：验证 实验类别：专业基础 计划学时：4 学时 每组人数：1 首开日期：2实
4、验目的与要求（1）了解普通光学显微镜的构造、学会显微镜使用和维护方法。（2）掌握细菌涂片技术、革兰染色方法及其原理。（3）熟悉细菌的基本形态。3主要仪器设备 序号主要仪器设备名称型号规格数量 1光学显微镜30 2铂耳环30 3酒精灯304实验内容提要（1）显微镜的构造和使用（3）细菌染色涂片的制备（3）细菌革兰氏染色操作（4）细菌形态的观察5实验操作要点（1）观察细菌的基本步骤：先用低倍镜再用高倍镜（2）革兰氏染色法操作：涂片干燥固定草酸铵结晶紫出染水洗碘液媒染水洗乙醇脱色水洗沙黄复染水洗滤纸吸干油镜观察6注意事项（1）细菌制片时不宜涂厚。（2）严格控制脱色和染色时间。（3）显微镜的维护。（二
5、）实验项目 2培养基的制备1实验特点实验类型：验证 实验类别：专业基础 计划学时：4 学时 每组人数：1 首开日期：2实验目的与要求（1）掌握一般培养制备原理及原则，并学会配制一般普通培养基操作过程。（2）学习微生物实验室常用灭菌设备的使用方法。（3）学习玻璃器皿的包扎方法。3主要仪器与设备序号主要仪器名称型号规格数量 1高压灭菌锅全自动1 2干热灭菌箱1 3台式天平34实验内容提要（1）液体培养基的制备（2）固体培养基的制备（3）微生物实验室常用灭菌设备的使用方法和灭菌方法（4）平皿和吸管的包扎方法（5）棉塞的制作方法 5实验操作要点配料温水溶解校正 pH 值煮沸加琼脂融化过滤分装加棉塞包扎
6、灭菌无菌检查（液体培养基制备时不加琼脂）6注意事项（1）配制培养基要注意操作程序，注意先校正 pH 值，后加琼脂。（2）湿热灭菌中，高压锅要注意排尽空气；灭菌后压力降至 0 以下才能打开灭菌锅。（3）干热灭菌时，105关闭气门；灭菌后温度降至 60以下才能打开舱门。（三） 实验项目 3细菌的分离纯化与生理生化反应试验1实验特点实验类型：综合 实验类别：专业基础 计划学时：8 学时 每组人数：1 首开日期：2实验目的与要求（1）学习和掌握微生物各种分离方法及纯培养方法。（2）根据细菌在培养基中生理生化特点，学习鉴定细菌的方法。3主要仪器与设备序号主要仪器名称型号规格数量 1恒温培养箱DH6000
7、A 型1 2超净工作台SW-CT-IFD14实验内容提要（1）平板划线分离（2）可疑菌落的镜检和纯培养（3）生化鉴定（4）微生物的液体接种和穿刺接种方法5实验操作要点样品稀释划线分离培养选取可疑菌落镜检斜面接种生化鉴定结果判定 6注意事项（1）平板划线分离时，待测样品应适当稀释，使细胞分散容易得到单菌落，分离操作中勿划破培养基表面。（2）挑取中等大小可疑菌落的一半镜检，另一半进行纯培养。（3）半固体培养基穿刺培养应注意穿刺线不能完全穿透培养基。（4）沿试管壁缓慢滴加吲哚试剂，防止出现假阴性。（四） 实验项目 4食品中常见菌类的观察与霉菌的小室载片培养1 实验特点实验类型：验证 实验类别：专业基
8、础 计划学时：4 学时 每组人数：1 首开日期：2 实验目的与要求（1）观察并描绘食品中常见微生物的菌落形态和菌体形态。（2）掌握霉菌的小室载片培养法，以便观察菌丝形态。3 主要仪器与设备序号主要仪器名称型号规格数量 1高压灭菌锅手提式3 2恒温培养箱3 3显微镜304实验内容提要（1）细菌、酵母菌和霉菌菌落形态的观察（2）水浸片法观察酵母菌的菌体形态（3）霉菌的小室载片培养方法（4）霉菌菌丝形态的观察5实验操作要点 （1）水浸片法：载玻片滴一滴生理盐水接菌盖上盖玻片镜检（2）细菌及酵母菌菌落形态的描述包括：大小、颜色、隆起度、边缘、光泽、透明度、表面形状、形状、质地、味道等（3）霉菌菌落形态
9、观察：大小、颜色、组织状态（4）小室培养：载玻片滴一滴培养基接种盖上盖玻片置于小室培养（5）以低/高倍镜观察霉菌的菌丝和孢子6注意事项（1）仔细观察并详细描述菌落特征（2）水浸片法加盖玻片时注意防止气泡产生（3）小室培养接种时注意将霉菌接种于培养基的周围，压片时用力均匀，避免培养基移动，并在培养过程中注意保持小室的湿度。（五） 实验项目 5细菌的平板菌落总数测定1实验特点实验类型：验证 实验类别：专业基础 计划学时：4 学时 每组人数：2 首开日期：2实验目的与要求学习并掌握稀释倾注法检验菌落总数的程序和方法。3主要仪器与设备序号主要仪器名称型号规格数量 1微波炉2 2超净工作台SW-CT-I
10、FD2 3恒温培养箱DH6000A 型24实验内容提要（1）样品的处理和无菌称量（2）1:10 倍比稀释方法（3）稀释倾倒法培养细菌5实验操作要点 无菌称样系列稀释加样倒平板混匀恒温培养计数报告6注意事项（1）称取样品时注意无菌操作。（2）系列稀释时，注意吸管尖端不要触及管内稀释液。（3）倒平板时琼脂温度适宜，并立即混匀。（六） 实验项目 6大肠菌群的测定1实验特点实验类型：验证 实验类别：专业基础 计划学时：4 学时 每组人数：2 首开日期：2实验目的与要求学习并掌握大肠菌群检验程序和方法。3主要仪器与设备序号主要仪器名称型号规格数量1恒温培养箱DH6000A 型22显微镜303超净工作台S
11、W-CT-IFD24实验内容提要（1）乳糖胆盐初发酵试验（2）EMB 鉴别培养和革兰氏染色（3）乳糖复发酵试验5实验操作要点 无菌称样系列稀释乳糖胆盐发酵EMB 鉴别培养复发酵试验报告6注意事项（1）称取样品时注意无菌操作。（2）EMB 平板上可疑菌落的特征。（3）阳性管数的确定以复发酵实验为依据。（七）实验项目 7乳酸菌发酵剂的制作与微生物显微镜直接计数实验类型：综合 实验类别：专业基础 计划学时：8 学时 每组人数：1 首开日期：1实验特点实验类型：综合 实验类别：专业基础 计划学时：2 每组人数：4 首开日期：2003.92实验目的与要求（1）学习直接涂片计数法和利用血球计数器进行微生物
12、计数的方法。（2）了解乳酸菌某些品系的个体形态与菌落特征，掌握乳品发酵剂一般制作程序及其品质鉴定方法。3主要仪器与设备序号主要仪器名称型号规格数量1血球计数器XB-K102显微镜303物镜测微尺104实验内容提要（1）乳酸菌个体形态和菌落特征的观察（2）乳品发酵剂制作（3）血球计数器计数法测定酵母菌的菌数（4）物镜测微尺的使用（5）直接涂片计数测定乳品发酵剂的活力5实验操作要点（1）乳酸菌的观察：革兰氏染色法观察菌体特征，利用低倍镜观察平板上乳酸菌的菌落特征。（2）乳品发酵剂制作菌种活化原培养物中间酵剂母发酵剂生产发酵剂（3）血球计数法：酵母菌样品倍比稀释血球计数器盖上特制盖玻片加样静置显微镜计数（4）直接涂片法：乳酸菌样品倍比稀释涂片染色镜检计数6注意事项（1）革兰氏染色涂片不宜过厚，且乙醇脱色时间控制应适宜，否则不宜辨认菌体。（2）血球计数时，注意计数显微镜视野中不同深度的菌体。（3）血球计数器、物镜测微尺使用后，勿用硬物洗刷。（4）直接涂片操作时，取菌样 0.01ml 时要精准，并精确涂布于 1cm2格内，否则菌体计数误差极大。
