《产纤维素酶放线菌的筛选及其产酶条件与酶学性质初探》由会员分享，可在线阅读，更多相关《产纤维素酶放线菌的筛选及其产酶条件与酶学性质初探（66页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、四川师范大学硕士学位论文产纤维素酶放线菌的筛选及其产酶条件与酶学性质初探细胞生物学专业研究生陈文祥指导教师宗浩从食用菌栽培下脚料废弃物中筛选分离到1 0 株能在以纤维素( C M C N a )为唯一碳源的筛选培养基上生长，采用刚果红鉴别培养基作进一步识别，获得透明圈较大的菌株5 株。在此基础上，进行液体培养，测定酶活，得到1 株酶活较高的菌株，命名为c s 7 9 1 2 。对其形态学、细胞化学组分和生理生化特征进行研究，经初步鉴定归为链霉菌属( S t r e p t o m y c e s ) 。对其产酶条件进行研究，结果表明；接种量1 5 ，培养基装量2 0 。培养基起始p H 值5
2、2 ，培养温度3 0 ，n = 1 2 5r m i t t - 1 ，正交优化后培养基组分；C M C - N a7 5g - L “ 1 、滤纸2 5g - U 1 、黄豆粉l o g - L - 1 、C a C l 2 2 H 2 00 3g - U 1 、M g s 0 4 7 H 2 0 0 2 5 9 L 1 、K I - 1 2 1 0 4 4 9 - L “ 1 ，液体发酵培养5 d ，C M C a A c t i v i t y达到7 ，2 5r U m L 1 ，培养6 d ，滤纸酶活( F i l t e rP a p e r A c t i v i t y , F
3、e A ) 姻J 2 5i u m L a 。菌株c s 7 9 1 2 在最适条件下发酵所产粗酶液的最适反应p H 值为5 2 左右；最适反应温度为5 0 “ C 左右，温度达到7 0 ，酶将基本失去活性；M n 2 + ，C 0 2 能较大的激活酶的活性，Z n 2 + ，C u “，A g + ，H 孑+ 明显的抑制了酶的活性。关键词：放线菌；纤维素酶；筛选：酶活产纤维素酶放线菌的筛选及其产酶条件与酶学性质初探S c r e e n i n go fC e l l u l o s e - D e g r a d i n gA c t i n o m y c e sS t r a i na
4、 n dS t u d i e sO nE n z y m e P r o d u c i n gC o n d i t i o n sa n dC h a r a c t e r so fE n z y m eA c t i v i t yM a j o y ：c e l lb i o l o g yG r a d u a t e ：C h e nW e n x i a n gS u p e r v i s o r ：Z o n gH a oT e ns t r a i n so fm i c r o o r g a n i s mw h i c hg a l lg r o wi nw h
5、i c hC M C - N aa su n i q u ec a r b o ns o n r w e r ei s o l a t e df r o mo f f a lf r o mp l a n t i n gm u s h r o o m F i v ec o l o n i e sw e r eg o ts u r r o u n d e db ys o m ed i s t i n c tz o n t _ 5o fc l e a r i n gi nc e l l u l o s e c o n g or e da g a rm e d i u m B ym e a s u r
6、 i n gt h ee n z y m ea c t i v i t yo fl i q u i dc u l t u r ef i l t r a t e s ，w eg o tas t r a i nw i t hh i g h e rc e l l u l o s ea c t i v i t y I tw a sn a m e dc s 7 9 1 2 I t sm o r p h o l o g i c a l ，e y t o c h e m i e a l ，p h y s i o l o g i c a la n db i o c h e m i c a lc h a r a
7、 c t e r sw e r es t u d i e d I tW a sf o u n dt h a ti tb e l o n g st o ( S t r e p t o m y c e s ) 。I t se n z y m e - p r o d u c i n gc o n d i t i o n sW a ss t u d i e d T h er e s u l t ss h o w e dt h a t1 5 o fi n o c u l a t i o n , m e d i u mv o l u m e2 0 t h eo p t i m a lt e m p e r
8、 a t u r ea n dp Ha “ 3 0 “ Ca n d5 2 ，n = 1 2 5r m i n - 1 , o r t h o g o n a lo p t i m a lm e d i a ：C M ( H 妇7 5g L 1 、F i l t e rp a p e r2 5g L 1 、S o y b e a np o w d e r1 0g L 1 、C a C l 2 2 H 2 00 3g L l 、M g s 0 4 “ 7 8 2 00 2 5g L 1 、K H 2 P 0 44g - L “ ，c u l t i v a t e di nl i q u i d
9、f e r m e n t a t i o nf o r5 d , t h ee n z y m ea c t i v i t yo fC M C - N ar e a c h e d7 2 5I U m L “ 1 ，c u l t i v a t e df o r6 d ，F P Ar e a c h e d2 5I U m L “ 1 P r o p e r t i e so fc e l l u l o s el i q u i df r o mc s 7 9 1 2c u l t i v a t e di no p t i m a lc o n d i t i o n sw e r
10、ei n v e s t i g a t e d T h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h eo p t i m a lp Ha n dt e m p e r a t u r ew e r e5 2a n d5 0 “ Cr e s p e c t i v e l y W h e ni tr e a c h7 0 “ C ，e n z y m ew i l ll o s ea c t i v i t yn e a r l y ；四川师范大学硕士学位论文F o rC M C a s eA c t i v i t ya n dF P A ，M n 2 + ，C
11、 0 2 + c o u l ds i g n i f i c a n t l yp r o m o t ee n z y m ea c t i v i t y ，W h i l eZ n 2 + ，C u 2 + ，A g + ，H 9 2 + c o u l dr e s t r a i ne n z y m ea c t i v i t y K e y W o r d s ：A c t i n o m y c c s ；C e l l u l a s e ；S c r e e n i n g ；E n z y m ea c t i v i t y ；I l l产纤维素酶放线菌的筛选及其产
12、酶条件与酶学性质初探图1 葡萄糖标准曲线图片目录图2 菌株c s 7 9 12 的孢子链。 图3 摇床转速对产纤维素酶酶活的影响 图4 接种量对产纤维素酶酶活的影响。 图5 培养基装量对产纤维素酶酶活的影响。1 61 82 02 1图6 不同其始p H 值对产纤维素酶酶活的影响2 3 图7 培养温度对产纤维素酶酶活的影响 图8 不同氮源对菌株产纤维素酶酶活的影响 图9 碳源对菌株产纤维素酶酶活的影响图1 0 混合纤维素碳源对产纤维素酶酶活的影响 图1 1 纤维素碳源组合的比例对产纤维素酶酶活的影响2 6 图1 2 酶的最适反应p H 图1 3 酶最适反应温度、，I 四川师范大学硕士学位论文图表
13、目录 表1 不同溶液的加入量 表2 不同菌株透明水解圈( 平均值) 大小。 表3 产酶过程的各个指标变化 表4 菌株c s 7 9 1 2 在不同培养基中的培养特征 表5 菌株的生理生化特征 表6 正交实验结果及极差分析 表7 部分金属离子对纤维素酶活的影响I x71 51 71 81 92 73 0四川师范大学学位论文独创性及使用授权声明本人声明：所呈交学位论文，是4 t 人在导师塞造塑援指导一F ，独立进行研究工作所取得的成果。除义中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承诺：已提
14、交的学位论文电了版与论文纸本的内容致。如冈不符而引起的学术声誉上的损失由本人自负。本人同意所撰写学位论文的使用授权遵照学校的管理规定：学校作为申请学位的条件之一，学位论文著作杈拥有者须授权所在大学拥有学位论文的部分使用权，即：1 ) 已获学位的研究生必须按学校规定提交印刷版和电子版学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索；2 ) 为教学利科研目的，学校可以将公开的学位论文或觯密后的学位论文作为资料存图书馆、资料室等场所或在校园网上供校内师生阅读、浏览。论文作者签名2 0 0 7 年4 月秆、叉，乒夺。刁I，四川师范大学硕士学位论文引言随着石化燃料由短缺变枯竭，能源是人类面
15、临的共同问题。寻找新的能量来源关系到经济的可持续发展乃至人类的生存问题。纤维素与石化燃料不同，它是一种可再生的资源。地球上每年光合作用可产生大于1 0 0 亿吨的植物干物质，其中一半以上是纤维素和半纤维素1 1 1 。另外，人类活动产生的废弃物中也含有大量的纤维素，如农业废物( 稻草、稻壳、秸秆、花生壳、玉米芯、棉籽壳、甘蔗渣等) 、食品加工废物( 果皮、果渣等) 、木材废物( 木屑、树皮) 以及城市废弃物( 4 0 6 0 固体废物是垃圾和废纸) 等。如果能有效地利用生物转化技术将这些纤维素转化成简单塘，再发酵产生乙醇等能源物质，不仅可以变废为宝，而且还可以避免由于化石燃料燃烧所带来的环境污染，更重要的是可以缓解或解决石化能源短缺乃至枯竭所带来世界性能源危机。纤维素酶的特异性高，反应条件比较温和，可避免化学转化所导致的环境污染等，是将这些纤维素物质转化成简单糖的关键。因此，在再生能源利用方面具有很广阔的应用前景。另外，自然界中细菌、真菌、某些无脊椎动物，直至高等植物中都有纤维素酶的存在，因此，纤维素酶的研究还具有普遍的生态意义。纤维素酶是参与纤维素降解的多组分酶的总称。1 8 5 0 年M i l f s c h e r l i c h 首先观察到了微生物分解纤维素的现象；1 9 0
